本文選題：釩 + OMECs　； 參考：《畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)》2017年02期

【摘要】：本試驗(yàn)旨在通過蛋雞輸卵管膨大部上皮細(xì)胞(OMECs)的原代培養(yǎng),構(gòu)建利用偏釩酸銨(V5+)建立氧化應(yīng)激模型的方法。試驗(yàn)選用開產(chǎn)前2~3周齡健康羅曼蛋雞,分離、培養(yǎng)及鑒定OMECs。利用單因素設(shè)計(jì)6個(gè)不同水平的釩濃度(0、25、50、100、250、1 000μmol·L~(-1))處理12h后,測(cè)定細(xì)胞活力、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞活性氧(ROS)的生成,細(xì)胞內(nèi)超氧化物歧化酶(SOD)和過氧化氫酶(CAT)的活性,丙二醛(MDA)的含量,細(xì)胞上清液中乳酸脫氫酶(LDH)的釋放量。結(jié)果表明:1)分離培養(yǎng)的細(xì)胞24h后形成細(xì)胞島,呈"鋪路石樣";免疫熒光染色細(xì)胞抗細(xì)胞角蛋白(CK18)、卵清蛋白(OVA)、雌激素受體1(ESR1)和孕酮受體(PGR)呈陽性,抗波形蛋白呈陰性。2)50和100μmol·L~(-1)的釩處理OMECs 12h后,細(xì)胞活力分別下降到(69.90±2.78)%和(63.60±1.57)%,顯著低于25μmol·L~(-1)釩處理組(P0.05),但是顯著高于250和1 000μmol·L~(-1)釩處理組(P0.05)。3)細(xì)胞凋亡率隨著釩添加量的增多而升高,且各處理組差異顯著(P0.05);1 000μmol·L~(-1)的釩細(xì)胞凋亡率為最高(P0.05)。4)ROS的測(cè)定結(jié)果表明,100和250μmol·L~(-1)釩處理組的FITC相對(duì)平均值顯著高于0μmol·L~(-1)釩處理組(P0.05),且250μmol·L~(-1)釩處理組的FITC相對(duì)平均值顯著高于100μmol·L~(-1)釩處理組(P0.05)。5)50μmol·L~(-1)釩處理組SOD活性顯著低于0μmol·L~(-1)釩處理組(P0.05),但MDA含量差異不顯著。而100μmol·L~(-1)釩處理組的MDA含量顯著升高(P0.05);50和100μmol·L~(-1)釩處理組細(xì)胞CAT活性顯著低于0μmol·L~(-1)釩處理組(P0.05);LDH釋放量隨著釩的添加劑量的增加而升高,1 000μmol·L~(-1)釩處理組LDH的釋放量最高,且100μmol·L~(-1)釩處理組LDH的釋放量顯著高于0μmol·L~(-1)釩處理組(P0.05),達(dá)到141.61±2.81U·gprot-1。綜上表明,OMECs原代細(xì)胞培養(yǎng)成功,在OMEC原代細(xì)胞里添加100μmol·L~(-1)的V5+處理12h,可建立OMECs氧化應(yīng)激模型。
[Abstract]:The purpose of this study was to establish an oxidative stress model using ammonium metavanadate (V5) through primary culture of oviduct expanded epithelial cells (OMECs) of laying hens. OMECs were isolated, cultured and identified from healthy Roman laying hens at the age of 2 and 3 weeks before birth. Six different levels of vanadium were designed by single factor design. After 12 h treatment, cell viability, cell apoptosis, production of reactive oxygen species (Ros), activities of superoxide dismutase (SOD) and catalase (cat), and malondialdehyde (MDA) content were measured. The release of lactate dehydrogenase (LDH) in cell supernatant. The results showed that the cells isolated and cultured 24 hours later were "paving stone like", immunofluorescence staining showed positive expression of anti-cytokeratin (CK18), ovalbumin (OVA), estrogen receptor 1 (ESR1) and progesterone receptor (PGR), and positive expression of cytokeratin (CK18), ovalbumin (OVA), estrogen receptor 1 (ESR1) and progesterone receptor (PGR). The cell viability of OMECs decreased to (69.90 鹵2.78)% and (63.60 鹵1.57) after 12 h treatment with vanadium of 50 and 100 渭 mol L ~ (-1), respectively, which was significantly lower than that of 25 渭 mol L ~ (-1) vanadium treatment (P0.05), but significantly higher than that of 250 and 1 000 渭 mol L ~ (-1) vanadium treatment (P0.05). The apoptosis rate of vanadium cells was the highest (P0.05) in the vanadium cells treated with 渭 mol L-1 and 250 渭 mol L-1. The results showed that the relative average value of FITC in the vanadium treated group was significantly higher than that in the 0 渭 mol L-1 group (P0.05), and the relative average value of FITC in the 250 渭 mol L-1 vanadium treatment group was significantly higher than that in the vanadium treatment group (P0.05), and the relative average value of FITC in the vanadium treated group was significantly higher than that in the vanadium treatment group (P0.05). Sod activity in 50 渭 mol L ~ (-1) vanadium treatment group was significantly lower than that in 0 渭 mol L ~ (-1) vanadium treatment group (P0.05), but there was no significant difference in MDA content. The activity of cat in mol 渭 mol L ~ (-1) vanadium treated group was significantly lower than that in 0 渭 mol L ~ (-1) vanadium treatment group (P0.05), and the release of LDH was the highest in 1 000 渭 mol L ~ (-1) vanadium treatment group with the increase of vanadium additive content, but the content of MDA in the vanadium treatment group was significantly higher than that in the 0 渭 mol L ~ (-1) vanadium treatment group (P < 0.05), and the content of LDH in the vanadium treated group was significantly lower than that in the vanadium treatment group (P < 0.05). The release of LDH in the 141.61 渭 mol L ~ (-1) vanadium treatment group was significantly higher than that in the 0 渭 mol L ~ (-1) vanadium treatment group (P0.05), and reached 141.61 鹵2.81 U / g prot-1. The results showed that the primary cells of OMECs were cultured successfully, and the oxidative stress model of OMECs could be established by adding 100 渭 mol L-1 V5 to the primary cells for 12 h.
【作者單位】： 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物營養(yǎng)研究所動(dòng)物抗病營養(yǎng)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室抗病營養(yǎng)與飼料農(nóng)業(yè)部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(青年項(xiàng)目31402031) 四川省教育廳(青年基金13ZB0290) 科技部科技支撐計(jì)劃(2014BAD13B04) 四川省科技廳(2014NZ0043;2014NZ0002;2013NZ0054)
【分類號(hào)】：S831

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本文編號(hào)：2076965