本文選題：柔嫩艾美耳球蟲 + 頂膜抗原-�。� 參考：《中國動物傳染病學(xué)報》2017年03期

【摘要】：為了篩選與柔嫩艾美耳球蟲頂膜抗原-1(Eimeria tenella apical membrance antigen 1,EtAMA1)存在互作的子孢子蛋白,以柔嫩艾美耳球蟲子孢子c DNA為模板,PCR擴增EtAMA1基因胞外區(qū),將擴增產(chǎn)物與p GEX-6P-1連接,構(gòu)建原核表達質(zhì)粒p GEX-6P-1-EtAMA1,表達、純化重組蛋白EtAMA1-GST。純化的重組蛋白經(jīng)Western blot驗證,結(jié)果顯示在75 k Da處有單一的目的條帶,證實了所獲得的蛋白為EtAMA1-GST融合蛋白。將EtAMA1-GST蛋白、GST蛋白和PBS分別與谷胱甘肽瓊脂糖珠孵育后,再分別與子孢子裂解物共孵育,洗脫液經(jīng)SDS-PAGE分析后,結(jié)果顯示三者之間的條帶明顯不同。將差異條帶切下進行質(zhì)譜分析,對獲得的蛋白質(zhì)肽段與Uniprot中雞球蟲蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫進行Blast比對,初步獲得了10個與EtAMA1存在潛在互作的柔嫩艾美耳球蟲子孢子蛋白,包括微線體蛋白、糖酵解酶類、肌動蛋白相關(guān)因子以及一些保守蛋白等,他們廣泛參與了蟲體的入侵、發(fā)育、能量代謝等生物學(xué)過程。研究結(jié)果為進一步闡明EtAMA1在球蟲入侵宿主細胞中發(fā)揮重要作用的分子機制奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:In order to screen the sporozoite proteins interacting with Eimeria tenella apical membrance antigen 1 and EtAMA1, the extracellular region of EtAMA1 gene was amplified by PCR using Eimeria tenella apical membrance antigen 1 and EtAMA1 as template, and the product was linked to pGEX-6P-1. The prokaryotic expression plasmid pGEX-6P-1-EtAMA1 was constructed, and the recombinant protein EtAMA1-GST-1 was expressed and purified. The purified recombinant protein was confirmed as EtAMA1-GST fusion protein by Western blot. The result showed that there was a single target band at 75 kDa. The GST and PBS of EtAMA1-GST protein were incubated with glutathione agarose beads, and then incubated with the sporozoite lysates respectively. The eluent was analyzed by SDS-PAGE. The results showed that the bands of the three proteins were obviously different. The differential bands were cut off and analyzed by mass spectrometry. The obtained protein peptides were compared with the chicken coccidia protein database in Uniprot by blast. Ten Eimeria tenella spores proteins with potential interaction with EtAMA1 were obtained. Including microsomal proteins, glycolytic enzymes, actin related factors and some conserved proteins, they are widely involved in the biological processes of insect invasion, development, energy metabolism and so on. The results provide a basis for further elucidation of the molecular mechanism of EtAMA1 which plays an important role in the invasion of host cells by coccidia.
【作者單位】： 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所農(nóng)業(yè)部動物寄生蟲學(xué)重點開放實驗室;江蘇省動物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心;上海師范大學(xué)生命與環(huán)境科學(xué)學(xué)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(31672551,31272557) 上海市閔行區(qū)人才發(fā)展專項基金(201351)
【分類號】：S852.723

【參考文獻】

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1 吳健;朱海霞;趙志荀;顏新敏;趙銀龍;吳娜;李健;張志東;張強;李影;吳國華;;蛋白質(zhì)互作研究技術(shù)[J];動物醫(yī)學(xué)進展;2016年02期

2 趙文;王靜;李偉滔;王靜;李曉兵;朱立煌;陳學(xué)偉;;應(yīng)用GST pull-down技術(shù)篩選水稻抗稻瘟病蛋白PID3互作蛋白的研究[J];植物病理學(xué)報;2015年05期

3 柴政斌;張更林;韓金祥;;GST-pulldown技術(shù)在蛋白質(zhì)相互作用中的應(yīng)用[J];中國生物制品學(xué)雜志;2014年10期

4 鄭斌;尹志奎;何藹;詹希美;;弓形蟲MIC6羧基端相互作用蛋白的篩選[J];中國人獸共患病學(xué)報;2011年11期

5 韓紅玉;林矯矯;黃兵;;雞球蟲病疫苗的研究進展[J];中國獸醫(yī)寄生蟲病;2007年06期

6 韓紅玉;林矯矯;黃兵;;雞球蟲入侵相關(guān)分子的研究進展[J];動物醫(yī)學(xué)進展;2007年09期

7 宋翠平,沈永林;雞球蟲體外細胞培養(yǎng)的研究進展[J];中國動物檢疫;1998年02期

8 趙開元,李觀娣,呂文順;雞球蟲子孢子體外脫囊試驗[J];中國獸醫(yī)科技;1985年10期

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1 曹俊;Osamu Kaneko;Amporn Thongkukiatkul;Mayumi Tachibana;Hitoshi Otsuki;Takafumi Tsuboi;Motomi Torii;高琪;;惡性瘧原蟲入侵紅細胞相關(guān)棒狀體頸部蛋白(PfRON2)的研究[A];全國寄生蟲學(xué)與熱帶醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2008年

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2 姜連連;柔嫩艾美耳球蟲DF-1細胞培養(yǎng)體系的建立及EtSerpin，EtAMA1基因功能的初步研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2011年

3 鄭君;柔嫩艾美耳球蟲Rhomboid蛋白與微線蛋白相互作用的研究[D];吉林大學(xué);2011年

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1 楊拓;柔嫩艾美耳球蟲微線蛋白與宿主表皮生長因子受體相互作用的研究[D];吉林大學(xué);2014年

2 柴政斌;利用GST-pull down方法篩查PAD4相互作用蛋白的初步研究[D];濟南大學(xué);2014年

3 李一柯;HCMV主要立即早期蛋白IE_286相互作用蛋白的篩選[D];中南大學(xué);2009年

【共引文獻】

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1 林漢卿;陳紹品;溫貴蘭;汪德生;張升波;徐麗;李昌紅;龔新勇;文明;周碧君;程振濤;;禽白血病病毒貴州流行株gp85基因的序列分析[J];中國家禽;2017年12期

2 楚電峰;劉文亭;馮嫣芳;薄智勇;劉秋云;劉相娥;;Ⅰ群禽腺病毒疫苗研究進展[J];中國家禽;2017年12期

3 張紅云;陳秋英;;禽白血病及其診治技術(shù)研究進展[J];中國動物檢疫;2017年06期

4 欒懷彪;王一新;許書珍;房立春;崔治中;常爽;趙鵬;;中國三種不同地方品系雞對J亞群禽白血病病毒NX0101株易感性的比較[J];中國動物傳染病學(xué)報;2017年03期

5 楚電峰;劉相娥;薄智勇;劉秋云;馮嫣芳;劉文亭;;Ⅰ群禽腺病毒的流行病學(xué)和防控研究現(xiàn)狀[J];中國動物檢疫;2017年05期

6 劉長清;黃秀英;崔治中;;“京紅1號”“京粉1號”種雞核心群禽白血病的凈化[J];中國家禽;2017年09期

7 陳俊霞;范建華;許書珍;孫鵬;王一新;李思菲;韓妮;張言坤;徐步;趙鵬;崔治中;;不同類型雞泄殖腔棉拭子禽白血病病毒p27抗原檢測與病毒分離的相關(guān)性分析[J];中國獸醫(yī)學(xué)報;2017年04期

8 魏彥輝;周榮艷;李祥龍;錫建中;李蘭會;陳輝;張振紅;;抗A亞群禽白血病受體基因在三個雞群中分布的研究[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2017年05期

9 朱靜;沈海玉;竇新紅;許明;;地方蛋雞配套系禽白血病凈化的初步研究[J];中國家禽;2017年05期

10 藺文成;李昕鍵;嚴一銘;戴振凱;張新珩;李廣偉;劉洋;陳峰;謝青梅;;J亞群禽白血病病毒GD14A8株分離鑒定及遺傳進化分析[J];中國獸醫(yī)學(xué)報;2017年02期

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1 鄒廣珍;一株ALV-J全基因序列分析及其RNAi重組腺病毒與DNA疫苗的試驗研究[D];廣西大學(xué);2016年

2 王蓓;J亞群禽白血病病毒AH-J11株全基因組序列分析及其感染性克隆的構(gòu)建[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

【二級參考文獻】

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1 欒維民;楊樹寶;楊麗華;張延林;高晶晶;何昭陽;;雞脾臟中T淋巴細胞及其亞群的發(fā)育[J];中國獸醫(yī)學(xué)報;2008年06期

2 朱猛進;吳珍芳;趙書紅;;豬抗病育種研究進展及對幾個認識問題的討論[J];中國畜牧獸醫(yī);2007年04期

3 成子強;張玲娟;劉杰;劉思當;趙振華;張利;崔治中;;蛋雞中發(fā)現(xiàn)J亞群白血病與網(wǎng)狀內(nèi)皮增生癥自然混合感染[J];中國獸醫(yī)學(xué)報;2006年06期

4 廖賢軍;賴松家;;BoLA在牛抗病育種中的研究進展[J];中國畜牧獸醫(yī);2006年01期

5 成子強,張利,劉思當,張玲娟,崔治中;中國麻雞中發(fā)現(xiàn)禽J亞群白血病[J];微生物學(xué)報;2005年04期

6 姜勛平,劉永剛,熊遠著,鄧昌彥;豬FUT1基因?qū)θ赓|(zhì)和胴體性狀的影響[J];遺傳;2005年04期

7 張志,崔治中,姜世金;從J亞群禽白血病腫瘤中檢測出禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒[J];中國獸醫(yī)學(xué)報;2004年01期

8 許青榮;麻雞馬立克氏病的診斷和防制[J];湖北畜牧獸醫(yī);2003年01期

9 徐鑌蕊,董衛(wèi)星,何召慶,馮小宇,余春明,張麗,任艷麗,L F LEE,Mao-xiang LI;間接熒光抗體法快速診斷海蘭褐蛋雞J亞群禽白血病的研究[J];中國獸醫(yī)雜志;2002年09期

10 崔治中,張志,杜巖;我國肉用型雞群中J亞群白血病流行現(xiàn)狀的調(diào)查[J];中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報;2002年04期

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1 王凱;王建軍;郭玉廣;張學(xué)民;;雞柔嫩艾美耳球蟲病的發(fā)病機制[J];中國畜牧獸醫(yī)文摘;2011年01期

2 ;馬杜霉素水溶劑抗雞柔嫩艾美耳球蟲[J];四川畜禽;1996年02期

3 朱引潔,丁熙成;微球克對雞柔嫩艾美耳球蟲的預(yù)防效果試驗[J];中國獸醫(yī)雜志;2001年10期

4 史喜菊,鄭明學(xué),高建廣,韓春來,劉美麗;雞柔嫩艾美耳球蟲病流行病學(xué)研究進展[J];山西農(nóng)業(yè)科學(xué);2001年01期

5 金嶺梅 ,孟新宇 ,趙枝新 ,趙其平 ,王米 ,鐘允安;抗柔嫩艾美耳球蟲植物性制劑效力篩選試驗[J];中國飼料;2003年23期

6 顧有方,朱桂蘭;地克珠利抗柔嫩艾美耳球蟲鳳陽地理株的效果觀察[J];畜牧與獸醫(yī);2003年03期

7 明慶磊,程超,朱必才,胡孝忠;柔嫩艾美耳球蟲早熟株的選育及其免疫原性研究[J];徐州師范大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2003年03期

8 楊世華,余澤平,劉麗貞;不同藥物治療不同感染時期的雞柔嫩艾美耳球蟲病效果試驗[J];江西畜牧獸醫(yī)雜志;2004年01期

9 王天奇,范文利,董發(fā)明,龍塔,張玲;中藥煎劑抗雞柔嫩艾美耳球蟲的效果研究[J];中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志;2005年02期

10 金嶺梅,鐘允安,孟新宇,趙枝新;柔嫩艾美耳球蟲感染對肉仔雞糞便水分的影響[J];家畜生態(tài)學(xué)報;2005年03期

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3 安健;王黎霞;陳雪;趙忠才;孫素芳;蔣民;;15種中藥粉劑對柔嫩艾美耳球蟲的控制效果[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會獸醫(yī)病理學(xué)分會第十五次、中國病理生理學(xué)會動物病生專業(yè)委員會第十四次學(xué)術(shù)討論會論文集[C];2007年

4 顏彥;韓紅玉;黃兵;姜連連;董輝;趙其平;;柔嫩艾美耳球蟲小熱激蛋白基因的克隆與表達[A];全國寄生蟲學(xué)與熱帶醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2008年

5 曾明華;張祝明;;4株柔嫩艾美耳球蟲耐藥性檢測[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會獸醫(yī)藥理毒理學(xué)分會第九次學(xué)術(shù)討論會論文與摘要集[C];2006年

6 李佩國;張香齋;李蘊玉;賈青輝;;復(fù)方中草藥對感染柔嫩艾美耳球蟲肉仔雞血清中尿酸、肌酐的影響[A];全國動物生理生化第九次學(xué)術(shù)交流會論文摘要匯編[C];2006年

7 李佩國;張香齋;李蘊玉;賈青輝;;復(fù)方中草藥對感染柔嫩艾美耳球蟲的肉仔雞血清中若干抗氧化指標的影響[A];全國動物生理生化第九次學(xué)術(shù)交流會論文摘要匯編[C];2006年

8 李建梅;劉梅;沈欣悅;程旭;殷建玫;尤素蘭;蘇一軍;戴亞斌;陶建平;;八個品種雞對柔嫩艾美耳球蟲的易感性研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家禽學(xué)分會第九次代表會議暨第十六次全國家禽學(xué)術(shù)討論會論文集[C];2013年

9 包永占;秦建華;馬志平;劉迎;史萬玉;鐘秀會;;“禽球靈”對柔嫩艾美耳球蟲感染雛雞血液生理指標的影響[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜寄生蟲學(xué)分會第六次代表大會暨第十次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2009年

10 馬衛(wèi)嬌;韓紅玉;黃兵;姜連連;董輝;程軍;趙其平;朱順海;曾艷波;;柔嫩艾美耳球蟲表面抗原基因的初步研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會禽病學(xué)分會第十五次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2010年

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1 武斌;柔嫩艾美耳球蟲病毒全基因組序列測定及轉(zhuǎn)染載體的構(gòu)建[D];吉林大學(xué);2016年

2 李佩國;河北省雞柔嫩艾美耳球蟲地方株的耐藥性檢測[D];吉林大學(xué);2010年

3 劉立恒;柔嫩艾美耳球蟲比較蛋白組及免疫蛋白組研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

4 劉任強;柔嫩艾美耳球蟲組織蛋白酶B和L的生物學(xué)特性研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

5 張德福;氫溴酸常山酮抗柔嫩艾美耳球蟲作用研究[D];浙江大學(xué);2012年

6 趙娜;柔嫩艾美耳球蟲端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶互作蛋白的篩選及功能研究[D];吉林大學(xué);2015年

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1 翟頎;柔嫩艾美耳球蟲兩個保守蛋白的初步研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

2 左云云;柔嫩艾美耳球蟲組蛋白去乙酰化酶Sir2克隆表達及表達動態(tài)分析[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

3 林雨鑫;京海黃雞柔嫩艾美耳球蟲感染后盲腸轉(zhuǎn)錄組分析及其雜交配套系親本的抗性評價[D];揚州大學(xué);2015年

4 馬慶濤;青蒿素與DVD聯(lián)合用藥對雞柔嫩艾美耳球蟲感染的療效研究[D];揚州大學(xué);2015年

5 張藜瀟;攜病毒柔嫩艾美耳球蟲誘導(dǎo)宿主TLRs表達及細胞因子分泌的研究[D];吉林大學(xué);2016年

6 王自文;柔嫩艾美耳球蟲鈣依賴蛋白激酶4功能特性的初步研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2016年

7 朱雪龍;柔嫩艾美耳球蟲絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶特性研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2016年

8 李聰;柔嫩艾美耳球蟲胱硫醚β合成酶和保守蛋白CHP317特性的初步研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2016年

9 劉利利;沙咪珠利抗柔嫩艾美耳球蟲作用機理的初步研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2016年

10 劉旭;幾種微生態(tài)制劑對雞柔嫩艾美耳球蟲抗球蟲效果的研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

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本文編號：2076984