本文選題：禽流感 + 乳酸菌�。� 參考：《吉林農(nóng)業(yè)大學》2016年碩士論文

【摘要】：禽流感(Avian influenza,AI)是全球范圍內(nèi)廣為流行的禽類急性高度傳染性疾病之一,近幾十年來不僅給我國的養(yǎng)禽業(yè)造成了重大的經(jīng)濟損失、而且引起威脅人類健康的嚴重公共衛(wèi)生學問題。目前,接種疫苗仍然是控制禽流感的最有效的方法,由于傳統(tǒng)的疫苗多為滅活疫苗,雖安全性較好、但其免疫效果不理想,所以研制新型的口服黏膜免疫的通用型微生物制劑將具有更廣闊的應用前景。本研究選用乳酸菌作為外源蛋白的遞送載體,將禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)的血凝素基因HA2與主要保護性抗原M2e蛋白基因融合在一起,研制了HA2融合M2e基因的重組新功能型乳酸菌并對其免疫效果進行初步評價。具體研究內(nèi)容及結(jié)果如下:(1)乳酸菌p SIP409-pgs A-3M2e-HA2、p SIP409-pgs A-HA2的制備及反應原性分析本文通過酶切、連接、轉(zhuǎn)化等方法制備了兩個重組質(zhì)粒p SIP409-pgs A-3M2e-HA2和質(zhì)粒p SIP409-pgs A-HA2。將該質(zhì)粒電轉(zhuǎn)入受體菌植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)NC8中,并用誘導肽Spp IP誘導表達,利用Western blotting分析乳酸菌表達蛋白的反應原性,結(jié)果表明新功能型乳酸菌p SIP409-pgs A-3M2e-HA2和p SIP409-pgs A-HA2所表達的外源蛋白均具有良好的反應原性,為下一步實驗奠定基礎。(2)乳酸菌pSIP409-pgsA-3M2e-HA2和pSIP409-pgsA-HA2免疫保護效果比較與評價將實驗雛雞分6組,每組20只。分別將已成功制備的p SIP409-pgs A-3M2e-HA2和p SIP409-pgs A-HA2兩組乳酸菌和本實驗室已經(jīng)構(gòu)建的p SIP409-pgs A-3M2e和的p SIP409-pgs A共四種乳酸菌對雛雞進行初次免疫和加強免疫,同時設計空白對照組與H9N2亞型禽流感滅活疫苗組。初免從21天開始,連續(xù)3天,間隔14天之后加強免疫,連續(xù)3天。間隔3天后殺雞取樣,通過流式細胞術和淋巴細胞增殖檢測各組雛雞脾臟中的T淋巴細胞的活化與增殖情況,從而來檢測新功能型乳酸菌對雛雞的免疫保護效果。此外,分別收取各組雛雞的血清和氣管灌洗液,并用間接ELISA方法檢測雛雞特異性的Ig G抗體和分泌型抗體SIg A(Secretory immunoglobulin A,SIg A)的表達水平。雛雞加強免疫后一周后通過滴鼻方式感染鶴源和鴨源兩種不同源的H9N2亞型禽流感病毒,攻毒后觀察雛雞的精神狀態(tài)并記錄雛雞的體重變化。攻毒后10天宰殺雛雞并取肺臟和喉頭,制成病理切片,通過HE染色觀察并比較肺臟和喉頭病理變化。更進一步檢測并評價新功能型乳酸菌對雛雞的免疫保護效果。結(jié)果顯示,雛雞口服免疫新功能型乳酸菌p SIP409-pgs A-3M2e-HA2、p SIP409-pgs A-HA2和p SIP409-pgs A-3M2e后雛雞的脾臟中的T淋巴細胞數(shù)量相比空白對照組顯著增高,其中p SIP409-pgs A-3M2e-HA2組和p SIP409-pgs A-HA2組差異極顯著(P0.001)。血清及氣管灌洗液中的特異性抗體的表達水平p SIP409-pgs A-3M2e-HA2組和p SIP409-pgs A-HA2組差異極顯著(P0.05)。觀察和比較各組雛雞感染病毒后精神狀態(tài)結(jié)果顯示p SIP409-pgs A-3M2e-HA2組和p SIP409-pgs A-HA2組雛雞先呈現(xiàn)精神不振、采食量下降等狀態(tài),但隨后逐漸恢復正常,而空白對照組則持續(xù)呈現(xiàn)發(fā)病狀態(tài)。感染兩種病毒后雛雞體重變化規(guī)律基本相同,結(jié)果顯示p SIP409-pgs A-3M2e-HA2和p SIP409-pgs A-HA2組雛雞體重開始逐漸下降,第6天達到最低,隨后體重開始增加,而空白對照組雛雞體重持續(xù)下降。肺臟及喉頭病理切片結(jié)果顯示p SIP409-pgs A-3M2e-HA2和p SIP409-pgs A-HA2組雛雞的病理癥狀較輕。以上結(jié)果表明新功能型乳酸菌對H9N2亞型流感病毒的不同毒株均有保護作用,并且p SIP409-pgs A-3M2e-HA2和p SIP409-pgs A-HA2乳酸菌的免疫保護效果更好。說明HA2作為禽流感病毒的血凝素的保守抗原針對不同的禽H9N2亞型流感病毒都有較強的保護效果,同時發(fā)現(xiàn)了共表達M2e基因的融合新功能型乳酸菌更能增強機體抵抗AIV攻擊的能力,以上結(jié)果為研制抗禽流感的新功能型微生態(tài)制劑提供了理論依據(jù)。
[Abstract]:Avian influenza (AI) is one of the most popular avian acute infectious diseases in the world. In recent decades, it has not only caused serious economic losses to the poultry industry in China, but also caused serious public health problems threatening human health. At present, vaccination is still the most effective way to control avian influenza. Because the traditional vaccine is mostly inactivated vaccine, although the safety is good, but its immune effect is not ideal, so the development of a new type of oral mucosal immune general microbial preparation will have a wider application prospect. This study selects the lactic acid bacteria as the delivery carrier of foreign protein and Avian influenza virus (AIV). The fusion of the hemagglutinin gene HA2 and the main protective antigen M2e protein gene has been developed and the recombinant new functional lactic acid bacteria with HA2 fusion M2e gene are developed and its immune effect is preliminarily evaluated. The specific contents and results are as follows: (1) the preparation of P SIP409-pgs A-3M2e-HA2, the preparation of P SIP409-pgs A-HA2 and the analysis of the reactivity Two recombinant plasmids P SIP409-pgs A-3M2e-HA2 and plasmid P SIP409-pgs A-HA2. were prepared by over enzyme digestion, connection and transformation. The plasmid was transferred into the NC8 of Lactobacillus plantarum (Lactobacillus plantarum), and was induced by inducible peptide Spp IP. The exogenous proteins expressed in the new functional lactic acid bacteria P SIP409-pgs A-3M2e-HA2 and P SIP409-pgs A-HA2 all have good reactivity and lay the foundation for the next experiment. (2) the comparison and evaluation of the immune protection effect of lactic acid bacteria pSIP409-pgsA-3M2e-HA2 and pSIP409-pgsA-HA2, the experimental chickens were divided into 6 groups, each group was 20. SIP409-pgs A-3M2e-HA2 and P SIP409-pgs A-HA2 two groups of lactic acid bacteria, P SIP409-pgs A-3M2e and P SIP409-pgs A four kinds of lactic acid bacteria were first immunized and strengthened in chicks. At the same time, the blank control group and the H9N2 subtype avian influenza inactivated vaccine group were designed. The initial immunity began from 21 days, 3 days in a continuous period and 14 days interval. After 3 days of immunization, the chickens were sampled for 3 days. The activation and proliferation of T lymphocytes in the spleen of the chickens were detected by flow cytometry and lymphocyte proliferation, so as to detect the protective effect of the new functional Lactobacillus on the chickens. ELISA method was used to detect the expression level of Ig G antibody and secretory antibody SIg A (Secretory immunoglobulin A, SIg A). After a week of immunization, chickens infected with two different sources of the crane source and duck source were infected with the H9N2 subtype of avian influenza virus. After attack, the spirit state of the chicks was observed and the body weight changes of the chicks were recorded. 10 days after the attack, the chicks were slaughtered and the lungs and larynx were taken to make pathological sections. HE staining was used to observe and compare the pathological changes of the lungs and larynx. The immune protection effect of the new functional lactic acid bacteria to the chicks was further detected and evaluated. The results showed that the chickens were immunized with new functional lactic acid bacteria P SIP409-pgs A-3M2e-HA2, P SIP409-pgs A-H The number of T lymphocytes in the spleen of A2 and P SIP409-pgs A-3M2e was significantly higher than that in the blank control group, and the difference between the P SIP409-pgs A-3M2e-HA2 group and P SIP409-pgs A-HA2 group was very significant (P0.001). Very significant (P0.05). Observation and comparison of the mental state of chickens infected with virus in each group showed that the chicks of the P SIP409-pgs A-3M2e-HA2 group and the P SIP409-pgs A-HA2 group first presented the state of discomfort and feed intake, but then gradually recovered to normal, while the blank control group continued to appear in the present state. The change of the body weight of the chickens after the two viruses was infected. The rules were basically the same, the results showed that the body weight of P SIP409-pgs A-3M2e-HA2 and P SIP409-pgs A-HA2 group began to decline gradually, the sixth days reached the lowest, then the body weight began to increase, while the blank control group of chick body weight continued to decrease. The pathological section of lung and throat pathology showed the pathology of P SIP409-pgs A-3M2e-HA2 and P SIP409-pgs A-HA2 group. The above results showed that the new functional lactobacillus has protective effect on different strains of H9N2 subtype influenza virus, and the immune protection effect of P SIP409-pgs A-3M2e-HA2 and P SIP409-pgs A-HA2 lactic acid bacteria is better. It shows that HA2 as the conserved antigen of the hemagglutinin of avian influenza virus is directed against the different avian influenza virus of different avian influenza viruses It has a strong protective effect. At the same time, the new functional lactic acid bacteria, which co express M2e gene, can enhance the ability of resisting AIV attack. The above results provide a theoretical basis for the development of new functional microecosystem for anti avian influenza.
【學位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S855.3

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 ;美研制出抗禽流感新藥[J];中國禽業(yè)導刊;2000年20期

2 徐兆煒;禽流感1999年近況[J];預防醫(yī)學情報雜志;2000年02期

3 謝健屏;禽流感病毒[J];中國臨床醫(yī)生;2000年04期

4 ;禽流感的病毒特性[J];中國家禽;2001年05期

5 ;禽流感高免球蛋白效果好[J];中國家禽;2001年08期

6 ;農(nóng)業(yè)部、國家質(zhì)檢總局、外經(jīng)貿(mào)部發(fā)出緊急通知 要求嚴堵禽流感[J];內(nèi)蒙古畜牧科學;2001年03期

7 ;農(nóng)業(yè)部等緊急通知各地嚴防禽流感[J];四川畜牧獸醫(yī);2001年06期

8 羅開健,沈祥廣,蘇鴻程,勞秋紅;禽泰克對禽流感的防治效果試驗[J];養(yǎng)禽與禽病防治;2001年02期

9 盧建紅;禽流感的危害[J];湖南農(nóng)業(yè);2001年03期

10 魏鳳祥,周琦,張萍,葉喜永;加強禽流感診斷 提高預防能力[J];中國動物保健;2001年06期

相關會議論文 前10條

1 孫曉林;;禽流感和公共衛(wèi)生[A];中國畜牧獸醫(yī)學會獸醫(yī)病理學分第12次暨中國動物病理生理學專業(yè)委員會第11次學術討論會論文集[C];2003年

2 何義林;葉冬青;;禽流感病毒對人類感染機制的研究進展[A];第二屆全國人畜共患病學術研討會論文集[C];2008年

3 春陽;李東;;再論“以科學發(fā)展觀應對禽流感事件”——評禽流感病毒變種兩次恐慌論[A];首屆中國黃羽肉雞行業(yè)發(fā)展大會會刊[C];2008年

4 鄧潔麗;段明星;俞初一;江龍;;聚聯(lián)乙炔有序組裝體在識別禽流感病毒方面的應用研究[A];中國化學會第十二屆膠體與界面化學會議論文摘要集[C];2009年

5 孫恩澤;謝敏;趙海粟;黃碧海;劉書琳;張萬坡;張志凌;王漢中;龐代文;;量子點標記禽流感病毒[A];第六屆全國化學生物學學術會議論文摘要集[C];2009年

6 黃志堅;陳強;李清祿;王壽昆;江和基;;不同消毒劑對禽流感病毒的殺滅試驗[A];福建省科協(xié)第八屆學術年會分會場“轉(zhuǎn)變飼養(yǎng)方式，，促進海西畜牧業(yè)和諧發(fā)展”學術年會論文集[C];2008年

7 周祖華;張敏;程禮明;徐彬;沈彩信;;禽流感流行趨勢分析[A];全國人畜共患病學術研討會論文集[C];2006年

8 王志宇;張議文;劉桂林;;禽流感病毒的分子生物學研究進展[A];全國動物生理生化第十一次學術交流會論文摘要匯編[C];2010年

9 劉迎芳;饒子和;;禽流感病毒(H5N1)RNA聚合酶PA亞基相關三維晶體結(jié)構(gòu)與功能分析[A];第十一次中國生物物理學術大會暨第九屆全國會員代表大會摘要集[C];2009年

10 韋婷;胡杰;蘭彬;陸文俊;蘇凱;覃芳蕓;;廣西暴發(fā)中低毒力禽流感情況報告[A];中國畜牧獸醫(yī)學會禽病學會分會第十次學術研討會論文集[C];2000年

相關重要報紙文章 前10條

1 農(nóng)業(yè)部動物疫病診斷與流行病學中心主任 崔尚金 博士;候鳥發(fā)生禽流感給我們的警示[N];中國畜牧獸醫(yī)報;2005年

2 莫書瑩;世衛(wèi)警告：禽流感或大流行全球經(jīng)濟應警惕[N];第一財經(jīng)日報;2005年

3 本報記者 魏紅欣;禽流感“啄”痛全球經(jīng)濟[N];國際金融報;2005年

4 本報記者　許凱;狙擊禽流感：一場鳥與人的戰(zhàn)爭[N];國際金融報;2005年

5 新華社記者　楊愛國;防控禽流感需要加強國際合作[N];光明日報;2005年

6 李楊;禽流感疫情不會長期影響農(nóng)產(chǎn)品期價[N];金融時報;2005年

7 羅政、夏文輝;香港強化防止禽流感措施[N];人民日報海外版;2004年

8 本報記者　張向永　趙秀芹;禽流感讓全世界手牽手[N];市場報;2005年

9 ;禽流感病毒能否絕跡？[N];中國石油報;2004年

10 何源;嚴防禽流感從境外傳入我國[N];中國食品質(zhì)量報;2005年

相關博士學位論文 前10條

1 鄒鎮(zhèn);H5N1型禽流感病毒和甲型H1N1流感病毒致急性呼吸損傷的機理研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2012年

2 趙蔚;基于磁分離和熒光量子點標記的高靈敏禽流感病毒檢測[D];武漢大學;2012年

3 區(qū)嘉賢;H7N9禽流感患者的臨床特征及預后分析[D];復旦大學;2014年

4 劉三紅;禽流感的數(shù)學建模及數(shù)值模擬[D];華中師范大學;2015年

5 樊兆斌;野鳥源禽流感病毒(AIV)分離株的遺傳進化及其致病性研究[D];東北林業(yè)大學;2014年

6 桑曉宇;H9N2亞型禽流感病毒在豚鼠模型中水平傳播的分子機制研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2015年

7 楊文濤;靶向樹突狀細胞通用型禽流感病毒重組乳酸菌的研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學;2015年

8 石霖;北方某省主要亞型禽流感現(xiàn)地調(diào)查分析及RT-LAMP檢測方法研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學;2015年

9 張曉劍;HA蛋白糖基化修飾對H5N1亞型禽流感病毒復制、致病性和抗原性的影響[D];揚州大學;2014年

10 朱聞斐;H7N9禽流感病毒致病與傳播機制研究[D];中國疾病預防控制中心;2015年

相關碩士學位論文 前10條

1 高曉龍;2014年度中國東部候鳥禽流感病毒分離與鑒定[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2015年

2 徐曉龍;H5和H7亞型禽流感病毒熒光定量RT-PCR檢測方法的建立[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2015年

3 曾寒飛;四川省雞場禽流感免疫程序調(diào)查及抗體水平監(jiān)測[D];四川農(nóng)業(yè)大學;2014年

4 陳琳;H9N2亞型禽流感病毒的分離鑒定及其遺傳進化分析[D];福建農(nóng)林大學;2015年

5 任瑞琦;人感染H7N9禽流感流行病學特征及發(fā)病危險因素研究[D];中國疾病預防控制中心;2015年

6 劉曉燕;H7亞型禽流感病毒單克隆抗體的制備及膠體金免疫層析試紙條的研制[D];南京農(nóng)業(yè)大學;2014年

7 宋洋銘;Clade7.2 H5亞型禽流感病毒抗原性變異的分子機制[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學;2016年

8 鐘穎;禽H9N2亞型流感病毒滅活疫苗的初步研究[D];吉林大學;2016年

9 呂春林;廣州市“生鮮雞”政策執(zhí)行難問題的研究[D];暨南大學;2016年

10 趙翔;鄱陽湖地區(qū)鴨禽流感病毒分子流行病學解析與耐藥性初探[D];北京農(nóng)學院;2016年

本文編號：2043556