本文選題：基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1 + 上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化　； 參考：《西北農(nóng)林科技大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：奶牛乳腺炎是由于奶牛機(jī)體代謝和生理狀態(tài)改變、乳房損傷及接觸傳染性或環(huán)境性病原微生物等引起的乳腺炎癥反應(yīng)。大量的文獻(xiàn)已經(jīng)證實(shí)乳腺組織中的乳腺上皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等組成了乳腺組織的細(xì)胞免疫系統(tǒng),共同參與乳牛乳腺炎的免疫應(yīng)答。成纖維細(xì)胞是乳腺組織中數(shù)量最多的基質(zhì)細(xì)胞,但其在奶牛乳腺炎和乳腺炎遷延不愈導(dǎo)致乳腺纖維化中的作用及機(jī)制尚不明確。本研究通過對比從奶牛炎性乳腺組織中分離的成纖維細(xì)胞(inflammatoryfibroblasts,INFs)和從正常乳腺組織分離的成纖維細(xì)胞(normalfibroblasts,NFs)的細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)蛋白和炎癥相關(guān)因子的表達(dá)或分泌水平等基本生物學(xué)特性的差異,明確基質(zhì)成纖維細(xì)胞是否參與在奶牛乳腺炎疾病過程中;并進(jìn)一步研究了在INFs中表達(dá)明顯上調(diào)的基質(zhì)衍生因子1(stromal cell derived factor-1,SDF-1)對奶牛乳腺上皮細(xì)胞生物學(xué)功能的影響及機(jī)制,進(jìn)而探究成纖維細(xì)胞在乳腺炎以及乳腺纖維化發(fā)生發(fā)展過程中的作用,這一研究對奶牛乳腺炎及纖維化的防治具有重要的意義。本研究首先運(yùn)用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(qRCR)和蛋白印跡技術(shù)(Western blot)檢測ECM蛋白Ⅰ型膠原蛋白(Collagen-1)、波形蛋白(Vimentin)及基質(zhì)金屬蛋白酶-1(MMP-1)基因水平和蛋白水平的表達(dá);通過qRCR和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)分別檢測了細(xì)胞因子和趨化因子IL-8、CXCL2和SDF-1的基因和蛋白水平的表達(dá);通過細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測兩種成纖維細(xì)胞的遷移能力;利用代表大腸桿菌毒力成分的脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)和代表金黃色葡萄球菌毒力成分的脂磷壁酸(lipoteichoic acid,LTA)建立體外的誘導(dǎo)的成纖維細(xì)胞模型檢測ECM相關(guān)蛋白,細(xì)胞因子和趨化因子的蛋白水平表達(dá)。通過以上從不同角度對INFs和NFs生物學(xué)特性的對比,明確成纖維細(xì)胞是否參與奶牛乳腺的炎癥過程。然后,通過建立成纖維細(xì)胞和乳腺上皮細(xì)胞的體外間接共培養(yǎng)模式,研究INFs對乳腺上皮細(xì)胞形態(tài)變化及EMT(epithelial-mesenchymal transition)標(biāo)志分子如α平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和角蛋白(Cytokeratin)表達(dá)的影響;并進(jìn)一步通過一系列分子生物學(xué)的方法研究了在INFs中高表達(dá)的SDF-1對乳腺上皮細(xì)胞的影響及分子機(jī)制。最后,通過建立SDF-1誘導(dǎo)的體外乳腺炎小鼠模型驗(yàn)證SDF-1的促炎性和促纖維化作用。結(jié)果顯示,Collagen-1、Vimentin、MMP-1等ECM蛋白和IL-8、CXCL2和SDF-1等炎性相關(guān)因子在INFs、LPS以及LTA誘導(dǎo)的成纖維細(xì)胞中的表達(dá)或分泌水平均明顯高于NFs,表明成纖維細(xì)胞參與在奶牛乳腺的炎癥應(yīng)答過程。體外共培養(yǎng)結(jié)果顯示,INFs可誘導(dǎo)乳腺上皮細(xì)胞的形態(tài)從鋪路石樣轉(zhuǎn)變?yōu)樗笮?并促進(jìn)EMT標(biāo)志分子α-SMA和Cytokeratin的表達(dá),表明在共培養(yǎng)條件下,INFs可誘導(dǎo)乳腺上皮細(xì)胞發(fā)生EMT。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn),LPS和LTA處理后的NFs,以及炎性乳腺組織中SDF-1的表達(dá)或分泌都高于正常對照組。外源性SDF-1通過激活NF-κB通路促進(jìn)乳腺上皮細(xì)胞發(fā)生EMT,誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)并抑制細(xì)胞增殖。此外,體內(nèi)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)SDF-1在小鼠乳腺中能夠誘發(fā)乳腺炎和輕微的纖維化,而SDF-1的特異性抑制劑可以減輕這一現(xiàn)象,結(jié)果表明INFs分泌SDF1介導(dǎo)其對乳腺上皮細(xì)EMT和炎性誘導(dǎo)過程。綜上所述,本研究表明奶牛乳腺在炎癥狀態(tài)下,基質(zhì)成纖維細(xì)胞通過分泌SDF-1促進(jìn)乳腺上皮細(xì)胞EMT和炎癥反應(yīng)的發(fā)生,進(jìn)而參與乳腺炎及其遷延所致乳腺纖維化。這一發(fā)現(xiàn)從新的角度初步闡明了炎性狀態(tài)下的乳腺間質(zhì)成纖維細(xì)胞對上皮細(xì)胞的作用,為進(jìn)一步探究乳腺炎及乳腺纖維化的發(fā)生機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:In this study , the effects of matrix - derived factor - 1 ( SDF - 1 ) on the biological function of bovine mammary epithelial cells were investigated by means of quantitative polymerase chain reaction ( qRCR ) and Western blot . In vitro co - culture showed that the expression or secretion of SDF - 1 in mammary epithelial cells was higher than that of normal control group . The results showed that the expression or secretion of SDF - 1 in mammary epithelial cells was higher than that of normal control group .
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S858.23

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8 王春t，

本文編號：2036776