本文選題：表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR) + 多克隆抗體　； 參考：《西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)》2017年12期

【摘要】：【目的】原核表達(dá)奶山羊表皮生長(zhǎng)因子受體(epidermal growth factor receptor,EGFR)蛋白胞外區(qū)25-644位共620個(gè)氨基酸序列(ECD序列),純化蛋白并免疫家兔,制備針對(duì)山羊EGFR蛋白的特異性多克隆抗體,為山羊EGFR蛋白功能研究奠定基礎(chǔ)�！痉椒ā恳詐MD19-T-EGFR為模板,采用PCR方法擴(kuò)增得到EGFR胞外區(qū)(ECD)基因序列。將ECD序列連接pET-32a(+)質(zhì)粒構(gòu)建pET-32a(+)-ECD原核表達(dá)載體,將該重組載體導(dǎo)入大腸桿菌BL21(DE3)中并誘導(dǎo)表達(dá)。通過Ni-Charged MagBeads純化重組蛋白后免疫2月齡白色獺兔,采用間接ELISA(iELISA)法測(cè)定抗體效價(jià),Western blot檢測(cè)抗體特異性�！窘Y(jié)果】PCR擴(kuò)增得到1 860bp的EGFR胞外區(qū)基因序列,成功構(gòu)建pET-32a(+)-ECD載體。加入終濃度為0.8mmol/L的IPTG,于37℃誘導(dǎo)表達(dá)6h成功得到重組蛋白,該蛋白分子質(zhì)量約94ku,且為以包涵體形式存在的變性蛋白。iELISA檢測(cè)抗體效價(jià)為1∶16 000;Western blot檢測(cè)表明,制備的多克隆抗體能特異性識(shí)別原核表達(dá)的ECD蛋白及在山羊乳腺上皮細(xì)胞和HEK293細(xì)胞中的EGFR蛋白�！窘Y(jié)論】成功制備山羊EGFR多克隆抗體,該抗體可以用于科研試驗(yàn)。
[Abstract]:[Objective] to express epidermal growth factor receptor (EGFR) receptor (ECD sequence) in the outer region of the epidermal growth factor receptor (factor receptor, EGFR) protein of milk goat, to purify the protein and immunize the rabbit, to prepare the specific polyclonal antibody against the goat EGFR protein, and to lay the foundation for the study of the function of goat EGFR protein. PMD19-T-EGFR was used as a template to amplify the EGFR extracellular domain (ECD) gene sequence by PCR method. The ECD sequence was connected to pET-32a (+) plasmid to construct pET-32a (+) -ECD prokaryotic expression vector, and the recombinant vector was introduced into the Escherichia coli BL21 (DE3) and induced expression. 2 month old White Rex rabbits were immunized with the purified recombinant protein by Ni-Charged MagBeads. The antibody titer was measured by ELISA (iELISA) method and the specificity of the antibody was detected by Western blot. [results] PCR amplified to 1 860bp EGFR extracellular domain gene sequence and successfully constructed pET-32a (+) -ECD carrier. The antibody titer of the modified protein.IELISA in the form was 1: 16000, and the Western blot detection showed that the prepared polyclonal antibody could specifically identify the ECD protein expressed in the prokaryotic cell and the EGFR protein in the goat mammary epithelial cells and HEK293 cells. [Conclusion] the goat EGFR polyclonal antibody was successfully prepared, and the antibody could be used for scientific research. Test.
【作者單位】： 西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院陜西省農(nóng)業(yè)分子生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31672398) 陜西省科技統(tǒng)籌創(chuàng)新工程計(jì)劃項(xiàng)目(2016KTZDNY02-05)
【分類號(hào)】：Q78;S827

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本文編號(hào)：1997249