本文選題：熒光定量PCR + 轉(zhuǎn)基因絨山羊��； 參考：《中國獸醫(yī)學(xué)報》2017年08期

【摘要】：外源基因拷貝數(shù)是轉(zhuǎn)基因動物檢測中的重要內(nèi)容。本實驗室使用PiggyBac(PB)轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)獲得Tβ4-GFP、FGF5s-GFP、VEGF164-GFP 3種轉(zhuǎn)基因類型陜北白絨山羊,為研究其外源基因整合情況,利用熒光定量PCR方法對其外源基因copGFP的整合拷貝數(shù)進行檢測。以Gluc為內(nèi)參基因,建立外源基因和內(nèi)參基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程,對轉(zhuǎn)基因陜北白絨山羊DNA進行熒光定量PCR,將copGFP/Gluc的比率作為外源基因的拷貝數(shù)。同時,選取Tβ4-GFP轉(zhuǎn)基因絨山羊?qū)ζ湔衔稽c進行檢測,以驗證拷貝數(shù)結(jié)果。結(jié)果顯示:copGFP與Gluc的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程分別為,y=-3.230 6x+39.216(R~2=0.998 8)、y=-3.564 8x+38.440(R~2=0.996 0);成功得到9只轉(zhuǎn)基因絨山羊的整合拷貝數(shù);Tβ4-GFP轉(zhuǎn)基因絨山羊整合位點數(shù)目和拷貝數(shù)檢測結(jié)果一致。結(jié)果表明,利用熒光定量PCR檢測轉(zhuǎn)基因絨山羊外源基因整合拷貝數(shù),操作簡單、靈敏方便,是一種切實可行的檢測方法。
[Abstract]:Copy number of foreign genes is an important part of transgenic animal detection. In order to study the integration of exogenous genes of T 尾 4-GFP-FGF5s-GFP-VEGF164-GFP, three transtransposon systems of Piggy Bacillus were used to study the integration of exogenous genes in Northern Shaanxi White Cashmere Goats. The integrated copy number of exogenous gene copGFP was detected by fluorescence quantitative PCR. Using Gluc as internal reference gene, the standard curve equation of exogenous gene and internal reference gene was established. The DNA of transgenic Shanbei white cashmere goat was quantified by fluorescence PCR.The copGFP / Gluc ratio was used as the copy number of exogenous gene. At the same time, T 尾 4-GFP transgenic cashmere goats were selected to detect their integration sites to verify the results of copy number. The results showed that the standard curve equations for the two transgenic cashmere goats were: yyyyun-3.2306x 39.216kW ~ (20.998) -3.564 8x 38.440R2O0.9600.The number of integrative copies of 9 transgenic cashmere goats was identical with that of T 尾 _ 4-GFP transgenic cashmere goats by detection of the number of integrative sites and the number of copies of the transgenic Cashmere Goats (T 尾 _ 4-GFP). The results showed that the number of integrative sites in 9 transgenic Cashmere Goats was identical with that of Gluc goats. The results showed that FQ-PCR was a simple, sensitive and convenient method for detecting the integrated copy number of exogenous genes in transgenic cashmere goats.
【作者單位】： 西北農(nóng)林科技大學(xué)動物科技學(xué)院;榆林學(xué)院生命科學(xué)研究中心;陜西省陜北白絨山羊工程技術(shù)研究中心;
【基金】：高產(chǎn)絨量轉(zhuǎn)基因絨山羊新品種培育專項資助項目(2014ZX08008-002) 國家絨毛用羊產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系(舍飼半舍飼營養(yǎng)崗位)資助項目(CARS-40) 國家自然科學(xué)基金資助項目(31372279,31402038)
【分類號】：S827

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本文編號：1996466