本文選題：羊腸道病毒 + 單克隆抗體��； 參考：《中國獸醫(yī)學(xué)報(bào)》2017年08期

【摘要】：根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室分離的國內(nèi)首株羊腸道病毒CEV-JL14的核苷酸基因組序列,設(shè)計(jì)并合成了羊腸道病毒VP1基因的引物,并應(yīng)用RT-PCR擴(kuò)增了VP1基因片段。擴(kuò)增的VP1基因片段克隆到原核表達(dá)載體pGEX-4T-1的EcoRⅠ/BamHⅠ的酶切位點(diǎn)。重組質(zhì)粒經(jīng)酶切鑒定和序列測定正確后,轉(zhuǎn)化到BL21,并以IPTG誘導(dǎo)表達(dá)了VP1重組蛋白。重組蛋白純化后以弗氏完全佐劑乳化,按一定的程序免疫BALB/c小鼠,加強(qiáng)免疫3次后,取小鼠脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合,經(jīng)過3次亞克隆獲得了5株表達(dá)VP1單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株。以ELISA對(duì)雜交瘤分泌的IgG亞類進(jìn)行了鑒定,結(jié)果4株為IgG1亞類,1株為IgG2b。以免疫酶單層細(xì)胞技術(shù)鑒定了單克隆抗體,結(jié)果顯示,獲得的單克隆抗體可以特異性檢出羊腸道病毒抗原。本試驗(yàn)在國內(nèi)首次獲得了抗羊腸道病毒的單克隆抗體,將為羊腸道病毒的致病機(jī)理、診斷及流行病學(xué)研究奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:According to the nucleotide genome sequence of the first sheep enterovirus CEV-JL14 isolated in our laboratory, the primers of VP1 gene of sheep enterovirus were designed and synthesized, and the VP1 gene fragment was amplified by RT-PCR. The amplified VP1 gene fragment was cloned into the restriction site of EcoR 鈪，

本文編號(hào)：1953100