本文選題：偽狂犬病病毒 + 微滴數字PCR��； 參考：《畜牧獸醫(yī)學報》2017年09期

【摘要】：為了建立偽狂犬病病毒(PRV)微滴數字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)的檢測方法,以偽狂犬病病毒gB基因為靶基因,建立了可對其準確定量的微滴數字PCR方法。對ddPCR反應中的引物濃度、探針濃度、退火溫度進行了優(yōu)化。對建立的ddPCR方法的特異性和敏感性也進行測定,并且應用于臨床樣品的檢測。結果表明,ddPCR的最佳引物濃度為0.9μmol·L~(-1),探針濃度為0.25μmol·L~(-1),退火溫度為60℃。ddPCR方法線性相關系數(R2)為0.998,顯示呈良好的線性關系。檢測限為6.1copies·μL~(-1),比熒光定量PCR(Real Time PCR,qPCR)的檢測限低,變異系數為2.81%,與其他病毒無交叉反應。通過對臨床樣品的檢測,與病毒分離比較,ddPCR方法的敏感性為87.5%,特異性為96.2%,符合率為97%。結果表明新建立的ddPCR方法,敏感性高、特異性強,可用于偽狂犬病病毒的定量檢測。
[Abstract]:In order to establish the detection method of pseudorabies virus (PRV) microdrop digital PCR (droplet digital PCR, ddPCR), the pseudorabies virus gB gene was used as the target gene, and the precise quantitative microdrop digital PCR method was established. The primer concentration, probe concentration and annealing temperature in the ddPCR reaction were optimized. The specificity of the ddPCR method for the ddPCR was established. The results showed that the best primer concentration of ddPCR was 0.9 Mu mol / L~ (-1), the concentration of the probe was 0.25 mol. L~ (-1), the annealing temperature was 60 C and the linear correlation coefficient (R2) was 0.998, showing a good linear relationship. The detection limit was 6.1copies. The detection limit of CR (Real Time PCR, qPCR) is low, the coefficient of variation is 2.81%, and there is no cross reaction with other viruses. By comparing the clinical samples, the sensitivity of the ddPCR method is 87.5% and the specificity is 96.2%. The coincidence rate is 97%. results show that the newly established ddPCR method is highly sensitive and specific, and can be used for pseudorabies virus. Quantitative detection.
【作者單位】： 中國動物疫病預防控制中心OIE豬繁殖與呼吸綜合征參考實驗室;中國農業(yè)大學動物醫(yī)學院;
【基金】：科技部科技基礎性工作專項(2013FY113300-6)
【分類號】：S852.65

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本文編號：1942391