本文選題：豬 + 孤雌激活胚胎��； 參考：《畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)》2017年02期

【摘要】：旨在研究玻璃化冷凍對(duì)豬孤雌激活囊胚中細(xì)胞凋亡的影響。通過(guò)體外培養(yǎng)觀察冷凍-解凍后囊胚腔的恢復(fù)情況,JC-1檢測(cè)線粒體膜電位變化、TUNEL法檢測(cè)胚胎中細(xì)胞凋亡水平,免疫熒光分析多種Caspase活性,以及qRT-PCR檢測(cè)凋亡相關(guān)功能基因的mRNA表達(dá)水平。結(jié)果表明,冷凍-解凍后囊胚的囊胚腔恢復(fù)率(31.03%)和囊胚細(xì)胞數(shù)(31.81)與新鮮囊胚(100.00%和38.17)相比均顯著下降(P0.05)。冷凍后囊胚的線粒體膜電位(0.46)與新鮮囊胚(1.02)相比顯著下降(P0.05)。TUNEL凋亡染色后,冷凍囊胚中凋亡陽(yáng)性細(xì)胞的比例(10.13%)顯著高于新鮮囊胚(5.92%,P0.05)。Caspase原位熒光染色結(jié)果表明,Pan-caspase、Caspase-8、Caspase-9和Caspase-3冷凍-解凍囊胚的熒光強(qiáng)度值(20.65、20.60、17.58和19.88)均顯著高于新鮮囊胚(7.41、6.46、5.47和6.32,P0.05)。經(jīng)qRT-PCR檢測(cè),冷凍組中Caspase-8、Caspase-9、TNF-α基因的mRNA表達(dá)水平均顯著高于新鮮組(P0.05),BCL-2、SOD-1的mRNA表達(dá)水平則顯著低于新鮮組(P0.05)。綜上表明,玻璃化冷凍可造成豬孤雌激活囊胚線粒體功能下降,并在死亡受體和線粒體途徑上共同介導(dǎo)囊胚內(nèi)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。
[Abstract]:Aim to study the effect of vitrification on apoptosis in porcine parthenogenetic blastocysts. The recovery of blastocyst cavity after cryopreservation and thawing was observed in vitro. The changes of mitochondrial membrane potential were detected by JC-1. Apoptosis level of embryo was detected by Tunel method, and various Caspase activities were analyzed by immunofluorescence. MRNA expression level of apoptosis-related genes was detected by qRT-PCR. The results showed that the recovery rate of blastocyst (31.03) and the number of blastocysts (31.81) were significantly lower than those of fresh blastocysts (100.00% and 38.17). The mitochondrial membrane potential of frozen blastocysts (0.46) was significantly lower than that of fresh blastocysts (1.02). The percentage of apoptotic positive cells in frozen blastocysts (10.13) was significantly higher than that in fresh blastocysts (5.92%). The results of in situ fluorescence staining showed that the fluorescence intensity of Pan-caspase Caspase-8 and Caspase-3 frozen-thawed blastocysts were significantly higher than that of fresh blastocysts 7.41, 6.466.46, 5.47 and 6.32P0.05. The mRNA expression level of Caspase-8, Caspase-9, TNF- 偽 gene in frozen group was significantly higher than that in fresh group, while the mRNA expression level of BCL-2SOD-1 in fresh group was significantly lower than that in fresh group. It is concluded that vitrification can decrease the mitochondrial function of parthenogenetic blastocysts and mediate the apoptosis of blastocysts through death receptors and mitochondria pathways.
【作者單位】： 上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所;上海市農(nóng)業(yè)遺傳育種重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物遺傳工程研究室;上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(31372315) 國(guó)家轉(zhuǎn)基因生物新品種培育科技重大專(zhuān)項(xiàng)(2014ZX08006-005) 上海市農(nóng)業(yè)委員會(huì)青年人才計(jì)劃(2014-1-32;2014-1-33)
【分類(lèi)號(hào)】：S828

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 盧晟盛,盧克煥;豬囊胚的體外生產(chǎn)技術(shù)[J];華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2005年02期

2 李瑞岐;桑潤(rùn)滋;;以囊胚雙重染色方法檢測(cè)果糖對(duì)胚胎早期發(fā)育效果的影響[J];中國(guó)奶牛;2010年07期

3 李瑞岐;桑潤(rùn)滋;;以囊胚雙重染色方法檢驗(yàn)果糖對(duì)牛胚胎早期發(fā)育效果的影響[J];中國(guó)畜牧雜志;2010年09期

4 馬紅;;供核細(xì)胞來(lái)源對(duì)豬克隆胚胎發(fā)育的影響[J];黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué);2013年12期

5 安曉榮,茍克勉,陳永福;體細(xì)胞克隆法生產(chǎn)綿羊轉(zhuǎn)基因囊胚[J];科學(xué)通報(bào);2001年10期

6 周娜汝;張宇;吳蓉花;李運(yùn)生;張運(yùn)海;;巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)對(duì)小鼠胚胎體外發(fā)育的影響[J];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2013年01期

7 周川;趙云程;黃俊成;;不同電融合參數(shù)及融合液對(duì)昆明小鼠2-細(xì)胞胚胎融合及囊胚率的影響[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2012年05期

8 朱士恩,曾申明,張忠誠(chéng);家兔擴(kuò)張囊胚玻璃化冷凍保存技術(shù)的研究[J];中國(guó)養(yǎng)兔雜志;1997年02期

9 張家新;楊梅;牛志宏;史宏才;郭志勤;;綿羊體外受精囊胚玻璃化冷凍保存的研究[J];湖北農(nóng)業(yè)科學(xué);2008年05期

10 王周吉;Alan Trounson;;機(jī)械分割的小鼠桑椹胚和囊胚的發(fā)育能力[J];東北農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào);1992年03期

相關(guān)會(huì)議論文 前4條

1 李彥欣;戴蘊(yùn)平;杜衛(wèi)華;趙春江;王莉莉;王海平;劉穎;李榮;李寧;;影響異種克隆牦牛囊胚發(fā)育的研究[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2004學(xué)術(shù)年會(huì)暨第五屆全國(guó)畜牧獸醫(yī)青年科技工作者學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（上冊(cè)）[C];2004年

2 李瑞岐;桑潤(rùn)滋;;以囊胚雙重染色方法檢測(cè)果糖對(duì)胚胎早期發(fā)育效果的影響[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物繁殖學(xué)分會(huì)第十五屆學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（上冊(cè)）[C];2010年

3 李瑞岐;桑潤(rùn)滋;;以囊胚雙重染色方法檢測(cè)果糖對(duì)胚胎早期發(fā)育效果的影響[A];中國(guó)奶業(yè)協(xié)會(huì)第24次繁殖學(xué)術(shù)年會(huì)暨國(guó)家奶牛/肉牛產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系第一屆全國(guó)牛病防治學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2009年

4 馬育芳;楊陽(yáng);李燕;王少華;趙蕊;李寧;;豬胚胎干細(xì)胞多能性因子Nanog對(duì)胚胎發(fā)育的影響[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物繁殖學(xué)分會(huì)第十五屆學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（上冊(cè)）[C];2010年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前5條

1 武建中;用于分離昆明小鼠治療性胚胎干細(xì)胞的囊胚生成途徑相關(guān)問(wèn)題研究[D];西南大學(xué);2009年

2 郭鎮(zhèn)華;卵泡抑素影響牛胚胎早期發(fā)育的研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

3 周艷華;牛囊胚兩步法玻璃化冷凍管內(nèi)解凍方法的優(yōu)化及其原理初步分析[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

4 朱化彬;奶牛體外胚胎生產(chǎn)技術(shù)的研究[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

5 李彥欣;異種克隆牦牛，羚牛及相關(guān)機(jī)理的研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 張亞楠;IVF-ET周期中不同原核數(shù)受精卵的發(fā)育潛能及其囊胚染色體組成的實(shí)驗(yàn)研究[D];鄭州大學(xué);2016年

2 姜午旗;不同方法生產(chǎn)的牛囊胚干擾素-tau（IFN-τ）分泌水平的研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

3 周崇;小鼠孵化囊胚和豬囊胚玻璃化冷凍保存技術(shù)的研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2003年

4 陳濤;豬胚胎體外生產(chǎn)和孤雌囊胚發(fā)育能力的檢測(cè)[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

5 陳少輕;牛卵胞質(zhì)內(nèi)單精注射（ICSI）的研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

6 陸文昊;豬MⅡ期卵母細(xì)胞玻璃化冷凍的研究[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

7 高善頌;小鼠胚胎分割和分割胚體外培養(yǎng)的研究[D];西南大學(xué);2006年

8 唐軍旺;維生素C和E及血清種類(lèi)對(duì)水牛體外受精早期胚胎發(fā)育與凋亡影響的研究[D];廣西大學(xué);2008年

9 金仁桃;影響克隆胚體外發(fā)育及移植的因素研究[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

10 吳蘇君;豬孤雌四倍體胚胎的制備及體外培養(yǎng)[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2011年

，

本文編號(hào)：1912664