本文選題：H5 + 亞型AIV��； 參考：《揚(yáng)州大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：H5亞型高致病性禽流感(Avian influenza, AI)是重要的人獸共患病,是世界動(dòng)物衛(wèi)生組織規(guī)定的法定通報(bào)傳染病之一,在多個(gè)國家流行。它不僅給養(yǎng)禽業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失,同時(shí)也嚴(yán)重威脅著人類的健康。為了適應(yīng)宿主與環(huán)境的變化,禽流感病毒(Avian influenza virus, AIV)以極快的速度發(fā)生著變異,其中的一些優(yōu)勢(shì)變異株會(huì)在不斷進(jìn)化的過程中存活下來。通過對(duì)AIV的監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn),近年來,Clade 2.3.4已成為我國大部分地區(qū)的主要流行分支之一,并且其次分支中出現(xiàn)了大量不同亞型的重組病毒。因此,我們選取Clade 2.3.4和Clade 2.3.4.4中2種不同的HA(SY、JY株),分別與3種不同亞型NA(NA1、NA2、NA8)組合,構(gòu)建出一系列重組病毒,通過比較其生物學(xué)特性和致病性的差異,來評(píng)價(jià)Clade 2.3.4中禽流感病毒HA與NA基因的適配性。1禽流感病毒的篩選純化及不同HA和NA組合重組病毒的構(gòu)建先通過序列比對(duì)以及特殊位點(diǎn)分析篩選出母本毒株SY(A/mallard/Huadong/S/2005,H5N1)和JY (A/duck/Eastern China/2014, H5N8), AIV SY株屬于Clade 2.3.4; AIV JY株屬于Clade 2.3.4.4。分析其HA連接肽序列發(fā)現(xiàn)SY株為PLRERRR-KR↓G,與Re-5疫苗株一致,而JY株則為PLREKRR-KR↓G,有一個(gè)位點(diǎn)的突變,并且JY株HA蛋白上170位糖基化位點(diǎn)是缺失的。試驗(yàn)采用Hoffmann 8質(zhì)粒拯救系統(tǒng),以SY株內(nèi)部基因?yàn)楣羌?將SY與JY的HA分別與1個(gè)NA1、2個(gè)NA2和2個(gè)NA8組合,利用反向遺傳技術(shù)構(gòu)建出HA與NA組合的10株重組病毒,分別命名為SY、SY-ZJ、 SY-CZ、SY-JYD、SY-JY、JY-SY、JY-ZJ JY-CZ、JY-JYD和JY。測(cè)序證明病毒基因序列的正確性,傳代結(jié)果顯示重組病毒滴度穩(wěn)定,因此成功拯救了預(yù)期的重組病毒。2不同HA和NA組合重組病毒的生物學(xué)特性及致病性研究10株重組病毒的EID50、TCID50和MDT值均相似。含SY HA的所有重組病毒,均只有α2,3唾液酸受體結(jié)合特性,與母本病毒一致。含JY HA的重組病毒中,只有JY-SY、JY表現(xiàn)出α2,3和α2,6唾液酸雙受體結(jié)合特性。神經(jīng)氨酸酶活性測(cè)定顯示NA1和NA8的活性顯著高于NA2。間接免疫熒光試驗(yàn)檢測(cè)病毒感染后NP、HA蛋白的表達(dá)情況,結(jié)果顯示所有重組病毒的這兩種蛋白表達(dá)時(shí)序類似。激光共聚焦熒光顯微鏡觀察所有重組病毒NP蛋白在細(xì)胞核和細(xì)胞漿的表達(dá)也類似。但流式細(xì)胞檢測(cè)NP、HA、M三種蛋白表達(dá)時(shí)顯示,病毒含SY HA時(shí),H5N1亞型病毒蛋白表達(dá)量多,病毒含JY HA時(shí),H5N2亞型病毒的蛋白表達(dá)量多,而H5N8亞型病毒的蛋白表達(dá)量則相對(duì)低。雞的致病性試驗(yàn)顯示,含SY HA病毒的毒力要高于含JY HA病毒,且在所有含有SY HA的病毒中,各毒株的毒力沒有明顯差異。但換成JY HA時(shí),H5N2和H5N8亞型病毒的毒力要高于H5N1亞型病毒毒力。各重組病毒對(duì)小鼠致病性試驗(yàn)結(jié)果也表明,含SY HA病毒的毒力要高于含JYHA病毒。綜上所述,禽流感病毒的HA和NA基因具有適配性,這種特性影響病毒的復(fù)制、傳播和致病力。含Clade 2.3.4.4 HA的H5N2和H5N8亞型病毒對(duì)雞的致病力增加有利于病毒的感染和傳播,對(duì)病毒的流行起著重要作用。
[Abstract]:In order to adapt to the changes of host and environment , we select two different HA ( A / mallard / Huadong / S / 2005 , H5N1 ) and JY ( A / duck / Huadong / S / 2005 , H5N1 ) and JY ( A / duck / Eastern China / 2014 , H5N ) . The results showed that the virulence of H5N1 subtype virus was higher than that of NA2 . In all the recombinant viruses containing JY HA , only JY - SY and JY showed that the virulence of H5N1 subtype virus was higher than that of NA2 .
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S852.65

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 趙國;劉曉文;錢忠明;薛峰;彭宜;彭大新;劉秀梵;;2002—2009年中國華東地區(qū)家禽低致病性禽流感的病原學(xué)檢測(cè)與分析[J];中國農(nóng)業(yè)科學(xué);2011年01期

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3 龍進(jìn)學(xué);薛峰;彭宜;顧敏;劉秀梵;;H5N1亞型禽流感病毒NS第263~277位核苷酸缺失提高病毒對(duì)雞的致病力[J];微生物學(xué)報(bào);2006年02期

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本文編號(hào)：1912422