本文選題：細(xì)胞周期蛋白A2 + 蛋白磷酸酶2A��； 參考：《西北農(nóng)林科技大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：在卵母細(xì)胞減數(shù)分裂進(jìn)程中,細(xì)胞周期蛋白A2(CyclinA2)可與不同CDK激酶相互作用,并通過其周期性的表達(dá)和降解,參與調(diào)控細(xì)胞周期。為了探討CyclinA2基因在豬卵母細(xì)胞完成減數(shù)分裂中的作用,本研究分別通過超表達(dá)和抑制CyclinA2的活性來進(jìn)行研究。1.分別構(gòu)建了野生型pVenus-CyclinA2和非降解型pVenus-DN157CyclinA2真核表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染至hela細(xì)胞后均能正常表達(dá)。2.將重組載體體外轉(zhuǎn)錄為cRNA,進(jìn)行豬卵母細(xì)胞的定量顯微注射。發(fā)現(xiàn)注射后的豬卵母細(xì)胞4 h后開始表達(dá)綠色熒光,至42 h成熟時熒光持續(xù)存在,說明表達(dá)的外源性CyclinA2可以逃避自身的降解機制。3.減數(shù)第一次分裂中,超表達(dá)CyclinA2可抑制第一極體的排出,并且這種阻滯需要相關(guān)的CDK1的活性。超表達(dá)CyclinA2會使PP2A的活性降低,從而出現(xiàn)染色體的異常分離。抑制CyclinA2活性也抑制第一極體的排出,并使得PP2A活性升高,還可引起紡錘體形態(tài)異常。表明恰當(dāng)?shù)腃yclinA2活性可通過調(diào)控PP2A和維持紡錘體的形態(tài)完成同源染色體的正常分離。4.減數(shù)第二次分裂中,過表達(dá)CyclinA2并不影響豬卵母細(xì)胞的卵裂和發(fā)育。而抑制CyclinA2的活性會引起卵子不能卵裂。這說明CyclinA2的活性對于卵子完成減數(shù)第二次分裂也是至關(guān)重要的。綜合以上研究結(jié)果,在減數(shù)第一次分裂中CyclinA2通過自身的降解影響PP2A活性從而確保染色體的正常分離。而減數(shù)第二次分裂中CyclinA2的活性對于卵裂的發(fā)生是必需的。這為我們進(jìn)一步研究CyclinA2參與染色體分離調(diào)控的分子機制奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:In the process of oocyte meiosis, cyclin A2 (CyclinA2) can interact with different CDK kinase and regulate cell cycle through its periodic expression and degradation. In order to explore the role of CyclinA2 gene in the meiosis of porcine oocytes, this study has overexpressed and inhibited the activity of CyclinA2, respectively. To study.1., wild type pVenus-CyclinA2 and non degrading pVenus-DN157CyclinA2 eukaryotic expression vector were constructed respectively. After transfected to HeLa cells, the recombinant vector could be normally expressed in vitro and transcribed to cRNA in vitro, and the porcine oocyte was injected into a quantitative microinjection. It was found that the porcine oocyte after 4 h began to express green fluorescence. 42 h mature when the fluorescence persists, indicating that the expression of exogenous CyclinA2 can escape from its own degradation mechanism.3. in the first division, the overexpression of CyclinA2 can inhibit the discharge of the first polar body, and this block needs related CDK1 activity. The overexpression of CyclinA2 will reduce the activity of PP2A, thus the abnormal separation of chromosomes appears. Inhibition of CyclinA2 activity also inhibited the discharge of the first polar body and increased the activity of PP2A, and also caused abnormal spindle morphology. It indicated that the appropriate CyclinA2 activity could complete the normal separation of homologous chromosomes by regulating PP2A and maintaining the spindle morphology in the second division of the.4. meiosis, and overexpression of CyclinA2 did not affect porcine oocytes. Cleavage and development. Inhibition of the activity of CyclinA2 causes the egg's inability to cleavage. This indicates that the activity of CyclinA2 is also crucial to the completion of the second division of the egg. The results of the above study, in the first division, affect the normal separation of the chromosomes by affecting the PP2A viability by the degradation of CyclinA2 in the first division. The activity of CyclinA2 in the number of second divisions is necessary for cleavage. This provides a basis for our further study of the molecular mechanism of CyclinA2 participation in chromosomal separation and regulation.

【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S828

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本文編號：1857017