本文選題：奶牛 + X、Y精子��； 參考：《塔里木大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：研究奶牛X、Y精子特異性蛋白,可以為奶牛的性別控制、胚胎性別鑒定及性控疫苗研發(fā)技術(shù)提供理論依據(jù)。研究采用流式細(xì)胞儀分選西門塔爾奶牛精子,利用人工授精技術(shù)驗(yàn)證奶牛X、Y精子的分離效果,比較Trizol、TCA-丙酮、尿素鹽酸胍三種蛋白裂解法,獲得最優(yōu)精子蛋白裂解效果;同時(shí)優(yōu)化蛋白雙向電泳關(guān)鍵參數(shù),建立奶牛X、Y精子特異性蛋白雙向電泳體系,篩選X-Y精子特異性表達(dá)蛋白,利用蛋白Q Exactive mass spectrometer質(zhì)譜鑒定和生物信息學(xué)預(yù)測獲得差異蛋白的定性和功能分析。結(jié)果如下:(1)流式細(xì)胞儀分離精子獲得純度達(dá)96%西門塔爾奶牛X、Y精子,實(shí)驗(yàn)室檢測奶牛X精子、Y精子、常規(guī)精子組活率的精子活率(43.81%、41.49%、46.16%)與精子頂體完整率(56.54%、58.21%、58.10%)差異均不顯著;X精子組19頭青年母牛人工授精獲得13頭雌性犢牛,Y精子組20頭青年母牛人工授精得到14頭雄性犢牛,性別符合率為100%。(2)采用Trizol裂解法對3.0×107個(gè)精子裂解獲得蛋白條帶16個(gè)多于TCA-丙酮法(10個(gè)條帶)和尿素鹽酸胍法(7個(gè)條帶)。采用改進(jìn)后IEF(等電聚焦)程序、pH4-7的IPG膠條、銀染圖譜獲得更多獨(dú)立蛋白點(diǎn),其效果優(yōu)于改進(jìn)前IEF程序、p H3-10的IPG膠條、考染圖譜。(3)X、Y精子檢測到特異性表達(dá)蛋白點(diǎn)25個(gè),其中X精子上有10個(gè),Y精子上有15個(gè);特異選取3個(gè)X精子和3個(gè)Y精子特異性表達(dá)蛋白點(diǎn)質(zhì)譜鑒定結(jié)果,位于X精子2個(gè)蛋白分別為推定組蛋白H2B(histone H2B type 2-F-like)和推定14-3-3Z蛋白(14-3-3 protein zeta/delta isoform X1),均位于細(xì)胞核內(nèi),無跨膜結(jié)構(gòu),位于Y精子特異性表達(dá)蛋白點(diǎn)為推定載脂蛋白A-I序列(apolipoprotein A-I preproprotein),位于細(xì)胞膜外,但無跨膜結(jié)構(gòu)。其它3個(gè)未命名蛋白序列分別為暫未命名蛋白序列1、暫未命名蛋白序列2無沒有發(fā)現(xiàn)跨膜,暫未命名蛋白序列3具有跨核膜的結(jié)構(gòu)。結(jié)論:流式細(xì)胞分選奶牛的X、Y精子可以達(dá)到性控有效性;利用穩(wěn)定、高效的雙向電泳程序獲得X精子特異性表達(dá)蛋白10個(gè),Y精子特異性表達(dá)蛋白15個(gè);質(zhì)譜鑒定6個(gè)特異性表達(dá)蛋白其序列均為親水性,具有抗原決定簇,它們與精子生成、獲能、代謝和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)有關(guān),推定組蛋白H2B、載脂蛋白A-I與奶牛雄性不育相關(guān),但6個(gè)蛋白序列均不能完全滿足疫苗候選蛋白條件。
[Abstract]:The results were as follows : ( 1 ) The results were as follows : ( 1 ) The results were as follows : ( 1 ) The results were as follows : ( 1 ) The results were as follows : ( 1 ) The sperm motility rate ( 43.81 % , 41.49 % , 46.16 % ) and the sperm acrosome intact rate ( 56.54 % , 58.21 % , 58.10 % ) were compared with that of Trizol , TCA - acetone and urea guanidine hydrochloride . ( 3 ) There were 25 specific expression proteins in X and Y sperm , 15 in X - sperm , 15 in Y - sperm , 3 X - sperm and 3 - 3 - 3Z protein ( 14 - 3 - 3 protein zeta / delta X1 ) , respectively .

【學(xué)位授予單位】：塔里木大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S823

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本文編號：1834762