本文選題：羊口瘡病毒 + ORFV-Q分離株��； 參考：《內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：本研究從山東省青島市某羊場(chǎng)采集疑似羊口瘡病料痂皮,經(jīng)剪碎、研磨、離心等處理后在羊睪丸細(xì)胞上進(jìn)行接種培養(yǎng)傳代,分離到一株病毒,通過(guò)對(duì)其形態(tài)特征觀察、理化特性研究、動(dòng)物回歸實(shí)驗(yàn)、病毒滴度測(cè)定及分子生物學(xué)鑒定,證實(shí)分離到羊口瘡病毒。根據(jù)GenBank中已公布的Orfv的全基因組序列和B2L、F1L、VIR的基因序列,設(shè)計(jì)3對(duì)特異性引物,應(yīng)用PCR擴(kuò)增、膠回收、重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化、陽(yáng)性菌篩選、質(zhì)粒測(cè)序等方法對(duì)分離株的B2L、F1L和VIR基因進(jìn)行擴(kuò)增、克隆和測(cè)序,并將其基因序列與其他已公布的不同來(lái)源的Orfv分離株進(jìn)行比較分析。結(jié)果表明,本研究利用羊睪丸細(xì)胞成功分離出一株羊口瘡病毒,并命名為ORFV-Q。本分離株能夠引起羊睪丸細(xì)胞產(chǎn)生明顯細(xì)胞病變,通過(guò)傳代至11代,細(xì)胞開(kāi)始出現(xiàn)病變和出現(xiàn)80%CPE的時(shí)間分別穩(wěn)定在接種后24h和72h左右。病毒粒子為橢圓形,外周有囊膜包被,在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)增殖,病毒對(duì)溫度、氯仿、乙醚等均敏感。接種毒株的羊只出現(xiàn)丘疹、膿皰等典型的羊口瘡癥狀,毒株TCID50為10-5.5。相關(guān)基因序列分析表明, ORFV-Q分離株的B2L基因、F1L基因和VIR基因與GenBank已公布毒株的該序列之間核苷酸同源性分別為96.8%-98.9%、96.2%～99.9%、94.9%～99.8%,且該分離株與中國(guó)陜西株和湖北株同源關(guān)系最近。
[Abstract]:In this study, a virus was isolated from a sheep farm in Qingdao City, Shandong Province, and a virus was isolated from the sheep testicular cells after shearing, grinding, centrifugation and other treatments. Studies on physical and chemical properties, animal regression test, virus titer determination and molecular biological identification confirmed that sheep mouth sore virus was isolated. According to the whole genome sequence of Orfv and the sequence of VIR gene of B2LX F1LN, three pairs of specific primers were designed, which were amplified by PCR, recovered by gel, transformed into recombinant plasmid, screened by positive bacteria. Plasmid sequencing methods were used to amplify, clone and sequence the B2LF1L and VIR genes, and to compare and analyze the sequence of B2LF1L and VIR genes with other published Orfv isolates from different sources. The results showed that a sheep mouth sore virus was successfully isolated from sheep testicular cells and named ORFV-Q. The isolated strain could induce obvious cytopathic changes in sheep testicular cells. After passage to the 11th passage, the time between the onset of pathological changes and the occurrence of 80%CPE was stable at 24 h and 72 h after inoculation, respectively. The virus particles were oval and enveloped with envelope, which proliferated in the cytoplasm. The virus was sensitive to temperature, chloroform, ether and so on. The sheep inoculated with the virus strain only showed papules, pustules and other typical symptoms of aphthous sores, the TCID50 of the virus strain was 10-5.5. The sequence analysis of related genes showed that the nucleotide homology between B2L gene F1L gene and VIR gene of ORFV-Q isolate and that of GenBank strain was 96.8- 98.9, respectively. The nucleotide homology of the isolated strain was 99.8% with Shaanxi strain and Hubei strain respectively.
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：S852.65

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本文編號(hào)：1824101