本文選題：BV2細(xì)胞系 + 極化��； 參考：《吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：剛地弓形蟲(chóng)(Toxoplasma gondii)簡(jiǎn)稱弓形蟲(chóng),宿主范圍廣,呈世界性分布,常引起慢性/隱性感染。小膠質(zhì)細(xì)胞(Microglia)作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)(Central Nervous System,CNS)中固有的免疫成分,是機(jī)體防御過(guò)程中的最易受到感染的免疫細(xì)胞之一。作為骨髓來(lái)源的細(xì)胞,稱為“腦巨噬細(xì)胞”,經(jīng)外界刺激可活化兩種不同的表型,即經(jīng)典型活化巨噬細(xì)胞(CAM)和替代型活化巨噬細(xì)胞(AAM),向M1/M2表型轉(zhuǎn)變的過(guò)程稱為極化(Polarization)或活化。本研究中以BV2細(xì)胞系作為模型,研究弓形蟲(chóng)感染對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞活化狀態(tài)的影響,以及活化的小膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)于弓形蟲(chóng)體外增殖的影響,為進(jìn)一步闡明弓形蟲(chóng)與機(jī)體天然免疫系統(tǒng)相互作用提供了有益的參考依據(jù)。本試驗(yàn)中利用脂多糖(LPS)和干擾素(IFN)-γ及IL-4分別刺激誘導(dǎo)正常的BV2細(xì)胞,在光學(xué)和電子顯微鏡下觀察不同刺激因子誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化;采用半定量PCR、蛋白免疫印跡(Western blot)及流式細(xì)胞術(shù)(Flow Cytometry)方法分別檢測(cè)M1/M2標(biāo)記分子分別在核酸和蛋白水平上的表達(dá)。結(jié)果表明,LPS+IFN-γ體外誘導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞后M1型相關(guān)因子在mRNA轉(zhuǎn)錄和蛋白水平上均顯著上調(diào)表達(dá);利用IL-4刺激后細(xì)胞中M2型相關(guān)標(biāo)記分子水平顯著上調(diào)表達(dá)。在體外極化模型成功建立的基礎(chǔ)上,利用PLK株弓形蟲(chóng)體外感染正常的BV2細(xì)胞,不同時(shí)間點(diǎn)收集細(xì)胞及培養(yǎng)上清,檢測(cè)BV2細(xì)胞M1/M2型標(biāo)記分子表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化;同時(shí),采用Griess法和精氨酸酶活性試驗(yàn)分別檢測(cè)細(xì)胞中誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)和精氨酸酶(Arginase-1)的酶活性。進(jìn)一步通過(guò)western-blot分析iNOS、Arg-1及相關(guān)信號(hào)通路JAK-STAT和NF-κB的磷酸化狀態(tài)。結(jié)果表明,與對(duì)照組相比,弓形蟲(chóng)體外感染12 h開(kāi)始,BV2細(xì)胞的M1型相關(guān)標(biāo)記分子的mRNA轉(zhuǎn)錄水平上有明顯上調(diào)表達(dá)(p0.001),iNOS活性及蛋白表達(dá)水平明顯上調(diào),并激活JAK-STAT1、NF-κB信號(hào)通路,誘導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞向M1型方向極化;而M2型相關(guān)分子表達(dá)和精氨酸酶活性無(wú)顯著變化;CAM具有抗原遞呈能力強(qiáng)、抑制腫瘤生長(zhǎng)、以及抗病原微生物的特性,能夠抑制或殺死病原體;而AAM分泌多種抗炎細(xì)胞因子和趨化因子具有促進(jìn)組織修復(fù)、重塑和血管再生等功能。因此下一步對(duì)M1和M2型小膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)弓形蟲(chóng)體外增殖的影響進(jìn)行評(píng)價(jià)。通過(guò)免疫熒光試驗(yàn)和Western-blot的檢測(cè)結(jié)果表明,弓形蟲(chóng)感染后24 h,M1型小膠質(zhì)細(xì)胞中弓形蟲(chóng)的增殖量顯著低于M0和M2型,表明M1型活化的小膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)弓形蟲(chóng)增殖有明顯的抑制作用。
[Abstract]:Toxoplasma gondii (Toxoplasma gondii) has a wide host range and worldwide distribution, and often causes chronic / recessive infection. Microglia, as an inherent immune component in central nervous system (CNS), is one of the most susceptible immune cells in the process of defense. The cells derived from bone marrow, called "brain macrophages", can activate two different phenotypes by external stimulation, that is, classical activated macrophages (CAM) and alternative activated macrophages (AAMN). The process of phenotypic transformation to M1/M2 is called Polarization) or activation. The effect of Toxoplasma gondii infection on the activation of microglia and the effect of activated microglia on the proliferation of Toxoplasma gondii in vitro were studied using BV2 cell line as a model. It provides a useful reference for further elucidating the interaction between Toxoplasma gondii and innate immune system. In this experiment, normal BV2 cells were stimulated by lipopolysaccharide (LPS), interferon IFN- 緯 and IL-4, respectively. The morphological changes of microglia induced by different stimulators were observed under optical and electron microscopy. The expression of M1/M2 labeled molecules at nucleic acid and protein levels was detected by semi-quantitative PCR, Western blotanalysis and flow Cytometry respectively. The results showed that the expression of M1 type related factors in microglia induced by LPS-IFN- 緯 was significantly up-regulated at the level of mRNA transcription and protein, and the expression of M2 type related marker molecules in the cells stimulated by IL-4 was significantly up-regulated. On the basis of successful establishment of polarization model in vitro, PLK strain Toxoplasma gondii was used to infect normal BV2 cells in vitro. The cells and supernatants were collected at different time points to detect the dynamic changes of M1/M2 marker molecules expression in BV2 cells. The activities of inducible nitric oxide synthase (iNOS) and arginase-1 (Arginase-1) were detected by Griess assay and arginase activity test, respectively. The phosphorylation of iNOS Arg-1 and related signaling pathways JAK-STAT and NF- 魏 B was further analyzed by western-blot. The results showed that compared with the control group, the mRNA transcription level of M1 related marker molecules in Toxoplasma gondii infected BV2 cells increased significantly at 12 h after infection in vitro, and the activity and protein expression of p0.001Toxoplasma gondii iNOS were up-regulated, and JAK-STAT1 was activated by NF- 魏 B signaling pathway. The microglia were induced to polarize to M1 type, but the expression of M2 related molecules and arginase activity did not change significantly. CAM had strong ability of presenting antigen, inhibiting tumor growth, and anti-pathogenic microorganism, which could inhibit or kill pathogens. The secretion of many anti-inflammatory cytokines and chemokines by AAM can promote tissue repair, remodeling and vascular regeneration. Therefore, the effects of M 1 and M 2 microglia on the proliferation of Toxoplasma gondii in vitro were evaluated. The results of immunofluorescence test and Western-blot test showed that the proliferation of Toxoplasma gondii M 1 microglia was significantly lower than that of M 0 and M 2 microglia at 24 h after infection, indicating that M1 activated microglia could inhibit the proliferation of Toxoplasma gondii.
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S852.7

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 井長(zhǎng)龍;鴿弓形蟲(chóng)病的診治報(bào)告[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2000年04期

2 茍?jiān)獎(jiǎng)?犬弓形蟲(chóng)病的診斷與防治[J];中國(guó)獸醫(yī)雜志;2000年11期

3 李天營(yíng),肖鵬,肖猛;犬弓形蟲(chóng)病的診斷與治療[J];廣東畜牧獸醫(yī)科技;2000年02期

4 洪雷;牛弓形蟲(chóng)病[J];中國(guó)動(dòng)物檢疫;2000年04期

5 李天營(yíng),肖鵬;犬弓形蟲(chóng)病的診斷與治療[J];中國(guó)獸醫(yī)雜志;2001年02期

6 艾小生;豬急性神經(jīng)型弓形蟲(chóng)病的診治[J];中國(guó)獸醫(yī)雜志;2001年12期

7 徐慧中,胡銀云;某豬場(chǎng)暴發(fā)弓形蟲(chóng)病的診治[J];中國(guó)動(dòng)物檢疫;2001年11期

8 陳敏;規(guī)模豬場(chǎng)暴發(fā)弓形蟲(chóng)病的報(bào)告[J];福建畜牧獸醫(yī);2002年05期

9 沈杰;我國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)界對(duì)弓形蟲(chóng)病認(rèn)識(shí)上的飛躍[J];中國(guó)獸醫(yī)寄生蟲(chóng)病;2004年02期

10 王紹琛;犬弓形蟲(chóng)病的診治[J];福建畜牧獸醫(yī);2004年05期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 朱引潔;吳文學(xué);賀國(guó)強(qiáng);;弓形蟲(chóng)病的診斷現(xiàn)狀[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜寄生蟲(chóng)學(xué)分會(huì)第九次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2006年

2 李輝;張健;;一例犬弓形蟲(chóng)病的診斷與治療[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)小動(dòng)物醫(yī)學(xué)分會(huì)第四次學(xué)術(shù)研討會(huì)、中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)外科學(xué)分會(huì)第十六次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（2）[C];2009年

3 李祥瑞;;弓形蟲(chóng)病的流行的新趨勢(shì)[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)食品衛(wèi)生學(xué)分會(huì)第十一次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

4 崔平;秦建華;方素芳;;河北省動(dòng)物弓形蟲(chóng)病流行病學(xué)調(diào)查[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜寄生蟲(chóng)學(xué)分會(huì)第五次代表大會(huì)暨第八次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2004年

5 藺智兵;張厚雙;曹杰;周勇志;李國(guó)清;周金林;;弓形蟲(chóng)real-time PCR檢測(cè)方法的建立和初步應(yīng)用[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜寄生蟲(chóng)學(xué)分會(huì)第六次代表大會(huì)暨第十一次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2011年

6 楊娜;穆名楊;李紅魁;何建斌;;中國(guó)東北地區(qū)雞源弓形蟲(chóng)的流行病學(xué)調(diào)查[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)禽病學(xué)分會(huì)第十六次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2012年

7 劉晶;蔡進(jìn)忠;于晉海;夏兆飛;林德貴;劉群;;幾種動(dòng)物弓形蟲(chóng)病血清流行病學(xué)的初步調(diào)查[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜寄生蟲(chóng)學(xué)分會(huì)第九次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2006年

8 王權(quán);蔣蔚;荊振宇;陳永軍;楊康;宋寧寧;崔常勇;;五種中藥體外抗弓形蟲(chóng)抑制效果的研究[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜寄生蟲(chóng)學(xué)分會(huì)第六次代表大會(huì)暨第十一次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2011年

9 韓書(shū)珍;李雪梅;牛文澤;陳翔;王果;李澤宜;;激光掃描共聚焦顯微鏡觀察大鼠局灶性腦缺血半暗區(qū)內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞的變化及意義[A];第六屆江浙滬兒科學(xué)術(shù)會(huì)議暨兒科學(xué)基礎(chǔ)與臨床研究進(jìn)展學(xué)術(shù)班論文匯編[C];2009年

10 鞏薇;衛(wèi)禮;王吉;賀爭(zhēng)鳴;邢瑞昌;;實(shí)驗(yàn)小鼠弓形蟲(chóng)檢測(cè)方法的建立及應(yīng)用[A];中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)會(huì)第六屆學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2004年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 林曉麗;養(yǎng)貓者易感染弓形蟲(chóng)應(yīng)謹(jǐn)防患精神分裂癥[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2007年

2 小郭;弓形蟲(chóng)病危害不輕[N];中國(guó)商報(bào);2000年

3 戴培紅;北京友誼醫(yī)院探索治療弓形蟲(chóng)病的新途徑[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2000年

4 本報(bào)記者 蔡玉冰 通訊員 黃賢君;弓形蟲(chóng)沒(méi)你想的可怕[N];廣東科技報(bào);2012年

5 李水源;當(dāng)前豬場(chǎng)弓形蟲(chóng)病的防控[N];中國(guó)畜牧獸醫(yī)報(bào);2013年

6 本報(bào)記者 白軼南;弓形蟲(chóng)病 危及胎兒健康[N];保健時(shí)報(bào);2005年

7 臨城縣畜牧局 李路民;豬得弓形蟲(chóng)病 吃了貓的虧[N];河北科技報(bào);2002年

8 北京友誼醫(yī)院北京熱帶醫(yī)學(xué)研究所研究員 甘紹伯 副主任醫(yī)師 馮曼玲;弓形蟲(chóng)——寵物的“寵物”[N];健康報(bào);2000年

9 連孝華;孕婦玩貓狗易危害胎兒[N];衛(wèi)生與生活報(bào);2007年

10 王志海 邵芹;犬弓形蟲(chóng)病[N];中國(guó)畜牧報(bào);2003年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 呂剛;弓形蟲(chóng)表面抗原蛋白5的結(jié)構(gòu)分析及免疫學(xué)研究[D];山東大學(xué);2015年

2 龔國(guó)華;上海城區(qū)犬、貓弓形蟲(chóng)病流行病學(xué)調(diào)查及藥物治療的研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

3 尹青;弓形蟲(chóng)Δbag1Δku80株的構(gòu)建及其作為貓弓形蟲(chóng)病疫苗候選株的免疫原性、安全性和效力的評(píng)價(jià)[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

4 徐鵬;弓形蟲(chóng)新毒力基因TgMAPK1表達(dá)特性及其初步功能研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

5 張步彩;泰州地區(qū)豬弓形蟲(chóng)血清流行病學(xué)調(diào)查及中藥治療急性感染弓形蟲(chóng)小鼠效果的研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2015年

6 陳金鈴;CD4~+CD25~+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞失能參與弓形蟲(chóng)分泌排泄抗原致小鼠早孕流產(chǎn)的機(jī)制[D];南京醫(yī)科大學(xué);2013年

7 張括;人—兔嵌合型抗弓形蟲(chóng)IgM抗體基因庫(kù)的構(gòu)建和抗弓形蟲(chóng)IgG抗體參考物質(zhì)的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2016年

8 張偉超;TALEN和CRISPR技術(shù)在弓形蟲(chóng)致病機(jī)制研究中的應(yīng)用[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

9 李木子;弓形蟲(chóng)半胱氨酸蛋白酶Metacaspases功能及作用機(jī)制[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

10 周春雪;弓形蟲(chóng)Ⅱ型蟲(chóng)株感染小鼠后血清及腦組織代謝組學(xué)的研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 陳立思;小膠質(zhì)細(xì)胞極化模型的建立及其對(duì)弓形蟲(chóng)增殖的影響[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

2 楊曉宇;重組弓形蟲(chóng)TRXL蛋白和EN02蛋白免疫保護(hù)力的評(píng)價(jià)[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

3 蔣宗儒;弓形蟲(chóng)ROP18激酶抑制宿主NF-κB信號(hào)通路的分子機(jī)制研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

4 趙玲瀟;基于泛素-弓形蟲(chóng)多價(jià)抗原的重組疫苗對(duì)小鼠的免疫保護(hù)性研究[D];山東大學(xué);2015年

5 王帥;弓形蟲(chóng)超氧化物歧化酶（SOD）基因分析和克隆表達(dá)[D];山東大學(xué);2015年

6 冷麗;云南大理HIV陽(yáng)性者感染弓形蟲(chóng)SAG1、c22-8基因位點(diǎn)的研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2015年

7 李筱鑫;弓形蟲(chóng)酪蛋白激酶CK1β基因缺失株構(gòu)建[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

8 蔡玉峰;貓弓形蟲(chóng)抗體ELISA檢測(cè)方法的建立與評(píng)價(jià)[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

9 閆曉月;弓形蟲(chóng)棒狀體蛋白R(shí)OP7的生物信息學(xué)分析、原核表達(dá)及組織學(xué)定位[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

10 李芬香;弓形蟲(chóng)TgPRMT5基因的克隆鑒定，細(xì)胞定位及功能初步分析[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

，

本文編號(hào)：1819869