本文選題：克倫特羅 + 萊克多巴胺�。� 參考：《中國計(jì)量大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：β-受體激動(dòng)劑分為兩大類:苯胺型類和苯酚型類。其中克倫特羅(Clenbuterol,CLE),屬于苯胺型類β-受體激動(dòng)劑;而萊克多巴胺(ractopamine,RAC),屬于苯酚型類β-受體激動(dòng)劑。將其作為動(dòng)物的飼料添加劑,能顯著提高飼料的轉(zhuǎn)化率和瘦肉轉(zhuǎn)化率。但其在動(dòng)物體內(nèi)的殘留,會(huì)通過食物鏈進(jìn)入到人體內(nèi),從而危害人類健康。它們也因此在全球范圍內(nèi)被禁用。本論文利用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)和膠體金免疫層析法(CGIA)建立了對(duì)β-受體激動(dòng)劑多殘留免疫檢測(cè)的技術(shù)。獲得的結(jié)果如下:1、以對(duì)羥基苯甲醛與硝基甲烷為起始物,并結(jié)合蘭尼鎳還原法,從頭合成萊克多巴胺氨基衍生物,即RAC-NH2。以此生成物為起始物,與克倫特羅一樣進(jìn)行重氮化反應(yīng),分別合成出RAC-HSA、RAC-BSA、CLE-HSA和CLE-BSA。在此基礎(chǔ)上,將RAC-NH2和CLE按照一定摩爾比混合,進(jìn)行重氮化反應(yīng),通過紫外和SDS-PAGE鑒定,分別合成出免疫原CLE-HSA-RAC和包被原CLE-BSA-RAC。2、以合成出的CLE-HSA-RAC做為免疫原,采用常規(guī)免疫方法進(jìn)行免疫小鼠,綜合效價(jià)和靈敏度兩個(gè)方面,選擇2號(hào)小鼠進(jìn)行沖擊免疫,進(jìn)行細(xì)胞融合試驗(yàn)。經(jīng)過三輪亞克隆后,得到3A2和4D8兩株穩(wěn)定分泌抗CLE-RAC的細(xì)胞株,其中4D8這株細(xì)胞株分泌的單抗,對(duì)CLE-RAC的靈敏度最好,IC50值為0.325±0.021ng/mL,且有64000的效價(jià)。因此選擇4D8細(xì)胞株注入小鼠體內(nèi),進(jìn)行誘生腹水。3、以CLE-BSA-RAC人工抗原和CLE-RAC單克隆抗體(4D8)建立了檢測(cè)CLE和RAC的間接競(jìng)爭ELISA方法。此方法檢測(cè)CLE和RAC時(shí)的IC50值為0.77ng/mL,最低檢測(cè)限IC10為0.14 ng/mL。對(duì)克倫特羅、萊克多巴胺、馬布特羅的交叉反應(yīng)率很高(CR96%)。同時(shí)對(duì)西布特羅、溴布特羅、馬賁特羅、西瑪特羅、班布特羅和克倫普羅也有一定的特異性(17%CR85%),實(shí)現(xiàn)了多殘留檢測(cè)。對(duì)其余的幾種受體激動(dòng)劑,沒有交叉反應(yīng)(CR0.1%)。在實(shí)際樣品檢測(cè)時(shí),豬尿、豬肉、豬肝和飼料的最低檢測(cè)限分別是0.302、0.603、0.804和12.42ng/mL。而最低定量限則分別為:0.518、0.858、1.152和20.583 ng/mL。板內(nèi)回收率為78%-118.00%,以及板間回收率為84.00%-114.00%。板內(nèi)變異系數(shù)小于14.04%,板間變異系數(shù)小于7.69%。利用LC-MS/MS法驗(yàn)證,此方法是可靠的。4、采用檸檬酸鈉還原法,制備了CLE-RAC膠體金標(biāo)記抗體,同時(shí)成功制備出膠體金試紙條。肉眼對(duì)CLE和RAC等9種β-興奮劑類藥物的檢測(cè)限可以達(dá)到5 ng/mL的水平,與前面結(jié)果icELISA結(jié)果一致,對(duì)β-興奮劑類藥物特異性較高,實(shí)現(xiàn)了多殘留檢測(cè)。同時(shí)檢測(cè)時(shí)間較短,適合現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。本論文采用雜交瘤細(xì)胞技術(shù),制備出CLE-RAC單抗,并建立了icELISA法和金標(biāo)試紙條檢測(cè)技術(shù),為CLE和RAC等β-受體激動(dòng)劑多殘留提供了可靠的檢測(cè)方法。
[Abstract]:尾-receptor agonists are divided into two categories: aniline type and phenol type. Clenbuterolium clenbuterolium is aniline-type 尾 -receptor agonist, while ractopamine ractopamine ractopamine belongs to phenol-type 尾 -receptor agonist. As an animal feed additive, the feed conversion rate and lean meat conversion rate can be significantly increased. But its residue in the animal body, will enter the human body through the food chain, thereby endangering human health. They are therefore banned globally. In this paper, the technique of multiresidue immunoassay for 尾 -receptor agonists was established by Elisa and CGIA-gel gold immunochromatographic assay. The results obtained are as follows: 1. The ractopamine amino derivative, RAC-NH2, was synthesized from p-hydroxybenzaldehyde and nitromethane at the ab initio using Raney nickel reduction method. RAC-HSA-RAC-BSA-CLE-HSA and CLE-BSA-CLE-HSA were synthesized by diazotization with clenbuterol. On this basis, RAC-NH2 and CLE were mixed at a certain molar ratio, diazotization reaction was carried out, the immunogen CLE-HSA-RAC and the coated CLE-BSA-RAC.2 were synthesized by UV and SDS-PAGE, respectively. The synthesized CLE-HSA-RAC was used as immunogen. Mice were immunized with routine immunization method. The mice were immunized with impact and cell fusion test in two aspects: titer and sensitivity. After three rounds of subcloning, two stable anti-CLE-RAC cell lines, 3A2 and 4D8, were obtained. The sensitivity of the McAb secreted by 4D8 cell line to CLE-RAC was 0.325 鹵0.021 ng / mL, with a titer of 64000. Therefore, 4D8 cell lines were selected to be injected into mice to induce ascites. The indirect competitive ELISA method for detection of CLE and RAC was established with CLE-BSA-RAC artificial antigen and CLE-RAC monoclonal antibody (4D8). The IC50 value of CLE and RAC is 0.77 ng / mL, and the lowest detection limit IC10 is 0.14 ng / mL. Cross-reaction rates for clenbuterol, ractopamine, and Mabbuterol were high. At the same time, sibuterol, brombuterol, Mapentrol, Simatro, Bambuterol and clenpulo also have a certain specificity of 17 CR85C. For the other several receptor agonists, there was no cross-reaction between CR0. 1 and CR0. 1. The minimum detection limits for urine, pork, liver and feed were 0.302ng / mL and 12.42ng / mL, respectively. The minimum quantification limits are: 0. 518, 0. 858, 1. 152 and 20.583 ng / mL, respectively. The intraplate recovery was 78-118.00 and the inter-plate recovery was 84. 00-114. 00. Intra-plate coefficient of variation was less than 14.04 and inter-plate coefficient of variation was less than 7.69. The LC-MS/MS method was used to verify the reliability of this method. The colloidal gold labeled antibody was prepared by sodium citrate reduction method and the colloidal gold strip was successfully prepared. The detection limit of 9 尾 -stimulant drugs such as CLE and RAC by naked eye can reach 5 ng/mL level, which is consistent with the previous results of icELISA, and the specificity of 尾 -stimulant drugs is higher, and multi-residue detection is realized. At the same time, the detection time is short, suitable for field testing. In this paper, CLE-RAC monoclonal antibody was prepared by hybridoma cell technique, and icELISA method and gold-labeled strip method were established, which provided a reliable method for the detection of multi-residue of 尾 -agonist such as CLE and RAC.
【學(xué)位授予單位】：中國計(jì)量大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S859.84

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 潘孝成;祁克宗;朱良強(qiáng);涂建;張小飛;趙瑞宏;;氧氟沙星人工抗原的合成及鑒定[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2006年03期

2 張梅;張繼瑜;李劍勇;;獸藥人工抗原合成的研究進(jìn)展[J];中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志;2006年01期

3 張澤英;袁宗輝;;獸藥人工抗原合成的研究進(jìn)展[J];中國獸藥雜志;2006年05期

4 吳揚(yáng);袁均林;楊旭;丁書茂;姜英;趙偉;;草丁膦人工抗原的合成與免疫效價(jià)的測(cè)定[J];環(huán)境科學(xué)與技術(shù);2007年04期

5 魯曉翠;朱金鳳;張改平;鄧瑞廣;侯玉澤;王自良;彩鴻翔;王青;;磺胺間二甲氧嘧啶人工抗原的合成與鑒定[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2007年15期

6 孫武勇;屈凌波;王云龍;劉文英;;氧氟沙星人工抗原的合成與鑒定[J];鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2007年06期

7 劉宣兵;張改平;鄧瑞廣;侯玉澤;王自良;劉慶堂;游雷鳴;柴書軍;;沙丁胺醇人工抗原的合成與鑒定[J];畜牧與獸醫(yī);2008年10期

8 彩鴻翔;侯玉澤;鄧瑞廣;魯曉翠;張改平;;磺胺甲VA唑人工抗原的制備與鑒定[J];上海畜牧獸醫(yī)通訊;2008年02期

9 張改平;劉宣兵;彩鴻翔;鄧瑞廣;游雷鳴;趙東;侯玉澤;;新霉素人工抗原的合成與鑒定[J];中國飼料;2008年17期

10 龍淼;楊正濤;張乃生;朱連勤;;達(dá)氟沙星人工抗原的合成與鑒定[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2009年01期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 方偉;胡鯤;姜有聲;黃宣運(yùn);楊先樂;;氯霉素人工抗原的合成與鑒定[A];中國魚類學(xué)會(huì)2008學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要匯編[C];2008年

2 杜小粉;董全;;甲胺磷人工抗原的合成與鑒定[A];2009食品科技(北京)論壇會(huì)議指南[C];2009年

3 高富紅;戴小華;沈紅;吳國娟;;雌二醇人工抗原的合成及多克隆抗體的制備[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)藥理毒理學(xué)分會(huì)第九次學(xué)術(shù)討論會(huì)論文與摘要集[C];2006年

4 劉宣兵;張改平;侯玉澤;鄧瑞廣;趙東;李彬彬;柴書軍;;慶大霉素人工抗原的合成與鑒定[A];第十屆中國科協(xié)年會(huì)論文集（三）[C];2008年

5 劉宣兵;張改平;侯玉澤;鄧瑞廣;趙東;李彬彬;柴書軍;;慶大霉素人工抗原的合成與鑒定[A];第十屆中國科協(xié)年會(huì)（河南）食品論壇論文集[C];2008年

6 魏新林;劉瑩;張少恩;王元鳳;;氰戊菊酯特異性人工抗原的合成與鑒定[A];2009年中國農(nóng)業(yè)工程學(xué)會(huì)農(nóng)產(chǎn)品加工及貯藏工程分會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2009年

7 劉艷霞;譚建華;;氟羅沙星人工抗原的制備與鑒定[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2008年學(xué)術(shù)年會(huì)暨第六屆全國畜牧獸醫(yī)青年科技工作者學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

8 滑靜;徐修遠(yuǎn);孫英健;于同泉;;氯霉素人工抗原的合成與鑒定[A];動(dòng)物生理生化學(xué)分會(huì)第八次學(xué)術(shù)會(huì)議暨全國反芻動(dòng)物營養(yǎng)生理生化第三次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要匯編[C];2004年

9 陳立本;金涌;韓博;;抗生素人工抗原偶聯(lián)比測(cè)定的新方法：MALDI-TOF MS[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2008年學(xué)術(shù)年會(huì)暨第六屆全國畜牧獸醫(yī)青年科技工作者學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

10 孟瑋;裘雪梅;劉仁榮;;蘇丹紅Ⅰ人工抗原的制備研究[A];2006中國微生物學(xué)會(huì)第九次全國會(huì)員代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2006年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前1條

1 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院;“壬基酚人工抗原的制備方法”獲專利授權(quán)[N];中國漁業(yè)報(bào);2014年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前3條

1 王姝婷;農(nóng)藥多簇人工抗原的免疫特異性及多殘留免疫金技術(shù)[D];浙江大學(xué);2008年

2 陳德坤;已烯雌酚免疫分析的研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2004年

3 范國英;鏈霉素殘留免疫學(xué)快速檢測(cè)技術(shù)研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2007年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 魯亮;重金屬鎘人工抗原構(gòu)建及其多克隆抗體的制備[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

2 迪更妮;中藥山茱萸和酸棗仁中馬錢苷、酸棗仁皂苷A人工抗原的合成及多克隆抗體的制備[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2016年

3 劉啊敏;基于二聚人工抗原的β-興奮劑多殘留免疫檢測(cè)技術(shù)研究[D];中國計(jì)量大學(xué);2016年

4 賴丹;基于鄰苯二甲酸酯的四種人工抗原的制備及免疫鑒定[D];廣東工業(yè)大學(xué);2015年

5 張偉;三種小分子藥物人工抗原與多抗制備及蛋白芯片檢測(cè)[D];河北大學(xué);2006年

6 雷莉輝;已烯雌酚人工抗原的研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2004年

7 張美容;不同偶聯(lián)比的毒死蜱、殺螟硫磷人工抗原的制備及表征[D];遼寧師范大學(xué);2008年

8 劉沙洲;新霉素人工抗原的構(gòu)建、多克隆抗體的制備及檢測(cè)方法的初步研究[D];四川大學(xué);2007年

9 王守海;頭孢噻肟鈉人工抗原的合成與單克隆抗體的研究[D];魯東大學(xué);2012年

10 印曉梅;新型三唑類小分子人工抗原的合成[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2013年

，

本文編號(hào)：1813820