本文選題：骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞 + 分離培養(yǎng)　； 參考：《河南科技大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：牛肉的品質(zhì)特性受到肌纖維類型和直徑等特征的影響,而肌纖維直徑的增大和肌纖維的類型轉(zhuǎn)化等是隨著畜禽生長發(fā)育的進(jìn)行在不斷變化,此生物學(xué)過程是受到骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的發(fā)育調(diào)控。研究發(fā)現(xiàn),鈣蛋白酶I(CAPN1)基因和凋亡相關(guān)基因caspase-9(CASP9)是與骨骼肌生長發(fā)育密切相關(guān)的兩個(gè)重要基因。以牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞為研究對(duì)象,并選取與骨骼肌生長發(fā)育相關(guān)的候選基因來研究肉品質(zhì),正成為肉品質(zhì)研究的新方向,將會(huì)有效促進(jìn)肉品質(zhì)的改善。(1)本研究采用0.1%的I型膠原酶和0.25%的胰蛋白酶聯(lián)合使用的兩步酶消化法成功分離并提取出牛原代骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞。并在體外成功培養(yǎng)了骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞,通過繪制細(xì)胞生長曲線發(fā)現(xiàn)細(xì)胞生長狀態(tài)較好,也成功對(duì)其進(jìn)行純化、冷凍保存與復(fù)蘇以及相應(yīng)的誘導(dǎo)分化,細(xì)胞在傳代至第3~4代時(shí)純度高,且傳代培養(yǎng)后和細(xì)胞復(fù)蘇后的細(xì)胞生物學(xué)特性穩(wěn)定。(2)本研究通過免疫細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)成功鑒定了牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞,牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞表面標(biāo)志均呈陽性表達(dá),符合其標(biāo)志物的表達(dá)特性。通過反轉(zhuǎn)錄PCR檢測技術(shù),根據(jù)凝膠電泳結(jié)果顯示其亮度情況,表明經(jīng)過傳代培養(yǎng)后,牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞在體外擴(kuò)增培養(yǎng)仍能具有骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的特性。(3)本研究發(fā)現(xiàn)鈣蛋白酶系統(tǒng)成員CAPN1和CAPN3以及半胱天冬酶系統(tǒng)成員CASP3、CASP7和CASP9均能夠在牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞中表達(dá),隨著牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的增殖分化,它們的表達(dá)量均處于變化中,這就表明CAPN1基因和CASP9基因均在肌生成的進(jìn)程中扮演著不可或缺的角色。同時(shí),我們發(fā)現(xiàn)CAPN1基因和CASP9基因在骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞中的表達(dá)量情況與其在骨骼肌肌肉組織的表達(dá)量情況無相關(guān)性,所以,我們認(rèn)為骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞生長發(fā)育的進(jìn)程與宰后肌肉組織嫩化的進(jìn)程不相關(guān),并且這些基因的表達(dá)量變化并不能反映它們?cè)诩∪饨M織中的變化情況。(4)本研究通過組織切片技術(shù)對(duì)不同年齡段的魯西黃牛的肌纖維直徑進(jìn)行測定分析,研究結(jié)果表明隨著魯西黃牛年齡的增長,其肌纖維直徑也在顯著的增長。同時(shí)采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)對(duì)不同年齡段的魯西黃牛的背最長肌中CAPN1和CASP9的mRNA表達(dá)情況進(jìn)行分析,并將其與肌纖維直徑進(jìn)行相關(guān)性分析,研究結(jié)果表明CAPN1基因m RNA的表達(dá)與肌纖維直徑存在顯著負(fù)相關(guān),而CASP9基因mRNA的表達(dá)與肌纖維直徑呈正相關(guān),但不顯著。本研究建立起牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞分離和純化的方法,建立起牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的體外擴(kuò)增培養(yǎng)體系。獲取了CAPN1基因和CASP9基因在牛肌肉生長發(fā)育過程中mRNA的表達(dá)規(guī)律及變化趨勢(shì),并獲得了CAPN1基因和CASP9基因mRNA的表達(dá)與肌纖維直徑間的關(guān)系,在理論上為闡明牛骨骼肌生長發(fā)育的分子機(jī)理和相關(guān)候選基因的網(wǎng)絡(luò)調(diào)控機(jī)制提供重要的數(shù)據(jù)支撐。
[Abstract]:The results showed that the expression of CAPN1 gene and CASP9 gene in skeletal muscle satellite cells was not correlated with the growth and development of skeletal muscle .

【學(xué)位授予單位】：河南科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S823

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1764830