本文選題：CPV + 單鏈抗體��； 參考：《東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)》2017年11期

【摘要】：為獲得高親和力抗犬細(xì)小病毒單鏈抗體,構(gòu)建抗犬細(xì)小病毒(CPV)細(xì)菌展示單鏈抗體文庫(kù)。研究提取犬脾臟總RNA,反轉(zhuǎn)錄c DNA,以此為模板,分別擴(kuò)增犬抗體VH和VL編碼序列,插入克隆載體p Tlinker。利用SfiⅠ酶切位點(diǎn)將sc Fv基因構(gòu)建至細(xì)菌展示載體p BSD中,將重組質(zhì)粒電轉(zhuǎn)化入E.coli DH5α構(gòu)建p BFD-sc Fv細(xì)菌展示庫(kù)。通過(guò)標(biāo)記FITC的VP2蛋白,利用流式細(xì)胞術(shù)篩選12株陽(yáng)性sc Fv。將12株sc Fv基因分別插入p ET-28a,構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒p ET28a-sc Fv。轉(zhuǎn)化到E.coli Rosetta中誘導(dǎo)表達(dá),獲得約28 ku目的蛋白。經(jīng)ELISA檢測(cè),純化sc Fv對(duì)VP2蛋白P/N值均大于2.1,其中sc Fv-23、sc Fv-33、sc Fv-34對(duì)VP2蛋白親和力較強(qiáng)。研究通過(guò)免疫本動(dòng)物源動(dòng)物,在獲得高價(jià)抗體同時(shí),避免傳統(tǒng)單克隆抗體的免疫排斥現(xiàn)象;結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)和細(xì)菌展示技術(shù)可對(duì)單鏈抗體文庫(kù)高效、快速篩選�？谷�(xì)小病毒同源單鏈抗體研究在填補(bǔ)市場(chǎng)同源基因工程抗體空白的同時(shí),可為研制具有中和活性全長(zhǎng)抗體奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:In order to obtain the high affinity scFv antibody against canine parvovirus, construct anti canine parvovirus (CPV) bacteria displayed antibody library. Extraction of canine spleen total RNA, reverse transcription C DNA as template, VH and VL were amplified in canine antibody encoding sequence is inserted into the cut site of Fv gene to construct SC bacteria display vector P BSD P Tlinker. by Sfi cloning vector of enzyme, the recombinant plasmid was transformed into P BFD-sc Fv electrical construction of bacterial display library E.coli DH5 alpha. Through labeled FITC VP2 protein by screening 12 strains of positive SC Fv. SC Fv gene of 12 strains were inserted into the P ET-28a flow cytometry, the recombinant plasmid P ET28a-sc Fv. transformation to induce expression of E.coli expression in Rosetta, about 28 Ku. The target protein detected by ELISA SC Fv of VP2 purified protein P/N values are greater than 2.1, including SC Fv-23, SC Fv-33, SC Fv-34 of VP2 protein through the strong affinity. Research on animal immunity The source of animal, in obtaining high antibody at the same time, to avoid the traditional immune rejection with monoclonal antibody; flow cytometry and bacteria of single chain antibody library display technology can be efficient, rapid screening of scFv. Research on homologous gene engineering antibody to fill the market blank at the same time against canine parvovirus homologous, can be developed with neutralizing activity in length antibody to lay the foundation.

【作者單位】： 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;
【基金】：國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目(2016YFD0501003)
【分類(lèi)號(hào)】：S858.292

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3 劉素敏;犬細(xì)小病毒的新療法—灌腸療法[J];安徽農(nóng)業(yè);2000年11期

4 楊德威,劉福安;不同種類(lèi)犬細(xì)小病毒疫苗臨床應(yīng)用效果的檢測(cè)[J];廣東畜牧獸醫(yī)科技;2000年02期

5 張浩,王筱月,汪麗群;犬細(xì)小病毒的診治[J];新疆畜牧業(yè);2000年04期

6 謝敏康;犬細(xì)小病毒腸炎的診斷[J];畜牧獸醫(yī)科技信息;2000年05期

7 付少才,陳萬(wàn)榮;抗犬細(xì)小病毒單克隆抗體的制備及初步應(yīng)用[J];中國(guó)獸醫(yī)雜志;2001年11期

8 穆良,楊仙婷,惠觀濤,高忠信,王澤華;犬細(xì)小病毒癥的治療[J];肉品衛(wèi)生;2001年01期

9 吳海東 ,韓富文,叢艷萍;犬細(xì)小病毒的診治與預(yù)防[J];黑河科技;2002年03期

10 景秀年,李中利,楊小華,張遵坤;犬細(xì)小病毒的中醫(yī)治療[J];四川畜牧獸醫(yī);2002年03期

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3 范國(guó)英;鐘華;陳俊杰;劉俊偉;;犬細(xì)小病毒伴氧氟沙星中毒的治療[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜內(nèi)科學(xué)分會(huì)2009年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2009年

4 崔水保;郭建平;;犬細(xì)小病毒三種接毒方法的比較研究[A];第四屆中國(guó)畜牧獸醫(yī)青年科技工作者學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2001年

5 劉劍郁;;犬細(xì)小病毒診斷研究進(jìn)展[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)養(yǎng)犬學(xué)分會(huì)第十二次全國(guó)養(yǎng)犬學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2007年

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7 文翼平;;犬細(xì)小病毒單克隆抗體對(duì)犬細(xì)小病毒病的臨床應(yīng)用研究[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2010年學(xué)術(shù)年會(huì)——第二屆中國(guó)獸醫(yī)臨床大會(huì)論文集(上冊(cè))[C];2010年

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10 劉劍郁;;犬細(xì)小病毒免疫診斷技術(shù)[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)養(yǎng)犬學(xué)分會(huì)第十二次全國(guó)養(yǎng)犬學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2007年

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1 ;做好犬細(xì)小病毒的防治[N];中國(guó)畜牧水產(chǎn)報(bào);2001年

2 佚名;阿托品治療犬細(xì)小病毒效果好[N];中國(guó)畜牧獸醫(yī)報(bào);2008年

3 金昊;家犬常見(jiàn)病防治（下）[N];江蘇科技報(bào);2001年

4 何更田;犬細(xì)小病毒性腸炎的診治[N];中國(guó)畜牧水產(chǎn)報(bào);2001年

5 王紅萍;肉用狗異地引種六注意[N];山西科技報(bào);2004年

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1 易立;犬瘟熱病毒N蛋白單克隆抗體的制備和特性研究及犬細(xì)小病毒VP2基因變異分析[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

2 趙寶華;抗α毒素單鏈抗體的基因克隆和表達(dá)及其生物學(xué)特性研究[D];中國(guó)人民解放軍軍需大學(xué);2001年

3 王宏偉;抗HIV-1單鏈抗體、重組毒素的制備與功能測(cè)定[D];中國(guó)人民解放軍軍需大學(xué);2001年

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1 吳平;伏馬菌素免疫及化學(xué)檢測(cè)和黃曲霉菌特異抗體表達(dá)分析[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

2 高寶龍;吩噻嗪類(lèi)藥物廣譜單克隆抗體及阿莫西林單鏈抗體的制備[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

3 王銳;豬源噬菌體單鏈抗體庫(kù)的構(gòu)建及抗rSpaA單鏈抗體的篩選[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

4 李翠;抗慶大霉素禽源單鏈抗體的篩選及間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)方法的建立[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2017年

5 顧舒舒;赭曲霉毒素A單鏈抗體的制備及初步應(yīng)用[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

6 郭偉;犬細(xì)小病毒分離鑒定及環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增快速檢測(cè)方法的建立[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

7 張立媛;犬細(xì)小病毒YBYJ株的分離鑒定及VP2基因克隆與多克隆抗體的制備[D];延邊大學(xué);2015年

8 秦立得;表達(dá)密碼子優(yōu)化犬細(xì)小病毒VP2蛋白重組犬瘟熱弱毒疫苗株的構(gòu)建[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

9 張馨穎;犬細(xì)小病毒VP2基因的原核表達(dá)及鑒定[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

10 李月華;犬細(xì)小病毒單克隆抗體的制備與應(yīng)用[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

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本文編號(hào)：1756540