發(fā)布時間：2018-04-16 00:36

  本文選題：CPV + 單鏈抗體　； 參考：《東北農(nóng)業(yè)大學學報》2017年11期

【摘要】：為獲得高親和力抗犬細小病毒單鏈抗體,構(gòu)建抗犬細小病毒(CPV)細菌展示單鏈抗體文庫。研究提取犬脾臟總RNA,反轉(zhuǎn)錄c DNA,以此為模板,分別擴增犬抗體VH和VL編碼序列,插入克隆載體p Tlinker。利用SfiⅠ酶切位點將sc Fv基因構(gòu)建至細菌展示載體p BSD中,將重組質(zhì)粒電轉(zhuǎn)化入E.coli DH5α構(gòu)建p BFD-sc Fv細菌展示庫。通過標記FITC的VP2蛋白,利用流式細胞術(shù)篩選12株陽性sc Fv。將12株sc Fv基因分別插入p ET-28a,構(gòu)建重組表達質(zhì)粒p ET28a-sc Fv。轉(zhuǎn)化到E.coli Rosetta中誘導表達,獲得約28 ku目的蛋白。經(jīng)ELISA檢測,純化sc Fv對VP2蛋白P/N值均大于2.1,其中sc Fv-23、sc Fv-33、sc Fv-34對VP2蛋白親和力較強。研究通過免疫本動物源動物,在獲得高價抗體同時,避免傳統(tǒng)單克隆抗體的免疫排斥現(xiàn)象;結(jié)合流式細胞術(shù)和細菌展示技術(shù)可對單鏈抗體文庫高效、快速篩選。抗犬細小病毒同源單鏈抗體研究在填補市場同源基因工程抗體空白的同時,可為研制具有中和活性全長抗體奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:In order to obtain the high affinity scFv antibody against canine parvovirus, construct anti canine parvovirus (CPV) bacteria displayed antibody library. Extraction of canine spleen total RNA, reverse transcription C DNA as template, VH and VL were amplified in canine antibody encoding sequence is inserted into the cut site of Fv gene to construct SC bacteria display vector P BSD P Tlinker. by Sfi cloning vector of enzyme, the recombinant plasmid was transformed into P BFD-sc Fv electrical construction of bacterial display library E.coli DH5 alpha. Through labeled FITC VP2 protein by screening 12 strains of positive SC Fv. SC Fv gene of 12 strains were inserted into the P ET-28a flow cytometry, the recombinant plasmid P ET28a-sc Fv. transformation to induce expression of E.coli expression in Rosetta, about 28 Ku. The target protein detected by ELISA SC Fv of VP2 purified protein P/N values are greater than 2.1, including SC Fv-23, SC Fv-33, SC Fv-34 of VP2 protein through the strong affinity. Research on animal immunity The source of animal, in obtaining high antibody at the same time, to avoid the traditional immune rejection with monoclonal antibody; flow cytometry and bacteria of single chain antibody library display technology can be efficient, rapid screening of scFv. Research on homologous gene engineering antibody to fill the market blank at the same time against canine parvovirus homologous, can be developed with neutralizing activity in length antibody to lay the foundation.

【作者單位】： 東北農(nóng)業(yè)大學生命科學學院;
【基金】：國家重點研發(fā)計劃項目(2016YFD0501003)
【分類號】：S858.292

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