發(fā)布時間：2018-04-16 01:02

  本文選題：偽狂犬病毒 + 多肽抗體　； 參考：《華中農(nóng)業(yè)大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：偽狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)是豬α皰疹病毒。PRV侵入外周神經(jīng)系統(tǒng)并在其中建立可再激活的感染。病毒通過軸突進(jìn)入細(xì)胞核后(逆向運(yùn)輸),病毒基因一般在細(xì)胞核內(nèi)建立潛伏感染。經(jīng)過數(shù)月甚至數(shù)年之后,潛伏感染可以再次被激活,產(chǎn)生新組裝的病毒顆粒。隨后病毒又運(yùn)輸至外周神經(jīng)系統(tǒng)(順向運(yùn)輸),在外周神經(jīng)系統(tǒng)附近再次感染的上皮細(xì)胞會產(chǎn)生感染性的病毒顆粒來感染幼小的宿主。病毒顆粒長距離的順向和逆向的運(yùn)動需要依賴軸突中微管的快速運(yùn)輸機(jī)制。PRV通過受體介導(dǎo)膜融合進(jìn)入軸突,這個時候病毒分離為病毒囊膜、糖蛋白、外層被膜蛋白和內(nèi)層被膜蛋白。有一些病毒成分在軸突中是單獨(dú)運(yùn)輸?shù)?這種運(yùn)輸影響細(xì)胞內(nèi)的潛伏性感染或者增殖性感染。為了能更進(jìn)一步的研究PRV在神經(jīng)細(xì)胞與上皮細(xì)胞之間的方向性傳輸,Ch’ng和Enquist發(fā)明了三室培養(yǎng)系統(tǒng)(triple-chamber system),這種系統(tǒng)將神經(jīng)元細(xì)胞體與軸突通過物理性的隔離而隔開。隨后又出現(xiàn)了另外一種不同于三室培養(yǎng)系統(tǒng)的微流體系統(tǒng)(microfluidic chamber system),可以被用做研究α皰疹病毒的蛋白對病毒在神經(jīng)細(xì)胞軸突運(yùn)輸中的影響。由以上研究背景,本試驗(yàn)通過設(shè)計(jì)多肽并注射到長耳兔,從而獲得PRV gB、VP16、VP26蛋白的高免血清。分離并培養(yǎng)雞胚脊髓背根神經(jīng)元和新生小鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞。在微流體系統(tǒng)(microfluidic chamber system)中體外原代培養(yǎng)雞胚脊髓背根神經(jīng)元,在軸突端或者胞體端接種PRVΔUL21-EGFP重組病毒。在一定時間內(nèi)收獲軸突端和胞體端的培養(yǎng)基,并分別測其毒價(jià)。通過分析軸突端和胞體端樣品毒價(jià)從而確定PRV被膜蛋白UL21在軸突順行及逆行運(yùn)輸?shù)淖饔�。主要工作包�?1.多抗的制備根據(jù)gB、VP16、VP26蛋白的氨基酸序列,找出一段適合的序列設(shè)計(jì)多肽。將設(shè)計(jì)的多肽序列送公司合成。合成好的多肽溶液與弗氏佐劑混合注射至新西蘭長耳兔。免疫數(shù)次后用ELISA檢測血清的效價(jià),達(dá)到要求后,對長耳兔進(jìn)行頸動脈采血。對血液進(jìn)行離心并吸取上清,上清即為所需的血清。Western blot檢測所得到的血清。經(jīng)過檢測后,這三種血清均含有相應(yīng)蛋白的抗體。2.小鼠海馬神經(jīng)元的原代培養(yǎng)選取出生24 h以內(nèi)的新生小鼠,在解剖顯微鏡下分離獲取腦部的海馬組織。用即配的濃度為2 mg/ml木瓜蛋白酶消化成單個的細(xì)胞,接種在六孔板或者小皿中,每三天換液一次,一次更換三分之一,每次換液需提前預(yù)熱培養(yǎng)基。培養(yǎng)10天左右進(jìn)行觀察。通過間接免疫熒光驗(yàn)證所培養(yǎng)的細(xì)胞為小鼠海馬神經(jīng)元.。3.微流體系統(tǒng)的建立及重組病毒的接種使用微流體系統(tǒng)(microfluidic chamber system)進(jìn)行雞胚脊髓背根神經(jīng)元的原代培養(yǎng),神經(jīng)元種植在微流體系統(tǒng)的一個室(胞體室)中,軸突通過細(xì)微紋溝伸展至另一個室(軸突室)中。雞胚脊髓背根神經(jīng)元在胞體室中培養(yǎng)5 d后軸突即可通過細(xì)微紋管生長至軸突室中。將構(gòu)建好的重組病毒按一定的MOI接入軸突室或胞體室,在一定的時間點(diǎn)測定軸突室和胞體室的毒價(jià)。結(jié)果表明微流體系統(tǒng)能夠很好地研究偽狂犬病毒逆行和順行運(yùn)輸過程。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S852.65

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 劉博濤;宋昌軍;劉翊中;;偽狂犬病毒致病機(jī)理的研究進(jìn)展[J];西北民族大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2008年04期

2 彭蕓蕓;仲曉寧;李春蕾;;偽狂犬病毒載體的研究進(jìn)展[J];山東畜牧獸醫(yī);2013年05期

3 丁建華,付烈振,王家富,羅滿林,謝小虎,張楚瑜;偽狂犬病毒表達(dá)載體的構(gòu)建[J];武漢大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);1997年06期

4 李建;曹娟;廖園園;劉潔;朱微;秦偉;秦紅剛;漆世華;謝紅玲;;偽狂犬病毒單克隆抗體的制備和鑒定[J];中國獸藥雜志;2014年03期

5 曹瑞兵;周國棟;周海霞;包晶晶;陳溥言;;豬β干擾素在畢赤酵母中的分泌表達(dá)及其對偽狂犬病毒的抑制作用[J];微生物學(xué)報(bào);2006年03期

6 黃現(xiàn)青;魏戰(zhàn)勇;高曉平;韓慶功;崔艷紅;;表面活性素體外抗偽狂犬病毒活性研究[J];生物學(xué)雜志;2009年04期

7 田志軍;仇華吉;倪健強(qiáng);周艷君;蔡雪輝;周國輝;王云峰;童光志;;表達(dá)豬繁殖與呼吸綜合征病毒GP5蛋白重組偽狂犬病毒的構(gòu)建及其生物學(xué)特性分析(英文)[J];遺傳學(xué)報(bào);2005年12期

8 童武;張青占;鄭浩;劉飛;姜一峰;單同領(lǐng);周艷君;童光志;;免疫后發(fā)病仔豬中偽狂犬病毒的分離和鑒定[J];中國動物傳染病學(xué)報(bào);2013年03期

9 汪銘書，，郭萬柱，婁高明，費(fèi)恩閣，宣華;偽狂犬病毒閩A株基因文庫的構(gòu)建及物理圖譜分析[J];中國病毒學(xué);1994年04期

10 汪銘書,郭萬柱,婁高明,費(fèi)恩閣,宣華;偽狂犬病毒閩A株基因文庫的構(gòu)建及物理圖譜的分析[J];西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào);1999年S2期

相關(guān)會議論文 前10條

1 王金果;涂健;趙德明;;酸化條件對偽狂犬病毒清除效果的檢測[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會2010年學(xué)術(shù)年會——第二屆中國獸醫(yī)臨床大會論文集(下冊)[C];2010年

2 王卓妍;朱家明;任芙蓉;;噻唑橙對血漿中偽狂犬病毒滅活效果的研究[A];中國輸血協(xié)會第五屆輸血大會論文專集（摘要篇）[C];2010年

3 郝鵬;阿蘭;;PK-15、ST細(xì)胞增殖偽狂犬弱毒效果的比較[A];首屆中國獸藥大會——獸醫(yī)生物制品學(xué)、獸醫(yī)微生物學(xué)學(xué)術(shù)論壇論文集（2008）[C];2008年

4 林春麗;王英;張寶琚;烏日娜;韓小梅;袁智慧;;不同的保存條件對偽狂犬病毒感染力的影響實(shí)驗(yàn)[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會2010年學(xué)術(shù)年會——第二屆中國獸醫(yī)臨床大會論文集(下冊)[C];2010年

5 江云波;方六榮;肖少波;張輝;潘永飛;羅銳;李彬;陳煥春;;表達(dá)豬繁殖與呼吸綜合征病毒兩種膜相關(guān)蛋白重組偽狂犬病毒的免疫反應(yīng)和免疫保護(hù)研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會2006學(xué)術(shù)年會論文集（上冊）[C];2006年

6 魏振明;陳霖普;戴朝杰;李怡英;;偽狂犬病毒弱毒株若干生物學(xué)特性（摘要）[A];福建省畜牧獸醫(yī)學(xué)會第七次會員代表大會暨學(xué)術(shù)研討會論文集[C];1994年

7 嚴(yán)琳;牟帆;陳煥春;;重組豬白細(xì)胞介素2在小鼠模型中對偽狂犬病毒弱毒疫苗的佐劑效應(yīng)[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會動物微生態(tài)學(xué)分會第三屆第七次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2004年

8 何雁南;王蕩;徐卓菲;姚清俠;司有輝;錢平;陳煥春;;豬瘟、口蹄疫重組偽狂犬病毒的構(gòu)建及其生物學(xué)特性[A];2006年度學(xué)術(shù)研討會論文摘要匯編[C];2006年

9 田志軍;仇華吉;童光志;蔡雪輝;倪健強(qiáng);周艷君;王云峰;;表達(dá)豬繁殖與呼吸綜合征病毒GP5蛋白的重組偽狂犬病毒的構(gòu)建及其鑒定[A];全國首屆動物生物技術(shù)學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2004年

10 田志軍;仇華吉;倪健強(qiáng);周艷君;蔡雪輝;孔令達(dá);王云峰;童光志;;表達(dá)豬繁殖與呼吸綜合征病毒GP5蛋白的重組偽狂犬病毒構(gòu)建及其生物學(xué)特性分析[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會成立20周年慶典暨第十次學(xué)術(shù)研討會論文集（上）[C];2003年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 劉飛;偽狂犬病毒變異株感染細(xì)胞的microRNA表達(dá)譜及病毒抗原性分析[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

2 宋云峰;豬2型圓環(huán)病毒核酸疫苗及重組偽狂犬病毒二價(jià)基因工程疫苗的研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

3 徐建祥;偽狂犬病毒IE180基因反義RNA轉(zhuǎn)基因動物研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2000年

4 宋巖;表達(dá)PRV-vp4基因的重組桿狀病毒和重組偽狂犬病毒的構(gòu)建[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

5 田志軍;表達(dá)PRRSV GP5蛋白的重組偽狂犬病毒的構(gòu)建及其免疫效力的研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

6 黃偉堅(jiān);偽狂犬病毒上海株P(guān)K～-缺失株及PK～-gG～-雙缺失株的構(gòu)建及免疫原性初步研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

7 郭洪;偽狂犬病毒IE180和EP0基因的表達(dá)調(diào)控[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

8 謝立蘭;偽狂犬病毒和豬傳染性胃腸炎病毒誘導(dǎo)β干擾素產(chǎn)生的分子機(jī)制研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

9 聶浩;弓形蟲—偽狂犬病毒重組二價(jià)基因工程疫苗研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

10 肖少波;偽狂犬病毒gC基因“自殺性”DNA疫苗及VP22蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)的免疫增強(qiáng)效應(yīng)研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 李碧;偽狂犬病毒SA215-T的構(gòu)建與神經(jīng)傳導(dǎo)研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

2 劉莎莎;豬源IFITM3抗乙型腦炎病毒和偽狂犬病毒的效果和機(jī)制研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

3 薄宗義;豬細(xì)小病毒—博卡病毒—偽狂犬病毒三價(jià)基因工程疫苗的研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

4 陳功;偽狂犬病毒與宿主3D基因組層面互作研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

5 袁振岳;偽狂犬病毒多肽抗體的制備及神經(jīng)元體外培養(yǎng)研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

6 梁勛;利用CRISPR/Cas9和Cre/lox系統(tǒng)構(gòu)建偽狂犬病毒雙基因缺失活疫苗[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

7 呂蔚;偽狂犬病毒閩A株單克隆抗體的制備及初步鑒定[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

8 汪招雄;應(yīng)用單抗夾心ELISA檢測偽狂犬病毒和胸膜肺炎放線桿菌毒素ⅢA在巴斯德畢赤酵母中的表達(dá)及檢測方法研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

9 劉俊磊;偽狂犬病毒基因組在潛伏感染中的時空表達(dá)[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

10 謝西鋒;銀加強(qiáng)膠體金標(biāo)記技術(shù)檢測偽狂犬病毒的研究[D];河南農(nóng)業(yè)大學(xué);2001年

本文編號：1756582