發(fā)布時間：2018-04-14 06:17

  本文選題：益生菌制劑 + 菌糠��； 參考：《西北農林科技大學》2017年碩士論文

【摘要】：隨著抗生素的耐藥性和抗生素殘留問題日益嚴重,研究和開發(fā)可替代抗生素的綠色飼料添加劑產品已成為世界性的研究課題。微生物制劑具有補充、調整和維持動物腸道微生態(tài)平衡,達到防病治病,促進健康和提高生產性能的作用。近年來我國食用菌技術發(fā)展迅速,逐步形成規(guī)�；彤a業(yè)化生產,收菌后剩余底料菌糠的數(shù)量也急劇增加,菌糠內富含菌絲體且蘊含著豐富的營養(yǎng)物質,合理利用食用菌菌糠成為食用菌行業(yè)需要解決的問題。而利用菌糠生產益生菌制劑為其提供了重要途徑。本研究以本實驗室多年分離并保存的乳酸菌為出發(fā)菌株,從生長性能、產酸性能和耐受性等方面出發(fā),篩選優(yōu)良乳酸菌;并進一步研究篩選獲得的乳酸菌的生長性能、產酸規(guī)律等生物學特性。以實驗室保存和購買的芽孢桿菌為出發(fā)菌株,從生長規(guī)律、耐受性和產酶能力等方面出發(fā),篩選獲得優(yōu)良芽孢桿菌;并對其進行鑒定和生物學特性研究。利用菌糠混合培養(yǎng)芽孢桿菌、乳酸菌和酵母菌,采用實驗室小型罐式發(fā)酵,優(yōu)化菌糠發(fā)酵培養(yǎng)基和發(fā)酵條件,篩選出最佳菌株配伍,并進行驗證試驗。主要研究結果如下:(1)實驗共篩選獲得3株優(yōu)良乳酸菌,分別為植物乳桿菌R02(Lactobacillus plantarum)、糞腸球菌R07(Enterococcus faecalis)和戊糖片球菌R09(Pediococcus pentosaceus)。其中菌株R09生長最快,產酸能力最強,乳酸占總酸含量最高,達95.45%,可耐受0.12 g/mL NaCl;菌株R02對溫度的耐受性最強,可耐受55℃高溫;菌株R07對強酸強堿環(huán)境有較強的耐受能力,在pH為3.0-9.5的條件下均可生長。在藥敏試驗中,菌株R02和R07對抗菌藥物表現(xiàn)出較強的耐受性,而R09表現(xiàn)出極強的耐藥性。(2)篩選獲得3株優(yōu)良芽孢桿菌,分別為解淀粉芽孢桿菌Ba1(Bacillus amyloliquefaciens);蠟樣芽孢桿菌Bc1(Bacillus cereus);枯草芽孢桿菌Bs1(Bacillus subtilis)。篩選結果表明,菌株Bs1和Bc1對高溫、高鹽條件有較好的耐受能力,3株菌對酸堿均有較強的耐受范圍;且3株菌都具有良好的產酶活性;生長曲線測定結果表明,菌株Bc1、Ba1和Bs1在穩(wěn)定期活菌含量較高,均超過1010cfu/mL,其中菌株Bc1在穩(wěn)定期的活菌含量最高,達1014 cfu/mL。菌株Bc1、Ba1和Bs1的皿內拮抗試驗結果表明菌株Ba1和Bs1對鏈球菌產生了較強的抑制作用。3株菌均具有較高的SOD酶活力。菌株Bc1對抗菌藥物有較強的耐受性,菌株Ba1和Bs1對大多數(shù)抗菌藥物都很敏感。(3)以乳酸菌R09和芽孢桿菌Bc1為出發(fā)菌株,通過L_9(3~4)正交試驗獲得菌糠發(fā)酵的最適培養(yǎng)基配方:菌糠22.5 g,麩皮5.2 g,油渣2.5 g,尿素1.2 g。在此條件下乳酸菌R09的活菌數(shù)可達2.5×10~9cfu/g,芽孢桿菌Bc1的活菌數(shù)可達3.16×10~(10)cfu/g。通過乳酸菌、芽孢桿菌和酵母菌混菌發(fā)酵,獲得兩組最優(yōu)組合:處理3Bc1+1314+R02+R09和處理5 Ba1+1314+R02+R09。并得出處理3 Bc1+1314+R02+R09發(fā)酵產物的pH值顯著(p0.05)低于其它菌株組合,發(fā)酵產物中的粗蛋白含量和還原糖含量均顯著(p0.05)高于其它菌株組合,與對照組相比,粗蛋白含量增加了13.4%,還原糖含量增加了108.5%。通過L_9(3~4)正交試驗獲得菌糠發(fā)酵的最適發(fā)酵條件,因此通過綜合分析,菌糠發(fā)酵最適發(fā)酵條件為:溫度30℃,初始pH值4.5,料水比2:2.7,培養(yǎng)時間96 h。在此條件下乳酸菌、芽孢桿菌和酵母菌的活菌數(shù)分別可達2.0×10~9 cfu/g,8.71×10~(10) cfu/g,1.95×10~8cfu/g。(4)經驗證,兩種菌株配伍的乳酸菌和芽孢桿菌活菌數(shù)都達到1010 cfu/g,各菌株活菌含量均較高,其中菌株配伍Bc1+1314+R02+R09中乳酸菌活菌數(shù)達4.27×10~(10) cfu/g,芽孢桿菌活菌數(shù)為8.24×10~(10)cfu/g,酵母菌為7.08×10~9cfu/g;Ba1+1314+R02+R09中乳酸菌活菌數(shù)達1.58×10~(10) cfu/g,芽孢桿菌活菌數(shù)為5.75×10~(10) cfu/g,酵母菌為2.69×10~8cfu/g。
[Abstract]:With the problem of antibiotic residue and antibiotic resistance is becoming increasingly serious, green feed additive products research and development of alternative antibiotics has become a worldwide research topic. Microbial has added, adjust and maintain the animal intestinal micro ecological balance, achieve the treatment and prevention of diseases, health promotion and improve production performance. In recent years China's edible fungus the rapid development of technology, gradually formed the scale and industrial production, fermentaing number of WMLE remaining bottom material is increased rapidly, WMLE rich mycelium and contains rich nutrients, rational use of edible fungus chaff become edible fungus industry need to solve the problem. And the use of WMLE probiotics production it provides an important way. In this study, lactic acid bacteria in our laboratory for many years separated and preserved as the starting strain, the growth performance, acid production and other aspects of tolerance And screening of lactic acid bacteria; and further study on the growth performance of the lactic acid bacteria strains were obtained, the biological characteristics of acid production law. Kept in laboratory and purchase of Bacillus strain from growth, tolerance and enzyme production ability and other aspects, to obtain excellent Bacillus screening; and identification and biological research the characteristics of the WMLE. Using the mixed culture of Bacillus, lactic acid bacteria and yeast, the laboratory tank fermentation medium and Fermentation Conditions Optimization of mushroom bran fermentation, screened the best strain compatibility test. The main results are as follows: (1) were screened 3 strains of lactic acid bacteria, respectively. For Lactobacillus plantarum R02 (Lactobacillus plantarum), R07 (Enterococcus faecalis) Enterococcus and Pediococcus pentosaceus R09 (Pediococcus pentosaceus). The strain R09 grew fastest, strongest acid producing ability of lactic acid. The total acid content was the highest, up to 95.45%, can withstand 0.12 g/mL NaCl; strain R02 had the strongest tolerance to temperature, can withstand the high temperature of 55 DEG C; strain R07 had strong tolerance to acid and alkali environment in pH under the condition of 3.0-9.5 can grow. In the drug sensitivity test, the strains of R02 and R07 on antibacterial the drug showed strong tolerance, while R09 showed strong drug resistance. (2) screened 3 strains of Bacillus were excellent, Bacillus amyloliquefaciens Ba1 (Bacillus amyloliquefaciens); Bacillus cereus Bc1 (Bacillus cereus); Bacillus subtilis Bs1 (Bacillus subtilis). The results showed that the strains of Bs1 and Bc1 on the high temperature, high salt conditions have better resistance, 3 strains had strong tolerance to pH range; and all of the 3 strains have good enzyme activity; the growth curve showed that strains Bc1, Ba1 and Bs1 were higher in the stable period of live bacteria, More than 1010cfu/mL, the strain of Bc1 in the stable period of live bacteria content is the highest, up to 1014 cfu/mL. strains Bc1, Ba1 and Bs1 test results of antagonistic activity of SOD enzyme showed that dish strains Ba1 and Bs1 had a strong inhibitory effect on Streptococcus strains of.3 were high. The strain Bc1 has strong resistance to antimicrobial agents the strains Ba1 and Bs1 are sensitive to most antimicrobial agents. (3) the R09 of lactic acid bacteria and Bacillus Bc1 strain by L_9 (3~4) orthogonal test, the optimum medium formula of WMLE Junkang fermentation: 22.5 g, 5.2 g and 2.5 g wheat bran, oil residue, live lactic acid bacteria R09 1.2 g. urea under this condition number is 2.5 * 10~9cfu/g, living bacterium Bacillus Bc1 number is 3.16 * 10~ (10) cfu/g. by lactic acid bacteria, fermentation by mixed strains bacillus and yeast, obtained two groups: optimal combination treatments of 3Bc1+1314+R02+R09 and Ba1+1314+R02+R09. and 5 The treatment of 3 Bc1+1314+R02+R09 fermentation product of pH was significantly lower than the combination of other strains (P0.05), crude protein content of fermentation product and reducing sugar content were significantly higher than other strains (P0.05) combination, compared with the control group, the crude protein content increased by 13.4%, reducing sugar content increased by 108.5%. L_9 (3~4) orthogonal test of mushroom bran fermentation the fermentation conditions, therefore, through comprehensive analysis, WMLE optimum fermentation conditions of fermentation were 30 degrees Celsius temperature, the initial pH value of 4.5, the ratio of material to water 2:2.7, culture time 96 h. under these conditions, the number of viable lactic acid bacteria, Bacillus bacteria and yeast are up to 2 * 10~9 cfu/g 10~ (10), 8.71 * cfu/g, 1.95 * 10~8cfu/g. (4) verified, two strains of lactic acid bacteria and Bacillus and living bacteria number reached 1010 cfu/g, the strains of live bacteria had high content of Bc1+1314+ R02+R09 in which lactic acid bacteria and bacteria living bacteria number up to 4.27 x 1 0~ (10) cfu/g, the number of viable bacilli was 8.24 * 10~ (10) cfu/g, yeast was 7.08 * 10~9cfu/g, the number of viable lactic acid bacteria in Ba1+1314+R02+R09 reached 1.58 * 10~ (10) cfu/g, the number of viable bacilli was 5.75 * 10~ (10) cfu/g, yeast was 2.69 * X.

【學位授予單位】：西北農林科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：S816

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本文編號：1748082