本文選題：牛腸道病毒 + 2A和3C蛋白�。� 參考：《東北農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：牛腸道病毒(bovine enterovirus,BEV)屬于小RNA病毒科腸道病毒屬,為單股正鏈RNA病毒。BEV可通過糞口傳播,常和多種病原體一起引發(fā)動物混合感染,因其可感染消化道且物理性質(zhì)穩(wěn)定,故可通過宿主排便而暴露于水源環(huán)境中,從而對牧場造成潛在危害。本實(shí)驗(yàn)室之前的研究發(fā)現(xiàn),BEV病毒可以感染幼兔和白化豚鼠,并引起感染動物肺臟、肝臟明顯的充血腫脹,病毒粒子可以在肺、腸、脾、肝和腎等內(nèi)臟組織中增殖。BEV感染會引起機(jī)體帶毒,可能會降低宿主的免疫反應(yīng)而為其他細(xì)菌和病毒復(fù)制提供可乘之機(jī),為繼續(xù)探索BEV是如何逃逸宿主天然免疫本研究進(jìn)行了以下探索。檢測BEV感染對牛I型干擾素(Interferons,IFNs)、干擾素效應(yīng)分子(IFN-stimulated genes,ISGs)和RLR信號通路關(guān)鍵分子表達(dá)的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn)BEV感染不能明顯引起B(yǎng)o IFN-β、ISGs和RLR信號通路關(guān)鍵分子表達(dá)增多;說明BEV感染細(xì)胞中I型干擾素應(yīng)答反應(yīng)較弱。為進(jìn)一步探究BEV是如何拮抗牛I型IFN干擾素的生成,本研究克隆表達(dá)了BEV的非結(jié)構(gòu)蛋白2A、3C,通過在MDBK、BL細(xì)胞中過表達(dá)2A、3C檢測其對Bo IFN-β、ISGs和RLR信號通路關(guān)鍵分子表達(dá)的影響;實(shí)時熒光定量PCR結(jié)果顯示2A、3C可抑制BoIFN-β、Mx1、ISG15和RIG-I、MAVS的轉(zhuǎn)錄表達(dá);Western Blot結(jié)果顯示2A、3C負(fù)調(diào)控MAVS的蛋白表達(dá),且抑制過表達(dá)MAVS引起的Mx1和NF-κB p65蛋白的表達(dá);2A、3C在敲減MAVS表達(dá)的MDBK細(xì)胞中不抑制BoIFN-β、ISGs的轉(zhuǎn)錄表達(dá);說明2A、3C通過MAVS拮抗干擾素的生成。雙熒光素酶系統(tǒng)檢測結(jié)果顯示2A、3C抑制IFN-β啟動子、ISRE和NF-κB所調(diào)控的熒光素酶活性。此外q PCR和TCID50檢測結(jié)果顯示BEV感染基因敲減Bo MAVS的MDBKpsiMAVS和MDBKsh MAVS細(xì)胞中的病毒滴度,高于BEV感染正常MDBK細(xì)胞的病毒滴度。本研究發(fā)現(xiàn)BEV感染細(xì)胞中I型干擾素應(yīng)答反應(yīng)較弱,2A、3C可以負(fù)調(diào)控RLR信號通路關(guān)鍵接頭分子MAVS的轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)以及抑制Bo IFN-β啟動子、ISRE和NF-κB等調(diào)控的熒光素酶活性,BEV可通過其非結(jié)構(gòu)蛋白酶2A、3C來拮抗宿主產(chǎn)生干擾素。綜上所述,本研究旨在為牛腸道病毒抗宿主天然免疫應(yīng)答的研究提供思路。
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【學(xué)位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S852.653

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1746339