發(fā)布時間：2018-04-11 16:13

  本文選題：牛呼吸道合胞體病毒 + G蛋白��； 參考：《中國人獸共患病學(xué)報》2017年07期

【摘要】：目的建立牛呼吸道合胞體病毒(BRSV)雙抗體夾心ELISA(DAS-ELISA)檢測方法。方法以重組純化的BRSV-G蛋白免疫家兔和小鼠,制備抗G蛋白的多克隆抗體(PcAb)和單克隆抗體(MAb),方陣滴定法優(yōu)化DAS-ELISA方法抗體工作濃度及反應(yīng)條件,并對其敏感性、特異性、符合率進行驗證。結(jié)果獲得5株穩(wěn)定分泌抗G蛋白MAb的雜交瘤細胞株,分泌抗體亞類均為IgG1型κ鏈,Western blot、IFA試驗表明PcAb和MAb均與G蛋白和BRSV發(fā)生特異性反應(yīng),MAb作為捕獲抗體的最佳包被濃度為2.5μg/mL,PcAb作為檢測抗體最佳工作濃度為5μg/mL,判定臨界值為0.22,最低檢測限為1.43μg/mL,批內(nèi)和批間重復(fù)性試驗變異系數(shù)均小于10%,與常引起牛呼吸道疾病的幾種病原均無交叉反應(yīng),與RT-PCR的敏感性、特異性、符合率分別為92.0%、100%、95.6%。結(jié)論建立的檢測BRSV的DAS-ELISA方法可用于臨床樣品的大規(guī)模檢測,為BRSV疫情的監(jiān)測和快速診斷奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to establish a double antibody sandwich ELISAV DAS-ELISAA method for detection of bovine respiratory syncytial virus (BRSVV).Methods Rabbits and mice were immunized with recombinant purified BRSV-G protein to prepare anti-G protein polyclonal antibody (PCAB) and monoclonal antibody (McAb). The working concentration and reaction conditions of DAS-ELISA antibody were optimized by square array titration, and the antibody was sensitive and specific.The coincidence rate is verified.Results five hybridoma cell lines secreting anti-G protein MAb stably were obtained.The specific reaction of PcAb and MAb with G protein and BRSV showed that the best concentration of antibody was 2.5 渭 g / mLPcAb as the best working concentration of 5 渭 g / mL. the critical value was determined.The lowest detection limit was 1.43 渭 g 路mL ~ (-1). The coefficient of variation of repeated tests was less than 100.There was no cross reaction with several pathogens that often caused bovine respiratory diseases.The sensitivity, specificity and coincidence rate with RT-PCR were 92. 0% and 95. 6%, respectively.Conclusion the established DAS-ELISA method for the detection of BRSV can be used for the large-scale detection of clinical samples, which lays a foundation for the monitoring and rapid diagnosis of BRSV.
【作者單位】： 黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動物科技學(xué)院;
【基金】：黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)研究生創(chuàng)新科研項目(No.YJSCX2016-Y18) 黑龍江省教育廳資助項目(No.12521372)聯(lián)合資助~~
【分類號】：S852.653

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4 馮軍科;薛飛;李嬌;祖立闖;朱遠茂;任憲剛;;牛呼吸道合胞體病毒G蛋白的截短表達與鑒定[J];中國生物工程雜志;2008年12期

5 王永輝;Synagis預(yù)防呼吸合胞體病毒(RSV)感染安全而有效[J];湖南中醫(yī)藥導(dǎo)報;2000年01期

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本文編號：1736724