本文選題：豬　切入點(diǎn)：黏菌素　出處：《吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：多黏菌素在20世紀(jì)60年代被廣泛用于治療革蘭氏陰性菌感染,因多黏菌素類藥物抗菌譜窄且具有較嚴(yán)重的腎毒性和神經(jīng)毒性等不良反應(yīng),在20世紀(jì)80年代,被抗菌譜更廣、不良反應(yīng)更小的抗菌藥物如β-內(nèi)酰胺類抗生素所替代,在臨床上逐漸被限制使用,但是近幾年隨著耐碳青霉烯類抗生素菌株的出現(xiàn),多黏菌素類抗生素作為治療多重耐藥菌感染,又被重新應(yīng)用于臨床,使用頻率也趨增加,并被視為臨床抗感染的最后選擇。2015年劉建華首次提出了腸桿菌科質(zhì)粒介導(dǎo)的mcr-1耐黏菌素機(jī)制,相關(guān)研究證實mcr-1基因不僅可以從動物身上分離得到,從人和肉類食物中也可分離得到,且分離出的耐黏菌素的菌株主要為大腸埃希菌。為比較分析獲得我國不同地區(qū)豬不同生長階段糞便中攜帶耐黏菌素大腸埃希菌的本地數(shù)據(jù),闡明黏菌素耐藥基因擴(kuò)散和水平傳播機(jī)制,本研究采集來自吉林省長春市、吉林省梅河口市、甘肅省張掖市、甘肅省慶陽市四個地區(qū)共563份豬糞便樣品,通過黏菌素抗性選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)、PCR方法鑒定耐黏菌素大腸埃希菌;使用PCR的方法篩選黏菌素耐藥基因;使用多重PCR的方法對耐黏菌素大腸埃希菌進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化分群、質(zhì)粒分型實驗;通過最小抑菌濃度(MIC)實驗確定耐黏菌素大腸埃希菌分離株對黏菌素的耐藥值;通過接合轉(zhuǎn)移實驗來確定耐藥基因擴(kuò)散、水平傳播機(jī)制。結(jié)果顯示:從來自吉林省長春市、吉林省梅河口市、甘肅省張掖市、甘肅省慶陽市四個地區(qū)共563份豬糞便樣品分離鑒定出273株耐黏菌素大腸埃希菌,總分離率為48.5%。針對273株分離株檢測黏菌素耐藥基因mcr-1,mcr-1耐藥基因的檢出率為100%。對273株耐黏菌素大腸埃希菌分離株進(jìn)行了系統(tǒng)進(jìn)化分群,結(jié)果顯示除慶陽市育肥階段外,長春市、梅河口市和張掖市三個地區(qū)在育成、育肥階段均以A群為主要優(yōu)勢群,B1群次之。四個不同地區(qū)分離株在哺乳階段的系統(tǒng)進(jìn)化分群結(jié)果存在稍微差別。對273株耐黏菌素大腸埃希菌分離株進(jìn)行質(zhì)粒復(fù)制子基因分型。大腸埃希菌常見質(zhì)粒復(fù)制子基因分型檢測,結(jié)果顯示共檢測到11種質(zhì)粒型,不同地區(qū)的分離株均以IncFIB型質(zhì)粒(41.8%,114/273)為主,其次為IncY型質(zhì)粒(14.3%,39/273),IncFIC型質(zhì)粒(8.8%,24/273)等;可攜帶mcr-1基因質(zhì)粒復(fù)制子基因分型檢測,結(jié)果顯示不同地區(qū)的分離株主要為X4型質(zhì)粒(38.1%,104/273),其次為I2型質(zhì)粒(26.4%,72/273)等。挑選四個不同地區(qū)不同生長階段的172株樣品分離株進(jìn)行接合轉(zhuǎn)移實驗,結(jié)果發(fā)現(xiàn)有123株接合轉(zhuǎn)移成功,接合轉(zhuǎn)移發(fā)生率為71.5%(123/172),且接合子均攜帶mcr-1基因,說明mcr-1基因位于接合性質(zhì)粒上,并且可以伴隨著質(zhì)粒發(fā)生轉(zhuǎn)移、傳播和擴(kuò)散。針對挑選的四個不同地區(qū)不同生長階段的172株樣品分離株及接合轉(zhuǎn)移成功獲得的123株接合子做了最小抑菌濃度(MIC)實驗,結(jié)果顯示不同地區(qū)分離株對黏菌素的MIC值主要為8μg/mL(83.7%144/172),其次為4μg/mL(14.5%25/172)、16μg/mL(1.8%3/172)。在發(fā)生水平轉(zhuǎn)移后大部分接合子對黏菌素的MIC值保持一致(86.2%106/123),部分接合子發(fā)生升高(7.3%9/123)或降低(6.5%8/123)的變化。本研究通過對不同地區(qū)豬不同生長階段耐黏菌素大腸埃希菌的監(jiān)測所獲得的數(shù)據(jù),初步掌握了豬不同生長階段耐黏菌素大腸埃希菌的動態(tài)變化,為mcr-1耐黏菌素機(jī)制的研究提供參考數(shù)據(jù)。
[Abstract]:Polymyxin in 1960s are widely used in the treatment of gram negative bacterial infections, due to adverse reactions, polymyxin drugs narrow antimicrobial spectrum and has a more severe renal toxicity and neurotoxicity in 1980s, by the broader antibacterial spectrum, less adverse drug reaction such as beta lactam antibiotics substitute in clinic has been restricted but in recent years with the emergence of carbapenem resistant strains, polymyxin antibiotics for the treatment of multi drug resistant bacteria infection, and was re used in the clinical use of frequency is also increasing, and is considered the final choice.2015 for clinical anti infection Liu Jianhua first proposed colistins mechanism mcr-1 resistant Enterobacteriaceae plasmid mediated, related studies have confirmed that mcr-1 gene not only can be isolated from the animal body, from human and meat food can also be separated, and the separated resistance Colistin was mainly Escherichia coli. Comparison and analysis of the local data carrying resistance to polymyxin E. coli for pigs in different regions of China at different growth stages in feces, clarify the colistin resistant gene diffusion and horizontal transmission mechanism, this study collected from Jilin City, Jilin province governor spring, Meihekou City, Gansu City, Zhangye Province Qingyang City, Gansu Province four area, a total of 563 swine fecal samples by selective culture medium of colistin resistant, resistant to polymyxin PCR method for identification of Escherichia coli; using the PCR method for screening of colistin resistance gene; the phylogenetic clustering of colistin resistant Escherichia coli by multiplex PCR method, plasmids experiment; the minimum inhibitory concentration (MIC) experiment to determine the resistance to colistin Escherichia coli isolates of colistin resistance value; by conjugation experiment to determine the spread of resistance genes, the level of transfer Sowing mechanism. The results showed that the Changchun from Jilin Province, Jilin city of Meihekou Province, Gansu Province, Zhangye City, Gansu Province, Qingyang City, a total of four area 563 swine fecal samples were isolated and identified 273 strains of Escherichia coli in myxomycetes, the total isolation rate is 48.5%. for 273 isolates detected colistin resistant gene mcr-1 mcr-1, the detection rate of resistant gene 100%. in Escherichia coli isolated from the phylogenetic grouping of 273 strains were resistant to slime, the result shows that in the city of Qingyang City, fattening stage, Changchun, Meihekou city and Zhangye city in three areas of incubation, the fattening stage in A group was the dominant group, B1 group the phylogenetic clustering results. Isolates in lactation stage are slightly different in different regions. Four of 273 strains of colistin resistant Escherichia coli isolates were plasmid replicon. The genotype of Escherichia coli plasmid replicon common genotype. Test results show that the 11 type plasmids were detected in different regions of the isolates were IncFIB type plasmid (41.8%, 114/273), followed by type IncY plasmid (14.3%, 39/273), IncFIC (8.8%, 24/273) plasmid; mcr-1 gene carrying plasmid replicon genotyping results showed. Different regions of the isolates were mainly X4 plasmid (38.1%, 104/273), followed by type I2 plasmid (26.4%, 72/273). The selection of four different regions in different growth stages of 172 strains isolates by conjugation experiment, the results showed that 123 strains conjugation, conjugation rate was 71.5% (123/172), and the zygote were carrying mcr-1 gene, mcr-1 gene located on the plasmid, and may be accompanied by a plasmid transfer and spread. In four different regions selected in different growth stages of 172 strains isolated from samples and conjugative transfer success 123 strains of zygote had minimal inhibitory concentration (MIC) experiments, the results showed that different isolates of colistin MIC value of 8 g/mL (83.7%144/172), followed by 4 g/mL (14.5%25/172), 16 g/mL (1.8%3/172). In the event of horizontal transfer most of zygote to colistin MIC the value of consistency (86.2%106/123), merozygote were significantly increased (7.3%9/123) or lower (6.5%8/123) changes. This study through the monitoring of different regions in different growth stages of pig resistance to colistin of Escherichia coli in data obtained from the initial grasp of the dynamic changes of pigs in different growth stages of colistin resistant Escherichia coli, provide the reference data of colistin resistant mechanism of mcr-1.

【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S852.6

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9 吳，

本文編號：1693392