本文選題：I型鴨甲型肝炎病毒　切入點：VP基因　出處：《江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報》2017年03期

【摘要】：為在昆蟲細(xì)胞中表達(dá)Ⅰ型鴨甲型肝炎病毒(Duck hepatitis A virus type-I,DHAV-I)SH株的主要結(jié)構(gòu)蛋白VP3,首先根據(jù)DHAV-I SH株VP3基因序列設(shè)計1對引物,RT-PCR方法擴(kuò)增出VP3基因,克隆至桿狀病毒表達(dá)載體p Fast Bac1,獲得重組桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體p FB-VP3,將其轉(zhuǎn)化到DH10Bac感受態(tài)細(xì)胞中,經(jīng)抗性和藍(lán)白斑篩選,獲得重組穿梭質(zhì)粒r Bacmid-VP3,在脂質(zhì)體介導(dǎo)下轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞Sf9,獲得重組桿狀病毒r Bac-VP3。間接免疫熒光結(jié)果顯示重組蛋白獲得了正確表達(dá),能與鴨抗全病毒陽性血清發(fā)生特異性反應(yīng)。Western blot結(jié)果顯示表達(dá)的重組蛋白分子量約為27 000。表明,DHAV-I SH株的主要結(jié)構(gòu)蛋白VP3在昆蟲細(xì)胞中獲得了成功表達(dá),為VP3結(jié)構(gòu)蛋白的功能研究及相關(guān)亞單位疫苗的研制奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:In order to express the main structural protein VP3 of Duck hepatitis A virus type-I DHAV-ISH strain in insect cells, a pair of primers RT-PCR was designed to amplify the VP3 gene according to the VP3 gene sequence of DHAV-I SH strain.The recombinant baculovirus transfer vector, pFB-VP3, was cloned into baculovirus expression vector p Fast Bac1 and transformed into DH10Bac competent cells.The recombinant shuttle plasmid r Bacmid-VP3 was obtained and transfected into insect cell Sf9 by liposome, and the recombinant baculovirus rBac-VP3 was obtained.The results of indirect immunofluorescence showed that the recombinant protein was correctly expressed and could react specifically with duck anti-virus positive serum. Western blot showed that the molecular weight of the expressed recombinant protein was about 27000.The results showed that the main structural protein VP3 of DHAV-I SH strain was successfully expressed in insect cells, which laid a foundation for the functional study of VP3 structural protein and the development of related subunit vaccine.
【作者單位】： 江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院/江蘇省獸用生物制藥高技術(shù)研究重點實驗室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項目(31302096) 江蘇省農(nóng)業(yè)科技支撐項目(BE2013415) 江蘇省六大人才高峰項目(NY-009)
【分類號】：S852.65

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本文編號：1688096