發(fā)布時(shí)間：2018-03-28 18:17

  本文選題：卵母細(xì)胞　切入點(diǎn)：熱應(yīng)激　出處：《河北農(nóng)業(yè)大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：本試驗(yàn)的目的是研究熱應(yīng)激對(duì)豬卵母細(xì)胞體外成熟的影響,以及在成熟培養(yǎng)基中添加褪黑素對(duì)熱應(yīng)激豬卵母細(xì)胞體外成熟的作用。以豬卵巢中分離出的GV期COCs為研究對(duì)象,通過體外41℃生理熱應(yīng)激4h后成熟至MII期,對(duì)卵母細(xì)胞中線粒體DNA拷貝數(shù)、胞質(zhì)中線粒體分布情況、線粒體染色熒光強(qiáng)度、核編碼線粒體相關(guān)基因和線粒體編碼基因的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè),以及觀察孤雌激活后胚胎的發(fā)育情況。將豬卵母細(xì)胞按對(duì)照組(C組)、正常培養(yǎng)加10-9M褪黑素組(C+M(-9)組)、正常培養(yǎng)加10-8M褪黑素組(C+M(-8)組)、熱應(yīng)激組(H組)、熱應(yīng)激加10-9M褪黑素組(H+M(-9)組)、熱應(yīng)激加10-8M褪黑素組(H+M(-8)組)隨機(jī)分成6組,體外成熟培養(yǎng)至MII期,孤雌激活后觀察胚胎發(fā)育情況,試驗(yàn)結(jié)果顯示:與C組相比,C+M(-8)組能夠顯著提高豬卵母細(xì)胞的囊胚發(fā)育率(P0.05);在H組中,熱應(yīng)激顯著的降低了囊胚發(fā)育率(P0.05),熱應(yīng)激培養(yǎng)基中添加褪黑素能夠提高囊胚率(P0.05),但是H+M(-8)組能夠顯著的提高囊胚率(P0.05)而H+M(-9)組只有提高的趨勢(shì)但差異并不顯著(P0.05)。其中卵母細(xì)胞的卵裂率并不受不同處理的影響,各處理的卵裂率差異不顯著(P0.05)。線粒體拷貝數(shù)可作為衡量卵母細(xì)胞成熟的重要指標(biāo)之一,本試驗(yàn)進(jìn)一步研究熱應(yīng)激對(duì)豬卵母細(xì)胞中mt DNA拷貝數(shù)的影響。同樣卵母細(xì)胞隨機(jī)分成六組,成熟培養(yǎng)至MII期,利用RT-PCR方法對(duì)卵母細(xì)胞中mt DNA拷貝數(shù)進(jìn)行量化,試驗(yàn)結(jié)果表明:與C組相比,C+M(-8)組顯著的提高了卵母細(xì)胞中mt DNA拷貝數(shù)(P0.05);在熱應(yīng)激的條件下,H組的mt DNA顯著降低(P0.05),而H+M(-9)組和H+M(-8)組都能夠顯著的提高mt DNA拷貝數(shù)(P0.05)。這與孤雌胚胎發(fā)育的數(shù)據(jù)吻合,說明熱應(yīng)激降低卵母細(xì)胞的發(fā)育潛能是通過減少胞質(zhì)中mt DNA拷貝數(shù)來影響卵母細(xì)胞胞質(zhì)的成熟。在卵母細(xì)胞成熟過程中,線粒體的分布也隨成熟的過程發(fā)生移位。利用Mito-Tracker染色觀察MII期豬卵母細(xì)胞中線粒體的分布情況。與C組相比,H組中細(xì)胞胞質(zhì)中線粒體分布不均,出現(xiàn)空洞,而H+M(-8)組中,線粒體又恢復(fù)了正常的分布。這說明褪黑素也通過影響線粒體的分布來提高卵母細(xì)胞成熟的質(zhì)量。同時(shí)對(duì)Mito-Tracker染色熒光信號(hào)強(qiáng)度進(jìn)行定量分析得出,與C組相比,褪黑素能夠顯著提高C+M(-8)組的熒光信號(hào)強(qiáng)度(P0.05);而H組中,熱應(yīng)激使得線粒體染色強(qiáng)度明顯降低(P0.05),而H+M(-8)組又顯著提高了熒光信號(hào)強(qiáng)度(P0.05)。這說明褪黑素增加了卵母細(xì)胞中活性線粒體數(shù)量同時(shí)保持線粒體膜電位處于正常水平。在豬卵母細(xì)胞中與mt DNA復(fù)制相關(guān)的核編碼基因的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)得出:與C組相比,C+M(-8)組能夠顯著提高Tfb1m基因的表達(dá)(P0.05)。而H組中,Tfb1m、POLG2的表達(dá)顯著下降(P0.05),H+M(-8)組中Tfb1m、POLG2、POLG、Ssbp1的表達(dá)與H組相比都有顯著的提高(P0.05)。這說明褪黑素是通過調(diào)節(jié)核編碼線粒體相關(guān)基因的表達(dá)影響mt DNA拷貝數(shù),從而提高卵母細(xì)胞的質(zhì)量,以緩解熱應(yīng)激對(duì)其損傷。為進(jìn)一步研究核編碼基因與線粒體編碼基因之間的關(guān)系,選取了線粒體基因ND2和ND6進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果表明:與C組相比,C+M(-8)組顯著的提高了ND2和ND6基因的表達(dá)(P0.05),熱應(yīng)激顯著的降低了ND2和ND6基因的表達(dá)(P0.05),但在H組和H+M(-8)組并沒有顯著變化(P0.05)。綜上所述褪黑素在正常培養(yǎng)條件下提高線粒體基因的表達(dá),進(jìn)而增強(qiáng)氧化磷酸化為卵母細(xì)胞發(fā)育提供足量的ATP。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S828

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