本文選題：炎癥相關(guān)miRNAs　切入點：乳腺上皮細胞　出處：《畜牧獸醫(yī)學(xué)報》2016年01期

【摘要】：小分子RNA(miRNA)是近年來發(fā)現(xiàn)的一類內(nèi)源性、非編碼單鏈小RNA,其在乳腺組織免疫防御過程中發(fā)揮的調(diào)控作用逐漸引起了人們的關(guān)注。作者擬用qRT-PCR檢測炎癥相關(guān)miRNAs在LPS誘導(dǎo)的小鼠乳腺上皮細胞炎癥反應(yīng)中的表達變化;構(gòu)建3種miR-223真核表達載體并檢驗重組載體的轉(zhuǎn)染效率。用不同濃度LPS處理小鼠乳腺上皮細胞(EpH4-Ev)48h,qRT-PCR檢測miR-223、miR-146a、miR-181a和miR-155的表達變化。以EpH4-Ev細胞基因組DNA為模板,PCR擴增pre-miR-223序列,以質(zhì)粒Minicircle、pcDNA3.1(+)和轉(zhuǎn)座子piggyBac為母本構(gòu)建3種miR-223真核表達載體,將其轉(zhuǎn)染EpH4-Ev細胞,通過觀察熒光、qRT-PCR檢測miR-223的表達,評價重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率。結(jié)果:qRT-PCR檢測結(jié)果表明,LPS誘導(dǎo)EpH4-Ev細胞炎癥反應(yīng)時,4種炎癥相關(guān)miRNAs的表達均顯著(P0.05或P0.01)增加,并呈現(xiàn)不同程度的劑量依賴性;重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染EpH4-Ev細胞后,qRT-PCR檢測結(jié)果顯示,Mini-miR-223質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組的miR-223表達水平無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05);PBmiR-223和pcDNA-miR-223轉(zhuǎn)染EpH4-Ev細胞后,miR-223的表達均極顯著(P0.001)增加。本研究表明炎癥相關(guān)miRNAs參與LPS誘導(dǎo)小鼠EpH4-Ev細胞的炎性反應(yīng)過程。成功構(gòu)建3種miR-223真核表達載體,為后續(xù)miRNAs在乳腺炎癥反應(yīng)中的功能研究奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:Small molecule RNAs miRNAs are a kind of endogenous RNAs that have been discovered in recent years. The role of non-coding single-stranded small RNAs in the immune defense of mammary gland has attracted more and more attention. The authors intend to use qRT-PCR to detect the expression of inflammatory miRNAs in mouse mammary epithelial cells induced by LPS. Three miR-223 eukaryotic expression vectors were constructed and the transfection efficiency of the recombinant vectors was tested. The expression changes of miR-2223 miR-146a miR-181a and miR-155 in mouse mammary epithelial cells treated with different concentrations of LPS were detected by qRT-PCR. Pre-miR-223 sequences were amplified by PCR using genomic DNA of EpH4-Ev cells as template. Three kinds of miR-223 eukaryotic expression vectors were constructed from plasmid Minicircleus pcDNA3.1 () and transposon piggyBac as female parent, and were transfected into EpH4-Ev cells. The expression of miR-223 was detected by fluorescence qRT-PCR. Results the results showed that the expression of four kinds of inflammatory miRNAs was significantly increased in EpH4-Ev cells induced by LPS-induced inflammation (P0.05 or P0.01), and showed a dose-dependent manner. After transfection of the recombinant plasmid into EpH4-Ev cells, the results of qRT-PCR showed that there was no significant difference in the expression level of miR-223 between the two groups. The expression of miRNAs in EpH4-Ev cells transfected with pcDNA-miR-223 was significantly higher than that in the control group (P0.001). This study indicated that the inflammation related miRNAs was involved in LPS inducement. Three kinds of miR-223 eukaryotic expression vectors were successfully constructed by guiding the inflammatory reaction of mouse EpH4-Ev cells. To lay a foundation for the study of the function of miRNAs in the inflammation of mammary gland.
【作者單位】： 河南農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)部動物生化與營養(yǎng)重點開放實驗室;河南農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)工程學(xué)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(31470120)
【分類號】：S852.3

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本文編號：1661719