本文選題：羊口瘡病毒　切入點(diǎn)：致弱　出處：《內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：本研究將青島某發(fā)病羊場(chǎng)分離保存的ORFV/QD/2015株,在山羊皮膚成纖維細(xì)胞上連續(xù)傳90代,根據(jù)Genebank上發(fā)表的羊口瘡全基因序列設(shè)計(jì)并合成4對(duì)特異性引物并擴(kuò)增ORFV/QD/2015強(qiáng)毒株與傳代90代后毒株的ORF020、ORF112、ORF117和ORF127基因片段,并將其分別克隆到PMD-19T載體,轉(zhuǎn)化到DH5α感受態(tài)細(xì)胞,重組質(zhì)粒鑒定后進(jìn)行序列測(cè)定,用DNA Star軟件拼接測(cè)序結(jié)果,進(jìn)行生物學(xué)信息分析。試驗(yàn)結(jié)果顯示,羊口瘡病毒可以在山羊皮膚成纖維細(xì)胞上培養(yǎng),并產(chǎn)生細(xì)胞病變。將ORFV/QD/2015強(qiáng)毒株與傳代90代毒株的質(zhì)粒測(cè)序結(jié)果與Genebank已經(jīng)公布的9組ORFV全基因序列中的ORF020、ORF112、ORF117、ORF127基因比對(duì)結(jié)果中ORFV/QD/2015強(qiáng)毒株與公布的毒株毒力相關(guān)基因的同源性高,傳代90代毒株與公布的毒株毒力相關(guān)基因的同源性有所降低,強(qiáng)毒株與傳代90代毒株4組毒力相關(guān)基因核苷酸比對(duì)結(jié)果顯示,ORF020基因氨基酸發(fā)生7處變異;ORF112基因氨基酸發(fā)生52處變異;ORF117基因氨基酸發(fā)生14處變異;ORF127基因氨基酸發(fā)生15處變異。比對(duì)后發(fā)現(xiàn)核苷酸與氨基酸變異最多的為ORF112基因,最少的為ORF020基因,說明羊口瘡病毒致弱后可能與這些毒力相關(guān)基因的變異有很大聯(lián)系。兩毒株間的抗原指數(shù)也有明顯變異。這些變異為毒力相關(guān)基因在強(qiáng)弱毒之間造成的差異提供試驗(yàn)基礎(chǔ)。
[Abstract]:In this study, the ORFV/QD/2015 strain isolated from an infected sheep farm in Qingdao was transferred to goat skin fibroblasts for 90 consecutive generations. According to the whole gene sequence of sheep mouth ulcer published on Genebank, four pairs of specific primers were designed and synthesized, and the ORF020 ORF112ORF117 and ORF127 gene fragments of ORFV/QD/2015 virulent strain and virulent strain were amplified and cloned into PMD-19T vector and transformed into DH5 偽 competent cells, respectively. The recombinant plasmid was sequenced and sequenced by DNA Star software, and the biological information was analyzed. The results showed that the goat mouth sore virus could be cultured on goat skin fibroblasts. The results of sequencing the plasmids of ORFV/QD/2015 virulent strains and those of subculture 90 strains were compared with the ORF020 ORF112ORF117 ORF127 gene sequence published by Genebank. The results showed that the virulence related genes of ORFV/QD/2015 virulence strains were highly homologous to those of the published virulence genes. The homology of virulence related genes between the 90 generation strains and the published strains was decreased. Nucleotide comparison of virulence related genes in 4 groups of virulence related genes between virulent strains and generation 90 strains showed that ORF020 gene had 7 amino acids and ORF112 gene had 52 amino acids, and ORF117 gene amino acids had 14 mutations and ORF127 genes had amino acids. ORF112 gene was found to have the most variation between nucleotide and amino acid. The least common is the ORF020 gene. These results suggest that the weakened sheep mouth sore virus may be closely related to the variation of these virulence related genes, and the antigenic index of the two strains also has obvious variation. These variations provide the experimental basis for the difference between the virulence related genes and the virulence.
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S852.65

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1651917