本文選題：豬圓環(huán)病毒型　切入點：ORF基因　出處：《中國預防獸醫(yī)學報》2017年06期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：為建立穩(wěn)定表達攜帶SFB標簽的豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)Cap蛋白的細胞株并研究其誘導凋亡活性,本研究利用Gateway系統(tǒng)構建真核表達載體p DEST-SFB-ORF2,轉染PK15細胞,嘌呤霉素抗性篩選,western blot和免疫共沉淀試驗鑒定,獲得2株穩(wěn)定表達攜帶SFB標簽的Cap蛋白的PK15細胞株。間接免疫熒光檢測發(fā)現(xiàn)重組Cap蛋白在部分細胞內呈點狀熒光分布,可能形成病毒性顆粒;流式細胞儀檢測表明Cap蛋白的表達可誘導PK15細胞凋亡。本研究成功表達攜帶SFB標簽的PCV2 Cap蛋白,并驗證了其誘導凋亡活性,同時為下一步通過串聯(lián)親合純化/質譜方法鑒定Cap蛋白的互作蛋白研究奠定基礎。
[Abstract]:In order to establish a stable cell line expressing porcine circovirus type 2 PCV2Cap protein carrying SFB label and to study its apoptosis-inducing activity, the eukaryotic expression vector pDEST-SFB-ORF2 was constructed by Gateway system and transfected into PK15 cells. Two strains of PK15 cells stably expressing Cap protein carrying SFB label were obtained by Western blot and immunoprecipitation assay. Indirect immunofluorescence assay showed that the recombinant Cap protein was dotted in some cells. The expression of Cap protein can induce apoptosis of PK15 cells. In this study, we successfully expressed the PCV2 Cap protein carrying SFB tag, and verified its apoptotic activity. It also lays a foundation for the further identification of Cap protein by tandem affinity purification / mass spectrometry.
【作者單位】： 浙江理工大學生命科學學院;
【基金】：國家自然科學基金(31101831) 浙江省自然科學基金(LY15C010006) 浙江理工大學521人才培養(yǎng)計劃
【分類號】：S852.651

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