本文選題：Nesfatin-1/NUCB2　切入點：生殖軸　出處：《安徽農(nóng)業(yè)大學》2015年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的:探討Nesfatin-1/NUCB2在雄性大鼠下丘腦-垂體-睪丸軸上的表達和作用。分析Nesfatin-1/NUCB2蛋白及其mRNA在不同發(fā)育階段雄性大鼠生殖軸和血清中的表達變化。結合外源性Nesfatin-1/NUCB2對促性腺激素、性腺激素的分泌及其相關基因表達的影響以及對體外培養(yǎng)睪丸間質(zhì)細胞分泌睪酮及其合成相關基因的影響。在組織學、內(nèi)分泌學、細胞和分子水平闡明Nesfatin-1/NUCB2在雄性大鼠生殖軸的表達及其作用制。方法:(1)10d,25d,45d雄性大鼠心臟灌注后取下丘腦、垂體和睪丸,經(jīng)過4%多聚甲醛固定后,制做石蠟切片,采用免疫熒光法觀察Nesfatin-1/NUCB2的定位,并用形態(tài)學分析軟件統(tǒng)計平均熒光強度。(2)取不同發(fā)育階段(10d,25d,45d,65d)雄性SD大鼠血液、下丘腦、垂體和睪丸,分別采用實時熒光定量PCR法(quantificational real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)和酶聯(lián)免疫分析法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)分析Nesfatin-1/NUCB2 mRNA在下丘腦、垂體和睪丸上的表達及血清中Nesfatin-1濃度的變化。(3)45d,65d雄性大鼠麻醉后固定于腦立體定位儀,試驗組和對照組分別側腦室注射10μL的Nesfatin-1/NUCB2(含50 ng)和生理鹽水,60 min后斷頭處死,取血液、下丘腦、垂體和睪丸,ELISA檢測血清中促黃體素(luteinizing hormone,LH)、促卵泡素(follicle-stimulate hormone,FSH)和睪酮(Testosterone,T)的濃度;qRT-PCR檢測下丘腦GnRH和Kiss-1、垂體FSHβ和LHβ、睪丸3β-HSD、17β-HSD、P450scc和StAR mRNAs的表達水平。(4)45d雄性大鼠斷頭處死,收集睪丸間質(zhì)細胞進行體外培養(yǎng),單獨添加不同劑量的Nesfatin-1/NUCB2以及共添加Nesfatin-1/NUCB2和hCG,48h后收集培養(yǎng)液和細胞,ELISA測培養(yǎng)液中T的濃度,qRT-PCR分析細胞中3β-HSD、17β-HSD、P450scc和StAR mRNA的表達水平。結果:(1)Nesfatin-1/NUCB2在10d,25d,45d雄性大鼠的正中隆起、室旁核、弓狀核、室周核、視上核、下丘腦外側區(qū),腺垂體以及睪丸間質(zhì)細胞上均有分布。但在45d大鼠下丘腦正中隆起和弓狀核,免疫熒光強度顯著高于10d和25d(P0.05);在10d大鼠的室旁核、室周核和下丘腦外側區(qū),免疫熒光強度顯著低于25d和45d(P0.05),而25d和45d則差異不顯著(P0.05);在下丘腦視上核、腺垂體和睪丸間質(zhì)細胞,免疫熒光強度隨年齡增加(從10d到45d)呈現(xiàn)逐漸上升的趨勢(P0.05)。(2)Nesfatin-1/NUCB2 mRNA在10d,25d,45d,65d的雄性大鼠下丘腦、垂體、睪丸中均有表達;在下丘腦,45d大鼠Nesfatin-1/NUCB2mRNA表達水平顯著低于10d(P0.05);在垂體和睪丸,45d和65d的表達水平顯著高于10d和25d(P0.05)。大鼠血清中Nesfatin-1/NUCB2的濃度在25d顯著低于10d、45d和65d(P0.05)。(3)側腦室注射Nesfatin-1/NUCB2顯著降低雄性大鼠血清中FSH、LH和T的含量(P0.05);下丘腦的GnRH、Kiss-1、垂體FSHβ、LHβ和睪丸StAR mRNAs的水平都顯著低于對照組(P0.05);Nesfatin-1顯著提高65d但降低45d大鼠睪丸3β-HSD、17β-HSD、P450scc mRNAs的表達(P0.05)。(4)在體外,1ng/ml Nesfatin-1/NUCB2顯著提高睪丸間質(zhì)細胞T的分泌和GnRH、Kiss-1、FSHβ、LHβ3β-HSD、17β-HSD、P450scc、StAR mRNAs的表達(P0.05)。結論:(1)Nesfatin-1/NUCB2蛋白及其mRNA廣泛存在于雄性大鼠下丘腦、垂體和睪丸,但其表達水平隨年齡不同而有差異。(2)Nesfatin-1在25d大鼠血清中濃度最低。(3)Nesfatin-1/NUCB2在中樞水平抑制45d和65d雄性大鼠促性腺激素和睪酮的分泌以及下丘腦的GnRH、Kiss-1、垂體FSHβ、LHβ和睪丸StAR mRNAs的表達。(4)在體外,1ng/ml Nesfatin-1/NUCB2促進睪丸間質(zhì)細胞T的分泌以及T合成相關基因的表達。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：安徽農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S814.1

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