唐姣玉1,袁自強(qiáng)2,何理平3
（1.湖南省衡陽(yáng)師范學(xué)院生命科學(xué)系，湖南 衡陽(yáng)  421008；2.湖南省衡陽(yáng)市石鼓區(qū)農(nóng)村工作辦公室， 湖南 衡陽(yáng)  421001
3.南華大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)部，湖南 衡陽(yáng)  421001）

 

摘要：為研究黃芪多糖對(duì)仔兔免疫功能的影響，試驗(yàn)選取30日齡斷奶仔兔80只，隨機(jī)分為4組，每組20只。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)組，分別在基礎(chǔ)日糧中加入100、200 和400 mg/kg的黃芪多糖，試驗(yàn)期為28 d。結(jié)果表明，試驗(yàn)各組免疫器官指數(shù)、T淋巴細(xì)胞陽(yáng)性率極顯著高于對(duì)照組（P＜0.01），IgA和IgG含量顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）。結(jié)果提示，在飼料中添加黃芪多糖可以增強(qiáng)仔兔的免疫功能。
關(guān)鍵詞：黃芪多糖；斷奶仔兔；生長(zhǎng)性能；免疫功能
中圖分類(lèi)號(hào)：S829.1                 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A                 文章編號(hào)：1007－273X（２０１３）０5-0007-02

 

黃芪屬豆科多年生草本植物，是一種常用中藥，味甘、性溫，具有補(bǔ)氣升陽(yáng)、固表止汗、托毒排膿和生肌等功效［1］。黃芪多糖（Astragalus polysacharin，APS）是黃芪重要的天然有效成分，其主要成分為葡萄糖和阿拉伯糖的多聚糖，具有增強(qiáng)免疫功能、提高巨噬細(xì)胞活性、雙向調(diào)節(jié)血糖的作用［2］，用其制成的靜脈注射液適用于化療后的滋補(bǔ)，可提高人體的免疫力［3］。斷奶仔兔生長(zhǎng)發(fā)育快，抗病性差，在生產(chǎn)中農(nóng)戶(hù)散養(yǎng)較多、管理粗放，普遍存在死亡率較高現(xiàn)象［4］。本研究用黃芪多糖作為斷奶仔兔飼料添加劑代替抗生素類(lèi)藥物，研究仔兔在斷奶應(yīng)激和飼料配制較粗情況下，黃芪多糖對(duì)斷奶仔兔免疫功能的影響，旨在為開(kāi)發(fā)家畜飼料綠色添加劑提供科學(xué)依據(jù)。
1  材料與方法
1.1  基礎(chǔ)日糧
肉兔全價(jià)顆粒料在南華大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心購(gòu)買(mǎi)。配方比例為：玉米 30%、高粱2%、麩皮12%、豆粕23%、草粉30%、骨粉2.5%、食鹽0.5%。其營(yíng)養(yǎng)水平為：粗蛋白18.08%，消化能 11.02 MJ/kg，粗纖維0.9%，鈣0.86%，磷 0.69%。
1.2  試驗(yàn)動(dòng)物與材料
    試驗(yàn)用仔兔購(gòu)于南華大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。所使用的黃芪多糖為實(shí)驗(yàn)室提取，純度60%。
1.3  試驗(yàn)設(shè)計(jì)
試驗(yàn)期從2012年10月12日至2012年11月16日，預(yù)試期為7 d，正試期為28 d，在衡陽(yáng)師范學(xué)院生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。將80只30日齡斷奶仔兔按體重隨機(jī)分為4組，每組20只。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)1組、試驗(yàn)2組、試驗(yàn)3組分別在基礎(chǔ)日糧中加入100、200和400 mg/kg黃芪多糖。
1.4  樣品的采集與處理
試驗(yàn)結(jié)束前禁食12 h，頸靜脈采血5 mL緩慢注入潔凈離心管內(nèi)，靜置3 h，3 000 r/min離心10 min，制備血清，并將血清分裝到1mL離心管中冷凍保存?zhèn)溆�。再將采血處理后的兔子頸動(dòng)脈放血致死，取其胸腺和脾臟，并剔除脂肪。
1.5  指標(biāo)的測(cè)定
1.5.1  免疫器官指數(shù)的測(cè)定  迅速稱(chēng)取已剔除脂肪的脾臟和胸腺的鮮重，并計(jì)算脾臟和胸腺指數(shù)。
    免疫器官指數(shù)=器官重/活體重
1.5.2  T淋巴細(xì)胞陽(yáng)性率的測(cè)定  采用α-醋酸萘酯酶(ANAE)法［5］。制備淋巴細(xì)胞懸液，涂片，自然風(fēng)干后，浸入 37 ℃孵育液中孵育40~60 min，自來(lái)水沖洗片刻，濾紙吸干；2％甲基綠溶液染色 1~5 min，自來(lái)水沖洗，濾紙吸干，鏡檢。凡胞漿內(nèi)出現(xiàn)大小、數(shù)量不等深紅色顆粒的為 ANAE陽(yáng)性細(xì)胞(T淋巴細(xì)胞)，，計(jì)算 200個(gè)淋巴細(xì)胞中的ANAE陽(yáng)性細(xì)胞率。
1.5.3  免疫球蛋白的測(cè)定  采用間接酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定免疫球蛋白IgA、IgG的含量。
1.6  數(shù)據(jù)處理及分析
    試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS15.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
2  結(jié)果與分析
2.1  黃芪多糖對(duì)仔兔免疫器官指數(shù)的影響
    由表2可以看出，試驗(yàn)2組仔兔脾臟指數(shù)最高，極顯著高于試驗(yàn)1組、試驗(yàn)3組和對(duì)照組（P＜0.01）；試驗(yàn)1組和試驗(yàn)3組脾臟指數(shù)次之，均極顯著高于對(duì)照組（P＜0.01），試驗(yàn)1組和試驗(yàn)3組之間差異不顯著（P＞0.05）。對(duì)于胸腺指數(shù)，試驗(yàn)2組顯著高于試驗(yàn)1組和試驗(yàn)3組（P＜0.05）, 試驗(yàn)1組和試驗(yàn)3組又顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），試驗(yàn)1組和試驗(yàn)3組之間差異不顯著（P＞0.05）。
2.2  黃芪多糖對(duì)仔兔T淋巴細(xì)胞數(shù)量的影響
    試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，對(duì)照組、試驗(yàn)1組、試驗(yàn)2組和試驗(yàn)3組的T淋巴細(xì)胞陽(yáng)性率分別為（62.35±6.30）%、（78.64±6.20）%、（98.32±5.57）%和（96.21±6.15）%，試驗(yàn)2組與試驗(yàn)3組之間差異不顯著（P＞0.05），但都極顯著高于試驗(yàn)1組（P＜0.01），3個(gè)試驗(yàn)組極其顯著高于對(duì)照組（P＜0.01）。
2.3  黃芪多糖對(duì)仔兔免疫球蛋白的影響
    由表3可知，免疫球蛋白IgA含量試驗(yàn)2組顯著高于試驗(yàn)1組和試驗(yàn)3組（P＜0.05），試驗(yàn)1組和試驗(yàn)3組顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），試驗(yàn)1組和試驗(yàn)3組之間差異不顯著（P＞0.05）。而免疫球蛋白IgG的含量各試驗(yàn)組顯著均高于對(duì)照組（P＜0.05），試驗(yàn)組之間差異不顯著（P＞0.05）。
3  小結(jié)與討論
脾臟和胸腺是兔的重要的免疫器官。一般認(rèn)為，免疫器官重量減少是免疫抑制所致，免疫器官重量增加是免疫增強(qiáng)的表現(xiàn)［6,7］。本研究發(fā)現(xiàn)，在仔兔飼料中添加黃芪多糖可以顯著提高仔兔脾臟和胸腺指數(shù)，說(shuō)明黃芪多糖可以促進(jìn)仔兔免疫器官綜合發(fā)育，提高機(jī)體的免疫功能。
ANAE陽(yáng)性淋巴細(xì)胞率反映了成熟T淋巴細(xì)胞的含量，代表了機(jī)體細(xì)胞免疫水平。本研究中，黃芪多糖添加100、20和400 mg/kg可分別增加ANAE陽(yáng)性淋巴細(xì)胞率26.13%、57.69%和54.31%。說(shuō)明添加黃芪多糖可以顯著提高仔兔細(xì)胞免疫水平。
免疫球蛋白是動(dòng)物受到抗原刺激后，體內(nèi)產(chǎn)生的能與抗原特異性相互作用的一類(lèi)球蛋白。IgG和IgA是仔兔體內(nèi)兩種重要的免疫球蛋白，IgG是生物體液內(nèi)主要的免疫球蛋白，約占血液中總免疫球蛋白含的75%，是機(jī)體抗感染免疫的主力抗體［8］。IgA在血清中的含量?jī)H次于IgG，占血清免疫球蛋白總量的10%～20%，在抵抗病原入侵方面極其重要［9］。本研究中在仔兔飼料中添加免疫球蛋白，能顯著提高仔兔的IgG和IgA的含量，說(shuō)明仔兔的體液免疫功能顯著增強(qiáng)。
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