本文選題：副豬嗜血桿菌　切入點(diǎn)：外膜囊泡　出處：《河南農(nóng)業(yè)大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：副豬嗜血桿菌(Haemophilus parasuis,HPS)屬于巴斯德桿菌科、嗜血桿菌屬,為一種多形性革蘭氏陰性短桿菌,多存在于豬上呼吸道,是一種共棲菌。該菌可引起以多發(fā)性漿膜炎、關(guān)節(jié)炎、腦膜炎為主要特征,有較高死亡率的豬格氏病。已鑒定出該菌有15個血清型,但還有部分菌株不能定型,且各菌株之間缺乏交叉免疫保護(hù)性,因此研發(fā)新型有效的副豬嗜血桿菌病疫苗已成為當(dāng)務(wù)之急。外膜囊泡(Outer membrane vesicle,OMV)是革蘭氏陰性菌生長到穩(wěn)定階段后,外膜向外周環(huán)境中釋放的包括整個外膜上的相關(guān)蛋白和脂多糖(Lipopolysaeeharide,LPS)成分的微小囊泡,不僅是致病性病原菌的毒力因子之一,而且具有很好的免疫原性,是極具潛力的新型疫苗抗原。副豬嗜血桿菌是革蘭氏陰性菌,但目前對其OMV了解甚少。為此,本研究開展了OMV主要組分及生物學(xué)特性初步研究。首先采用超速離心法提取血清5型HPS菌株OMV,通過密度梯度離心進(jìn)行純化,SDS-PAGE實(shí)驗(yàn)分析其主要蛋白組分,同時與同種菌株包含的胞質(zhì)蛋白(CP)、周質(zhì)蛋白(PP)及外膜蛋白OMP進(jìn)行比較,并用BCA法測定OMV的蛋白含量;通過PicoGreen法定量OMV中DNA濃度;進(jìn)一步通過動物試驗(yàn)研究其免疫原性和保護(hù)作用。在此基礎(chǔ)上,通過對純化的OMV做蛋白酶K處理,接種人喉癌上皮細(xì)胞,測定細(xì)胞上清中IL-8含量,初步研究OMV的免疫保護(hù)機(jī)制及分子基礎(chǔ)。研究結(jié)果表明:(1)副豬嗜血桿菌OMV的主要蛋白成分與外膜蛋白OMP的相似,并且其所含的蛋白主要分布于32~57KD;(2)DNA主要位于OMV腔內(nèi),并且含量遠(yuǎn)多于囊泡表面含有的DNA;(3)小鼠免疫OMV后,7天即產(chǎn)生高水平的ELISA抗體,二次免疫后能產(chǎn)生一定的攻毒保護(hù);(4)OMV誘導(dǎo)上皮細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子IL-8,且呈一定的劑量依賴性。這些生物學(xué)特性研究表明,OMV是HPS潛在的一種毒力因子和新型疫苗抗原,為副豬嗜血桿菌OMV疫苗的相關(guān)研究提供了依據(jù)。
[Abstract]:Haemophilus parasuisus (HPSs) belongs to the family Pasteulidae, Haemophilus, a pleomorphic gram-negative short bacilli, mostly found in the upper respiratory tract of pigs, is a common bacteria that can cause polyserositis and arthritis. Meningitis is the main characteristic of swine Grignard disease with high mortality. It has been identified that there are 15 serotypes of the strain, but some of the strains can not be typed, and there is no cross-immunity protection between the strains. Therefore, it is urgent to develop a new and effective vaccine against Haemophilus parasuis. Outer membrane vesiclev (OMV) is a Gram-negative bacterium that has grown to a stable stage. The microvesicles released by the outer membrane into the peripheral environment, including the proteins associated with the whole outer membrane and the lipopolysaccharide Lipopolysaeeharide LPSs, are not only one of the virulence factors of pathogenic bacteria, but also have good immunogenicity. Haemophilus paraswine is a gram-negative bacteria, but its OMV is little known. In this study, the main components and biological characteristics of OMV were preliminarily studied. First, OMV of serotype 5 HPS was extracted by ultracentrifugation, and its main protein components were purified by density gradient centrifugation. At the same time, the protein content of OMV was determined by BCA method, and the concentration of DNA in OMV was determined by PicoGreen, compared with cytoplasmic protein, pericytoplasmic protein and outer membrane protein OMP of the same strain. The immunogenicity and protective effect of the purified OMV were further studied by animal experiments. On this basis, the purified OMV was inoculated with human laryngeal carcinoma epithelial cells and the content of IL-8 in the supernatant was determined by the treatment of protease K. The immunological protective mechanism and molecular basis of OMV were preliminarily studied. The results showed that the main protein components of OMV of Haemophilus parais were similar to those of outer membrane protein OMP, and the protein mainly distributed in the cavity of OMV. Moreover, the content of ELISA antibody was much higher than that of DNA-3 on the surface of vesicle) 7 days after immunization with OMV, high level of ELISA antibody was produced in mice. After secondary immunization, OMV could induce the production of IL-8 in epithelial cells in a dose-dependent manner. These biological characteristics indicate that OMV is a potential virulence factor and a new vaccine antigen of HPS. It provides the basis for the research of Haemophilus parais OMV vaccine.
【學(xué)位授予單位】：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S852.61

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 溫華梅;;副豬嗜血桿菌的臨床分離鑒定與耐藥性分析[J];中國獸醫(yī)雜志;2009年12期

2 趙恒章;趙坤;余燕;李國旺;馬金友;張慧輝;;副豬嗜血桿菌蜂膠苗的制備及免疫效果試驗(yàn)[J];生物技術(shù);2009年06期

3 何麗麗;李春玲;王貴平;賈愛卿;楊冬霞;宣春玲;鄭鐵鎖;王金生;;廣東地區(qū)副豬嗜血桿菌的分離鑒定[J];中國畜牧獸醫(yī)文摘;2010年03期

4 楊國強(qiáng);;副豬嗜血桿菌診斷治療分析[J];科技致富向?qū)?2013年02期

5 蔣征;李軍星;姜平;柴其然;余飛;錢黎婷;;副豬嗜血桿菌分離與基因分型鑒定[J];畜牧與獸醫(yī);2008年06期

6 周雪;付利芝;王孝友;翟少欽;譚榮;丁玉春;;重慶地區(qū)副豬嗜血桿菌的分離鑒定及藥物敏感性分析[J];中國獸醫(yī)雜志;2011年12期

7 熊蕊;劉曉慧;左玉柱;范京惠;郭鳳柳;趙同欣;王娜;顏紅;;副豬嗜血桿菌感染豬的臨床癥狀及病理學(xué)觀察[J];科技致富向?qū)?2014年02期

8 張雷;張秀亮;鄭新添;余旭平;;副豬嗜血桿菌的分離與鑒定[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2008年02期

9 郭建強(qiáng);王傳寶;張彬;;副豬嗜血桿菌的分離鑒定與藥敏試驗(yàn)[J];中國動物保健;2008年06期

10 陸國林;何海健;;浙江省副豬嗜血桿菌的分離鑒定與藥敏試驗(yàn)[J];中國獸醫(yī)科學(xué);2010年06期

相關(guān)會議論文 前10條

1 胡明明;常月紅;張艷禾;司薇;謝芳;于申業(yè);劉慧芳;劉思國;王春來;;副豬嗜血桿菌“菌影”的制備[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學(xué)分會暨中國免疫學(xué)會獸醫(yī)免疫分會第八次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2010年

2 孫清蓮;荊汝頂;畢征;郝付全;劉海林;;某豬場副豬嗜血桿菌等病的診治報告[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會獸醫(yī)病理學(xué)分會第十三次學(xué)術(shù)討論會和中國病理生理學(xué)會動物病理生理專業(yè)委員會第十二次學(xué)術(shù)討論會論文集[C];2005年

3 車勇良;陳少鶯;周倫江;王隆柏;魏宏;莊向生;;副豬嗜血桿菌的分離與鑒定[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會動物傳染病學(xué)分會第十二次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2007年

4 王東方;;副豬嗜血桿菌的診斷與治療[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會動物傳染病學(xué)分會第四次豬病防控學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2010年

5 朱杰儀;劉健;羅滿林;;副豬嗜血桿菌毒力基因的研究進(jìn)展[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第七屆全國會員代表大會暨第十三次學(xué)術(shù)研討會論文集（上冊）[C];2009年

6 周宗清;鄒勇;王英;張春玲;蔣鳳英;;多重感染豬場副豬嗜血桿菌的分離與鑒定[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第七屆全國會員代表大會暨第十三次學(xué)術(shù)研討會論文集（下冊）[C];2009年

7 周學(xué)利;蔡旭旺;陳煥春;徐曉娟;趙雅欣;陳品;張璇;;副豬嗜血桿菌的耐藥性研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會養(yǎng)豬學(xué)分會第五次全國會員代表大會暨養(yǎng)豬業(yè)創(chuàng)新發(fā)展論壇論文集[C];2010年

8 張瑜;鄭杰;張慶霞;喬彥良;趙玉軍;范國兵;;一例副豬嗜血桿菌的分離鑒定[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會生物制品學(xué)分會中國微生物學(xué)會獸醫(yī)微生物學(xué)專業(yè)委員會2010年學(xué)術(shù)年會（第三屆中國獸藥大會學(xué)術(shù)論壇）論文集[C];2010年

9 何海健;陸國林;熊永忠;;浙江省副豬嗜血桿菌分離株的生物學(xué)特性[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學(xué)分會暨中國免疫學(xué)會獸醫(yī)免疫分會第八次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2010年

10 尹秀鳳;王艷;姜平;;副豬嗜血桿菌的流行病學(xué)調(diào)查[A];第六屆全國會員代表大學(xué)暨第11次學(xué)術(shù)研討會論文集（上）[C];2005年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 行唐縣獸醫(yī)防疫站 王金合;副豬嗜血桿菌和附紅細(xì)胞體混感的診治[N];河北科技報;2011年

2 沙河市畜牧水產(chǎn)局 胡文英 付麗偉;豬瘟與副豬嗜血桿菌混感的綜合防控[N];河北科技報;2014年

3 ;一例副豬嗜血桿菌和傳染性胸膜肺炎混合感染的治療心得[N];中國畜牧獸醫(yī)報;2009年

4 ;一例副豬嗜血桿菌和傳染性胸膜肺炎混合感染的治療心得[N];中國畜牧獸醫(yī)報;2009年

5 石家莊市行唐縣獸醫(yī)防疫站 王金合;副豬嗜血桿菌和附紅體混合感染咋治療[N];河北農(nóng)民報;2011年

6 張偉;一例豬圓環(huán)病毒與副豬嗜血桿菌混合感染的診治[N];中國畜牧獸醫(yī)報;2011年

7 譚海珍;鑒別豬跛行 對癥好防控[N];河南科技報;2012年

8 石家莊市畜牧水產(chǎn)局 于振梅 郝立賓;豬流行性感冒、鏈球菌病、副豬嗜血桿菌混合感染的診治[N];中國畜牧獸醫(yī)報;2007年

9 山東省沂水縣職教中心高級畜牧師 李連任　提供;豬：關(guān)節(jié)發(fā)病不要急 查找病因要仔細(xì)[N];河南科技報;2010年

10 山東省沂水縣職教中心 李連任;春季謹(jǐn)防豬跛行性疾病[N];河北科技報;2010年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 金卉;副豬嗜血桿菌感染和應(yīng)激相關(guān)基因的鑒定與功能研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

2 陳品;副豬嗜血桿菌耐藥性分子機(jī)制研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

3 靳國旺;安陽地區(qū)副豬嗜血桿菌的分離鑒定及蜂膠滅活苗的制備[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

4 付書林;副豬嗜血桿菌重要免疫原性相關(guān)蛋白發(fā)掘及GAPDH免疫調(diào)節(jié)機(jī)理研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

5 汪洋;副豬嗜血桿菌感染豬肺泡巨噬細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究與環(huán)介導(dǎo)恒溫擴(kuò)增法的建立[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

6 周明光;副豬嗜血桿菌新型免疫原性蛋白的發(fā)掘與鑒定及細(xì)胞毒素的鑒定與功能研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

7 都啟晶;副豬嗜血桿菌基因組表達(dá)文庫的構(gòu)建與其莢膜多糖輸出蛋白基因的篩選和免疫原性研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

8 蔡旭旺;副豬嗜血桿菌的分離鑒定及診斷方法與滅活疫苗的研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

9 樂敏;副豬嗜血桿菌基因組學(xué)及毒力相關(guān)因子研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

10 李軍星;副豬嗜血桿菌分子流行病學(xué)調(diào)查及其HSP70對PRRSV結(jié)構(gòu)蛋白GP3/GP5的免疫協(xié)同作用研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 苗立中;副豬嗜血桿菌熒光定量PCR方法建立及其分離株高密度發(fā)酵研究[D];吉林大學(xué);2012年

2 張悅;副豬嗜血桿菌耐藥性調(diào)查及其對氟苯尼考耐藥分子機(jī)制的研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

3 �；�;副豬嗜血桿菌細(xì)胞致死膨脹毒素細(xì)胞毒性機(jī)制研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

4 宋鳳香;德州地區(qū)副豬嗜血桿菌的分離鑒定及滅活疫苗免疫保護(hù)效力研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

5 郭志偉;副豬嗜血桿菌保護(hù)性抗原的篩選與鑒定[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

6 李逢慧;復(fù)合環(huán)媒恒溫基因擴(kuò)增技術(shù)的研究[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

7 萬世平;上海地區(qū)副豬嗜血桿菌分子流行病學(xué)調(diào)查研究及基因組文庫的構(gòu)建[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

8 何麗麗;廣東地區(qū)副豬嗜血桿菌的分離鑒定及動物感染試驗(yàn)研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

9 尹秀鳳;副豬嗜血桿菌流行病學(xué)與人工感染豬病理學(xué)研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

10 任慧君;副豬嗜血桿菌脂多糖—蛋白結(jié)合疫苗的制備及免疫原性研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

，

本文編號：1618896