發(fā)布時(shí)間：2018-03-16 06:01

  本文選題：牛　切入點(diǎn)：METTL　出處：《東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)》2017年08期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：m~6A甲基轉(zhuǎn)移酶(methyltransferase-like protein 3,METTL3)可調(diào)控m RNA的m6A甲基化水平,調(diào)節(jié)細(xì)胞蛋白質(zhì)合成,實(shí)驗(yàn)室前期發(fā)現(xiàn)METTL3為乳腺上皮細(xì)胞乳合成重要調(diào)節(jié)分子,發(fā)揮泌乳調(diào)節(jié)作用。目前尚不清楚METTL3分子結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)及其參與的調(diào)節(jié)機(jī)制。為揭示METTL3結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系,對(duì)METTL3蛋白作原核表達(dá)及純化。研究采用PCR方法擴(kuò)增牛mettl3基因完整CDS區(qū),將CDS區(qū)插入原核表達(dá)載體p GEX-4T-1,異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)METTL3蛋白大量表達(dá),用8 mol·L-1尿素裂解包涵體,利用GST蛋白純化試劑盒純化誘導(dǎo)獲得METTL3蛋白。SDS-PAGE證實(shí)GST-METTL3融合蛋白存在于包涵體內(nèi),試驗(yàn)獲得高純度GST-METTL3融合蛋白,為進(jìn)一步研究METTL3蛋白在奶牛泌乳中作用提供重要依據(jù)。
[Abstract]:Methyltransferase-like protein 3 (METTL3) can regulate m6A methylation level of m RNA and regulate cell protein synthesis. METTL3 was found to be an important regulatory molecule in mammary epithelial cell milk synthesis. In order to reveal the relationship between the structure and function of METTL3, the prokaryotic expression and purification of METTL3 protein were studied. The complete CDS region of bovine mettl3 gene was amplified by PCR. The CDS region was inserted into the prokaryotic expression vector pGEX-4T-1. Isopropyl thiothio- 尾 -Dgalactoside (IPTG) induced a large number of METTL3 protein expression, and the inclusion body was decomposed with 8 mol 路L -1 urea. METTL3 protein. SDS-PAGE of GST protein purification kit showed that GST-METTL3 fusion protein existed in inclusion body, and high purity GST-METTL3 fusion protein was obtained, which provided important basis for further study on the role of METTL3 protein in dairy cow lactation.
【作者單位】： 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省高校農(nóng)業(yè)生物功能基因重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國(guó)家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃(863計(jì)劃)項(xiàng)目(2013AA102504-03)
【分類號(hào)】：S823

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本文編號(hào)：1618610