H9N2亞型AIV受體結(jié)合特性分析及內(nèi)部基因?qū)χ虏⌒杂绊懙难芯?/H1>
發(fā)布時(shí)間：2018-03-07 06:03
本文選題：H9N2亞型禽流感病毒 切入點(diǎn)：受體結(jié)合位點(diǎn) 出處：《山東農(nóng)業(yè)大學(xué)》2015年碩士論文 論文類型：學(xué)位論文
【摘要】：近十幾年來,禽流感病毒(Avian Influenza Virus,AIV)特別是H9N2亞型AIV在中國廣泛流行,給中國養(yǎng)禽業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。已有研究發(fā)現(xiàn),H9N2亞型AIV不經(jīng)適應(yīng)即可感染哺乳動(dòng)物,包括小鼠、豚鼠、雪貂、恒河猴等實(shí)驗(yàn)動(dòng)物以及家貓、家犬等伴侶性動(dòng)物。更重要的是,我國已發(fā)生H9N2亞型禽流感感染人的事件。血清學(xué)調(diào)查也顯示,我國農(nóng)場從業(yè)人員的血清中抗H9亞型流感病毒的陽性率達(dá)2.3%-13.7%。上述現(xiàn)象說明H9N2亞型AIV已經(jīng)獲得跨越種間屏障進(jìn)而感染哺乳動(dòng)物甚至是人的能力,因而具有引發(fā)新的流感大流行的潛在威脅。在廣泛流行的同時(shí),H9N2亞型AIV作為新發(fā)流感病毒的基因節(jié)片供體為其它亞型AIV提供了多個(gè)基因節(jié)片。如1997年香港流行的H5N1亞型流感病毒,其內(nèi)部基因可能來源于A/Quail/Hong Kong/G1/97(H9N2)分離株,而2013年流行的H7N9亞型AIV的內(nèi)部基因全部來自H9N2亞型AIV。因此,加強(qiáng)對中國H9N2亞型AIV跨種感染與致病機(jī)制研究,對保障養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展和保護(hù)人類健康具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。本研究從分析H9N2亞型AIV的受體結(jié)合特性與致病機(jī)制入手,主要進(jìn)行了以下兩方面的工作:首先,分析了中國近十幾年間流行的H9N2亞型AIV受體結(jié)合特性。我們分析了中國1999~2014年間在NCBI上提交的H9N2亞型AIV的HA序列與病毒受體結(jié)合能力有關(guān)的HA蛋白第226位點(diǎn),同時(shí)對相應(yīng)病毒株的宿主分布進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)。結(jié)果表明,中國流行的H9N2流感病毒其HA-226位點(diǎn)已呈現(xiàn)出遺傳演化的多樣性,除了常見的L和Q位點(diǎn)外,又出現(xiàn)了M和F,其所占比率分別為81.85%、17.57%、4.81%和0.11%;宿主分布結(jié)果表明,中國的H9N2亞型AIV絕大部分來自于禽類,剩下的分別來自于豬和人,其所占比率分別為97.92%、1.81%和0.27%。另外,分別利用雞紅細(xì)胞法和固相ELISA方法對實(shí)驗(yàn)室保存的三株H9N2亞型AIV的受體結(jié)合能力進(jìn)行了檢測。結(jié)果表明,具有HA-226L的病毒(CK/JN/3)只具有結(jié)合SAα2,6Gal的能力;具有HA-226Q的病毒(CK/JL/6)只具有結(jié)合SAα2,3Gal的能力;而具有HA-226F的病毒(CK/JN/2)則具有雙重受體結(jié)合特性。而當(dāng)前中國家禽中所流行的H9N2亞型流感病毒以具有結(jié)合SAα2,6Gal的病毒為主。上述結(jié)果說明中國H9N2亞型AIV大部分毒株已具備了識別人樣流行病毒受體的能力,在哺乳動(dòng)物間流行的風(fēng)險(xiǎn)在加大。另一方面,本實(shí)驗(yàn)分析了H9N2亞型AIV內(nèi)部基因突變對病毒致病性的影響。利用點(diǎn)突變技術(shù)將在小鼠適應(yīng)株中發(fā)現(xiàn)的內(nèi)部基因3個(gè)氨基酸突變位點(diǎn)(PB2-E627K、HA-N313D和HA-N496S)依次引入到母本野生株A/Chicken/JN/Li-2/2010(H9N2)相應(yīng)的基因序列中。通過反向遺傳操作技術(shù)獲得具有一個(gè)或多個(gè)突變位點(diǎn)的病毒株。結(jié)果表明,與母本毒相比,PB2-E627K突變位點(diǎn)的出現(xiàn)使病毒在MDCK細(xì)胞和小鼠肺臟內(nèi)的復(fù)制能力均增強(qiáng),且差異顯著(p0.05);而只具有HA-313D/496S病毒株的復(fù)制能力與母本毒株相似。在致病力方面,以106EID50攻毒小鼠時(shí),具有PB2-E627K的病毒對小鼠的致死性增強(qiáng),其MLD50至少提高了316倍;而母本毒與只具有HA-313D/496S的病毒株并不對小鼠致死。106EID50攻毒小鼠后肺臟病理檢測結(jié)果表明,具有PB2-E627K病毒的小鼠肺臟病變集中在小血管和細(xì)支氣管周圍,伴有水腫和炎性細(xì)胞浸潤,而母本毒與具有HA-313D/496S的病毒株對應(yīng)的小鼠肺臟并無明顯的病理變化。聚合酶活性分析發(fā)現(xiàn),具有PB2-E627K的毒株聚合酶活性至少提高了16倍,與母本毒相比差異顯著。病毒的酸、熱穩(wěn)定性未見明顯變化。以上結(jié)果說明,PB2-E627K是鼠適應(yīng)株致病性增強(qiáng)的關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn),并通過聚合酶活性的提高影響了病毒對宿主的致病性。受體結(jié)合特性與致病性分析結(jié)果表明,H9N2亞型AIV具備了識別人類上呼吸道流感病毒受體的能力,并可通過單個(gè)氨基酸的突變獲得對哺乳動(dòng)物的高致病性。本研究上述結(jié)果為進(jìn)一步探索H9N2亞型AIV在哺乳動(dòng)物間致病和傳播的分子機(jī)制奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S852.65
【共引文獻(xiàn)】
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本文編號：1578212
本文鏈接：http://sikaile.net/yixuelunwen/dongwuyixue/1578212.html
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本文編號：1578212
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