發(fā)布時(shí)間：2018-03-03 08:54

  本文選題：蛋白酶　切入點(diǎn)：肉仔雞　出處：《內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：蛋白質(zhì)飼料資源短缺是限制我國(guó)畜牧業(yè)發(fā)展的關(guān)鍵問(wèn)題。蛋白酶可以提高飼料蛋白利用率,可在一定程度上緩解蛋白質(zhì)資源短缺問(wèn)題。隨著蛋白酶種類和產(chǎn)品的不斷增加,而傳統(tǒng)評(píng)價(jià)方法(動(dòng)物試驗(yàn))耗時(shí)費(fèi)力,無(wú)法在短時(shí)間評(píng)價(jià)大量樣品。因此,如何篩選合適蛋白酶及確定最適添加劑量,需要一個(gè)能快速、準(zhǔn)確評(píng)價(jià)蛋白酶的方法。體外法可用于快速評(píng)價(jià)飼料生物學(xué)效價(jià),且其評(píng)價(jià)效果已得到認(rèn)可。同時(shí),體外法在飼用酶評(píng)價(jià)方面的研究已受到關(guān)注,且研究逐漸增加。然而蛋白酶不同于其它飼用酶,其存在與內(nèi)源性消化酶的互作效應(yīng),使其作用效果受劑量的影響較明顯,因此,體外法評(píng)價(jià)蛋白酶時(shí)對(duì)消化酶活性等參數(shù)更敏感。因此,亟需建立一個(gè)適于評(píng)價(jià)蛋白酶作用效果的體外法,并通過(guò)對(duì)影響蛋白酶作用效果的因素研究,為蛋白酶的科學(xué)評(píng)價(jià)提供方法。本文通過(guò)測(cè)定肉仔雞(31日齡)消化道參數(shù)(pH值、消化酶活水平及含水量),并對(duì)含水量、產(chǎn)物分離方式及抗生素的應(yīng)用進(jìn)行研究,建立了一個(gè)用于評(píng)價(jià)蛋白酶對(duì)肉仔雞作用效果的體外法。運(yùn)用該方法評(píng)價(jià)了4種蛋白酶(酸性、中性、堿性和角蛋白酶)對(duì)飼料原料(玉米蛋白粉、玉米、豆粕)的作用效果,確定了各蛋白酶對(duì)玉米蛋白粉和豆粕的最適添加劑量；并進(jìn)一步研究了影響蛋白酶作用效果的因素(pH、蛋白酶的復(fù)性、作用部位及蛋白酶對(duì)內(nèi)源消化酶的影響)。此外,為了驗(yàn)證體外法評(píng)價(jià)蛋白酶作用效果的可靠性,本文還設(shè)定了體內(nèi)驗(yàn)證試驗(yàn),研究蛋白酶對(duì)肉仔雞(31日齡)玉米豆粕型日糧的作用效果。試驗(yàn)結(jié)果：1.試驗(yàn)建立了一套用于評(píng)價(jià)蛋白酶對(duì)肉仔雞作用效果的體外法。稱取1.0000 g飼料樣品。(嗉囊消化期)加3.5 mL適宜濃度鹽酸溶液,調(diào)pH至4.9,加0.5 mL氯霉素液抑制微生物生長(zhǎng),全溫振蕩培養(yǎng)箱消化；(胃消化期)加0.5 mL適宜濃度的鹽酸溶液,調(diào)pH 3.3,加0.5 mL胃蛋白酶-鹽酸溶液消化；(腸消化期)加1 mL適宜濃度的NaHCO3溶液調(diào)節(jié)pH 6.2,再加26 mL“小腸液”消化。三個(gè)階段的溫度和轉(zhuǎn)速均為：40℃、120轉(zhuǎn)/mmin,消化時(shí)間分別為：50 min、61 min和163 min。消化結(jié)束后宜采用5 ml磺基水楊酸(20%)沉淀蛋白,靜置30 min后,離心,取上清液用于分析測(cè)定。2.四種蛋白酶對(duì)飼料原料最適添加量和添加效果的研究。不同添加劑量的4種蛋白酶對(duì)豆粕粗蛋白體外消化率(IVCPD)均有顯著提高作用(P0.05)：對(duì)玉米蛋白粉IVCPD有一定的提高作用。試驗(yàn)確定了酸性蛋白酶、中性蛋白酶、堿性蛋白酶和角蛋白酶對(duì)豆粕和玉米蛋白粉的最適添加劑量分別為：1.6、0.8、0.8、1.6 U/g底物和0.8、1.6、0.4、0.2 U/g底物。單獨(dú)添加和結(jié)合使用蛋白酶對(duì)玉米+豆粕(7：3)組合底物的作用效果表明,單一添加酸性蛋白酶的作用效果最優(yōu),酸性蛋白酶+中性蛋白酶及酸性蛋白酶+堿性蛋白酶組合的作用效果與單獨(dú)添加酸性蛋白酶無(wú)顯著差異,且顯著高于酸性蛋白酶+角蛋白酶組；單獨(dú)添加中性蛋白酶、堿性蛋白酶和角蛋白酶無(wú)顯著添加效果(P0.05)。說(shuō)明蛋白酶對(duì)飼料原料的作用效果不僅與其底物類型有關(guān),還與蛋白酶的種類和添加劑量有關(guān)；且酸性蛋白酶與其它蛋白酶結(jié)合使用無(wú)協(xié)同效應(yīng)(P0.05)。3.影響蛋白酶作用效果關(guān)鍵因素的研究。在胃內(nèi)pH條件下,除酸性蛋白酶外,3種蛋白酶活性均較低,約為最適酶活的10%；中(P0.05)、堿(P0.05)、角蛋白酶(P0.05)有不同程度的復(fù)性能力,角蛋白酶復(fù)性率達(dá)37.68%。分別從嗉囊和小腸階段添加蛋白酶都顯著提高了豆粕和玉米蛋白粉IVCPD(P0.05),且從嗉囊階段添加的作用效果優(yōu)于小腸段添加,提示蛋白酶對(duì)飼料原料的作用效果主要與其作用時(shí)間有關(guān)。僅在嗉囊段添加蛋白酶的作用結(jié)果顯示,各蛋白酶在嗉囊段添加均提高了玉米蛋白粉和豆粕的IVCPD,且中性蛋白酶的作用效果優(yōu)于其它各酶。說(shuō)明嗉囊可能為蛋白酶發(fā)揮作用提供了一個(gè)較緩和的場(chǎng)所,且酸性蛋白酶的作用受到除pH外其他因素的影響。四種蛋白酶對(duì)內(nèi)源性消化酶活性的影響結(jié)果表明,酸性蛋白酶可顯著提高胰蛋白酶活性(P0.05)；中性蛋白酶對(duì)胰蛋白酶活性無(wú)顯著影響(P0.05)；堿性蛋白酶和角蛋白酶可顯著降低胰蛋白酶活性(P0.05)：而各蛋白酶對(duì)糜蛋白酶活性無(wú)顯著影響(P0.05)。酸性蛋白酶可能通過(guò)提高胰蛋白酶活性發(fā)揮作用,而堿性蛋白酶和角蛋白酶可能會(huì)對(duì)蛋白質(zhì)消化帶來(lái)不利影響。4.最適添加劑量下的各蛋白酶單獨(dú)及結(jié)合添加在肉仔雞(31日齡)日糧中的應(yīng)用研究。單獨(dú)添加酸性蛋白酶可顯著改善肉仔雞(1-31日齡)平均日采食量(ADFI)和平均日增重(ADG)(P0.05),且酸性+中性蛋白酶及酸性+堿性蛋白酶組合的作用效果與單獨(dú)添加酸性蛋白酶無(wú)顯著差異(P0.05)；單獨(dú)添加中、堿和角蛋白酶對(duì)31日齡肉仔雞生長(zhǎng)性能無(wú)顯著影響(P0.05)。然而,蛋白酶的添加降低了肉仔雞(31日齡)粗蛋白消化率(P0.05)；除Tyr和Pro,其他氨基酸消化率均有不同程度的降低。試驗(yàn)結(jié)果表明,蛋白酶的酶學(xué)性質(zhì)決定其作用效果,且添加劑量及其對(duì)內(nèi)源性消化酶活的關(guān)系均會(huì)影響其作用效果。本試驗(yàn)所建立的體外法可用于預(yù)測(cè)蛋白酶對(duì)肉仔雞生長(zhǎng)性能的作用效果,但無(wú)法預(yù)測(cè)對(duì)肉仔雞粗蛋白消化率的影響。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S831.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1560356