本文關(guān)鍵詞： 雞 脂肪 PPARγ 轉(zhuǎn)錄本 蛋白亞型 啟動(dòng)子 甲基化　出處：《東北農(nóng)業(yè)大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：過氧化物酶增殖物激活受體γ(PPARγ)是核受體超家族成員之一。PPARγ在動(dòng)物機(jī)體中作用廣泛,是脂肪細(xì)胞分化和脂質(zhì)代謝網(wǎng)絡(luò)的關(guān)鍵調(diào)控因子,與肥胖癥及其相關(guān)疾病關(guān)系密切。雞PPARγ基因的結(jié)構(gòu)還不是完全清楚,目前NCBI數(shù)據(jù)庫中只有一條雞PPARγ基因的轉(zhuǎn)錄本,通過5?RACE分析發(fā)現(xiàn)雞PPARγ基因有5個(gè)不同的轉(zhuǎn)錄本,它們的唯一差異是5?端末端序列不同。開放閱讀框(Open reading frame)分析發(fā)現(xiàn),雞的這5個(gè)轉(zhuǎn)錄本能編碼兩個(gè)蛋白亞型或蛋白異構(gòu)體,即c PPARγ1和c PPARγ2蛋白,這兩種蛋白的差別僅是它們的N端存在6個(gè)氨基酸的差異。實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析了雞PPARγ基因5個(gè)轉(zhuǎn)錄本的組織表達(dá)模式,結(jié)果顯示c PPARγ1在脂肪組織,心臟,肝臟,脾臟,腎臟和十二指腸中表達(dá)很高,在肺臟,大腦和胰腺中少量表達(dá),而在胸肌和腺胃中表達(dá)量極低;與c PPARγ1相比,c PPARγ2,c PPARγ3,c PPARγ4和c PPARγ5在所有組織包括脂肪組織中的表達(dá)都相對(duì)較低,比較而言,c PPARγ2在脂肪中的表達(dá)量相對(duì)較高,呈現(xiàn)一定的脂肪組織特異性;c PPARγ3在脂肪組織,腎臟,脾臟和肝臟中表達(dá)豐富。c PPARγ4和c PPARγ5在所有組織中表達(dá)量都很低,其中cPPARγ5在脂肪組織,心臟,肝臟和腎臟中的表達(dá)量豐富;高低脂雞腹部脂肪組織的表達(dá)分析發(fā)現(xiàn),c PPARγ1在2到7周齡高脂雞脂肪組織中的表達(dá)極顯著高于低脂雞(P0.01);而c PPARγ3在3、5周齡和4、6周齡高脂雞脂肪組織中的表達(dá)要顯著(P0.05)或極顯著高于低脂雞(P0.01);c PPARγ5在3、4、6周齡的高脂雞脂肪組織表達(dá)極顯著高于低脂雞(P0.01),在2、7周齡的表達(dá)水平達(dá)到顯著(P0.05)。根據(jù)雞的5個(gè)轉(zhuǎn)錄本序列信息,利用UCSC genome browser分析顯示,雞PPARγ基因有3個(gè)不同的啟動(dòng)子(P1、P2及P3),其中P1能啟動(dòng)雞c PPARγ1的轉(zhuǎn)錄,P2能啟動(dòng)雞c PPARγ2,c PPARγ3和c PPARγ4的轉(zhuǎn)錄,P3能啟動(dòng)雞c PPARγ5的轉(zhuǎn)錄。生物信息學(xué)的方法分析了雞P1、P2啟動(dòng)子區(qū)2kb的序列,發(fā)現(xiàn)P1、P2均含有GC-box元件,其中P1含有有很多的C/EBP家族,NFKPB,AP2等與脂肪分化相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn);其中P2也發(fā)現(xiàn)一些C/EBP家族,AP2等一些脂肪相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子;截短突變分析發(fā)現(xiàn)在P1啟動(dòng)子區(qū)域(-577/+109)顯示非常強(qiáng)熒光素酶活性(P0.01);同樣在在P2啟動(dòng)子區(qū)域(-671/+140)顯示很強(qiáng)的熒光素酶活性(P0.05);通過生物信息學(xué)的方法分析發(fā)現(xiàn)雞P1和P2啟動(dòng)子區(qū)分別存在一個(gè)大的Cp G島。利用甲基化酶抑制劑(5′-aza-2′-deoxycytidine)處理DF1細(xì)胞和雞前脂肪細(xì)胞,real-time RT-PCR檢測分析5個(gè)c PPARγ轉(zhuǎn)錄本的表達(dá)變化,結(jié)果發(fā)現(xiàn),甲基化酶抑制劑處理DF1細(xì)胞之后,雞PPARγ的5個(gè)轉(zhuǎn)錄本都有不同程度的上升,(PPARγ1,PPARγ2,PPARγ3,PPARγ4在24,48,72,96h的表達(dá)都呈現(xiàn)上升趨勢,其中96h時(shí)PPARγ1和PPARγ3表達(dá)顯著升高(P0.05),PPARγ4達(dá)到極顯著水平(P0.01);而在前脂肪細(xì)胞中發(fā)現(xiàn),與0h相比,前脂肪細(xì)胞處理后24,48,72,96h后PPARγ1的表達(dá)量持續(xù)升高,并在96h時(shí)達(dá)到顯著(P0.05),其他轉(zhuǎn)錄本在不同時(shí)間點(diǎn)雖然呈現(xiàn)一定的上升趨勢,但是表達(dá)并沒有明顯的趨勢。使用甲基化轉(zhuǎn)移酶(M.Sss I)處理包含雞PPARγ基因3個(gè)啟動(dòng)子報(bào)告基因質(zhì)粒,報(bào)告基因分析發(fā)現(xiàn),與未甲基化的P1,P2和P3啟動(dòng)子相比,甲基化處理后的雞P1(M)和P2(M)啟動(dòng)子的活性受到極顯著的抑制(P0.01),而雞P3(M)啟動(dòng)子活性受到顯著的抑制(P0.05)。說明DNA甲基化可能調(diào)控雞PPARγ基因啟動(dòng)子的活性。本研究是首次發(fā)現(xiàn)雞PPARγ基因有5個(gè)不同的轉(zhuǎn)錄本,能編碼2個(gè)蛋白亞型,雞PPARγ基因有3個(gè)不同的啟動(dòng)子。本研究為深入探索雞c PPARγ的調(diào)控機(jī)制奠定了堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。
[Abstract]:Peroxisome proliferator activated receptor gamma (PPAR gamma) is one of the members of the nuclear receptor superfamily.PPAR gamma function in animal body, is a key regulator of adipocyte differentiation and lipid metabolic networks, and relationship between obesity and obesity related diseases closely. Chicken PPAR gene structure is not fully understood, the transcripts. The NCBI database is only a chicken PPAR gene by 5? RACE analysis showed that the chicken PPAR gene had 5 different transcripts, the only difference is the 5? End of different sequence. The open reading frame (Open reading frame) analysis showed that the 5 chicken transcription two protein encoding instinct type or protein isomer, namely C PPAR and C PPAR gamma 1 gamma 2 protein, the only difference between the two proteins is the difference in their N end of 6 amino acids. The real-time quantitative PCR analysis of chicken PPAR gene 5 transcript expression patterns,. 鏋滄樉紺篶 PPAR緯1鍦ㄨ剛鑲粍緇，

本文編號(hào)：1525662