本文關(guān)鍵詞： 牦牛 沙門氏菌 毒力 致病性 御成門沙門氏菌 細(xì)菌的動(dòng)態(tài)分布 組織病理學(xué) 細(xì)胞因子　出處：《西南民族大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：牦牛是青藏高原特定環(huán)境下形成的特有物種,是當(dāng)?shù)啬撩裰匾纳詈蜕a(chǎn)資料。沙門氏菌能夠感染人類和多種動(dòng)物,是重要的食源性致病菌,也是牦牛常見病原菌之一。沙門氏菌血清型眾多,不同血清型沙門氏菌致病力差別很大,對(duì)宿主的危害程度不同。因此,對(duì)牦牛源沙門氏菌致病性的研究,對(duì)牦牛沙門氏菌病的防控和公共衛(wèi)生學(xué)都具有重要意義。本實(shí)驗(yàn)室前期從健康牦牛糞便中分離得到31株沙門氏菌,屬于8種血清型,分別為御成門沙門氏菌、都柏林沙門氏菌、腸炎沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌、布利丹沙門氏菌、斯坦利沙門氏菌、奧雷翁沙門氏菌和紐波特沙門氏菌,其中優(yōu)勢(shì)血清型沙門氏菌為腸炎沙門氏菌、都柏林沙門氏菌和鼠傷寒沙門氏菌,但未對(duì)其致病性進(jìn)行研究。本研究的目的是確定這8種血清型沙門氏菌對(duì)小鼠的致病性,并對(duì)御成門沙門氏菌在感染小鼠體內(nèi)的動(dòng)態(tài)分布、引起的組織病理學(xué)變化和所引起的免疫應(yīng)答等方面進(jìn)行研究,其主要研究?jī)?nèi)容和成果如下:1測(cè)定了8株不同血清型牦牛源沙門氏菌的毒力不同血清型沙門氏菌致病力差別很大,而牦牛源沙門氏菌的相關(guān)研究報(bào)道甚少,本研究隨機(jī)選擇本實(shí)驗(yàn)室保存的8個(gè)血清型牦牛源沙門氏菌各1株,以SPF級(jí)BALB/c雌性成年小鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,通過(guò)直接灌胃的方法接種細(xì)菌,測(cè)定其半數(shù)致死量(LD50)。結(jié)果顯示:御成門沙門氏菌、布利丹沙門氏菌、都柏林沙門氏菌、腸炎沙門氏菌、紐波特沙門氏菌、傷寒沙門氏菌和斯坦利沙門氏菌等7株沙門氏菌的LD50分別為5×102、1.8×102、2.2×103、5.1×103、1.3×104、6.1×105和1.7×105 CFU,而奧雷翁沙門氏菌不致死小鼠,灌胃接種2.7×108CFU/只后,小鼠僅有2/5個(gè)體出現(xiàn)精神沉郁、被毛逆立等一過(guò)性癥狀。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可見:除奧雷翁沙門氏菌外,7株菌的毒力普遍很強(qiáng),其中御成門沙門氏菌和布利丹沙門氏菌的毒力超強(qiáng),僅數(shù)百個(gè)CFU經(jīng)胃腸道途徑感染即可致死未經(jīng)抗生素預(yù)處理的成年小鼠,其致病機(jī)制值得進(jìn)一步探討。2建立了御成門沙門氏菌感染小鼠的模型沙門氏菌的感染模型對(duì)研究其感染與免疫機(jī)理、藥物及疫苗研發(fā)等具有重要意義,鏈霉素預(yù)處理的小鼠模型是最常用的,但該模型不能用于研究沙門氏菌如何突破腸道菌群的抵抗。本研究根據(jù)御成門沙門氏菌毒力測(cè)定結(jié)果,以5×105cfu/只劑量給未經(jīng)抗生素處理的spf級(jí)balb/c雌性成年小鼠經(jīng)灌胃方式接種御成門沙門氏菌,建立感染模型,先后進(jìn)行5次獨(dú)立的重復(fù)感染試驗(yàn)。結(jié)果顯示:御成門沙門氏菌感染小鼠的潛伏期為2~3d,病鼠主要出現(xiàn)精神沉郁、食欲減退、畏寒扎堆等癥狀,3~4d開始出現(xiàn)死亡,10d內(nèi)感染小鼠全部死亡。剖檢可見小鼠肝臟有彌漫性出血點(diǎn),脾臟密布有大小不一的灰白色壞死灶,小腸內(nèi)充滿淡黃色漿液性內(nèi)容物。5次重復(fù)感染試驗(yàn)均得到相似的結(jié)果。從研究結(jié)果可見:本研究成功地建立了御成門沙門氏菌對(duì)未經(jīng)抗生素處理的balb/c小鼠感染模型,穩(wěn)定可靠,可復(fù)制性強(qiáng)。該模型在研究沙門氏菌突破腸道防御屏障的機(jī)制等方面具有顯著的優(yōu)勢(shì),為沙門氏菌感染與致病機(jī)制的研究提供了有價(jià)值的新模型。3研究了御成門沙門氏菌在感染小鼠體內(nèi)的動(dòng)態(tài)分布病原菌定植、內(nèi)化、增殖及在體內(nèi)擴(kuò)散蔓延規(guī)律是致病機(jī)制研究的重要內(nèi)容。御成門沙門氏菌最早是從日本健康女性體內(nèi)分離到,隨后在日本、土耳其、墨西哥、以色列、德國(guó)以及中國(guó)等國(guó)家均有對(duì)該菌的研究報(bào)道,但關(guān)于該菌在體內(nèi)的增殖情況還未見報(bào)道。本研究以御成門沙門氏菌的小鼠感染模型為基礎(chǔ),旨在研究其在感染小鼠體內(nèi)的增殖及動(dòng)態(tài)分布情況。以5×105cfu/只劑量御成門沙門氏菌感染小鼠,分別于感染后24h、48h、72h、96h、5d、6d和7d等不同時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)抽取3只實(shí)驗(yàn)組小鼠和3只對(duì)照組小鼠,無(wú)菌采集小鼠腦組織、心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟及胰腺等,將組織稱重后勻漿,采用平板菌落計(jì)數(shù)法測(cè)定不同組織器官中細(xì)菌的荷載量。結(jié)果顯示:能從所有被檢組織器官中檢出御成門沙門氏菌,但不同組織檢出時(shí)間不同。在感染后24、48h只能從肺臟中分離到細(xì)菌,肝臟、脾臟、腎臟及胰腺在感染后72h分離出細(xì)菌,而心臟和腦組織則在感染后96h才回收到該菌。該菌在各組織器官中的荷載量隨著病程的發(fā)展持續(xù)增加,第7天的荷載量最高,但不同組織中細(xì)菌荷載量不同,其中脾臟中含量最高[(1.3±0.5)×108cfu/g],其次為肺臟[(4.4±1.3)×107cfu/g]和肝臟[(3.2±0.9)×107cfu/g],腦組織中含量最低[(6.8±1.2)×105cfu/g]。從結(jié)果可見:御成門沙門氏菌在突破腸道防御屏障后首先移行到肺臟并在其中增殖,以后再移行到脾臟、肝臟等其他實(shí)質(zhì)器官。其中肺臟、脾臟和肝臟是御成門沙門氏菌主要的增殖場(chǎng)所,這與腸炎沙門氏菌和鼠傷寒沙門氏菌的主要增殖部位為脾臟和肝臟有所不同。關(guān)于御成門沙門氏菌的感染機(jī)制特別是其突破腸道防御屏障后首先侵染肺臟的機(jī)制有待進(jìn)一步研究。4研究了御成門沙門氏菌感染小鼠引起的病理組織學(xué)變化本研究旨在了解御成門沙門氏菌感染小鼠引起的病理組織學(xué)變化,觀察御成門沙門氏菌對(duì)小鼠的致病特征。以5×105cfu/只劑量御成門沙門氏菌感染小鼠,按照病理組織學(xué)采樣要求采集“御成門沙門氏菌在感染小鼠體內(nèi)的動(dòng)態(tài)分布”試驗(yàn)中各時(shí)間點(diǎn)小鼠的組織樣本,除采集腦組織、心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟及胰腺外,還采集十二指腸、空腸、回腸、盲腸、結(jié)腸、直腸等組織,福爾馬林固定、切片、he染色,觀察其病理組織學(xué)變化。結(jié)果顯示:御成門沙門氏菌感染后,小鼠肺臟、心臟、肝臟、脾臟和腎臟等實(shí)質(zhì)器官中出現(xiàn)巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞增生、侵潤(rùn)病灶,組織細(xì)胞變性及凝固性壞死等病理變化,且病變隨著病程而逐漸加重,胰腺和腦組織中未見明顯的病理變化。有趣的是經(jīng)胃腸道途徑感染小鼠僅在其回腸段觀察到固有層出現(xiàn)少量巨噬細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞與淋巴細(xì)胞侵潤(rùn),且隨著病程的發(fā)展,出現(xiàn)腸絨毛上皮細(xì)胞脫落,腸上皮與固有層細(xì)胞出現(xiàn)凝固性壞死,而其他腸段未見明顯病理變化。由上述研究結(jié)果可見:御成門沙門氏菌能引起小鼠主要內(nèi)臟器官的廣泛性病理組織學(xué)損傷,而回腸段的病理組織學(xué)變化則提示御成門沙門氏菌可能是從這一部位突破腸道防御屏障進(jìn)入其他組織器官的。這與已報(bào)道的沙門氏菌通過(guò)結(jié)腸、盲腸等途徑入侵深層組織有所不同。御成門沙門氏菌入侵深層組織并在體內(nèi)擴(kuò)散蔓延的機(jī)制有待深入研究。5研究了御成門沙門氏菌感染對(duì)小鼠5種細(xì)胞因子的影響tnf-α、ifn-γ、il-1β、il-4和il-6等細(xì)胞因子與沙門氏菌的感染和病理?yè)p傷程度密切相關(guān),本實(shí)驗(yàn)旨在研究御成門沙門氏菌感染對(duì)上述5種細(xì)胞因子的影響。按照御成門沙門氏菌的小鼠感染模型建立的方法感染小鼠18只,分別在感染后24h、48h和72h選取實(shí)驗(yàn)組3只和對(duì)照組3只小鼠,采取小鼠的肺臟、肝臟、脾臟、心臟、空腸、回腸和結(jié)腸,采用熒光定量PCR方法,檢測(cè)感染后5種細(xì)胞因子的m RNA在上述組織器官中的相對(duì)表達(dá)量,用小鼠β-actin內(nèi)參基因進(jìn)行標(biāo)化處理。結(jié)果顯示:感染后24h,在肺臟中,五種細(xì)胞因子的mRNA的相對(duì)表達(dá)量均受到顯著抑制;在脾臟和肝臟中,除TNF-α外,IFN-γ、IL-1β、IL-4和IL-6的mRNA的相對(duì)表達(dá)量均受到顯著抑制;而在心臟中,TNF-α、IL-4和IL-6的mRNA的相對(duì)表達(dá)量均顯著升高,IL-1β受到顯著抑制,而IFN-γ與對(duì)照組相比,變化不大。在感染后72h,五種細(xì)胞因子的m RNA的相對(duì)表達(dá)量均急劇升高。在腸組織中,IFN-γ、IL-4和IL-6的mRNA的相對(duì)表達(dá)量呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)。感染后24h,表達(dá)量急劇升高,而在感染后72h表達(dá)量降低,受到抑制;IL-1β除在回腸中感染后24h表達(dá)量顯著升高,在檢測(cè)的腸組織中均受到抑制;而TNF-α在回腸中隨感染時(shí)間的延長(zhǎng),表達(dá)量顯著升高,在空腸和結(jié)腸中表現(xiàn)出先升高后降低的趨勢(shì)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:在感染早期,御成門沙門氏菌感染顯著抑制小鼠體內(nèi)IFN-γ、IL-1β、IL-4和IL-6在肺臟、脾臟和肝臟中的表達(dá),從而有利于細(xì)菌的增殖;隨感染時(shí)間的延長(zhǎng),上述五種細(xì)胞因子在小鼠體內(nèi)實(shí)質(zhì)器官中的表達(dá)量急劇升高,導(dǎo)致機(jī)體病理?yè)p害程度的加重。
[Abstract]:The results of this study are as follows : 1 . The results are as follows : 1 . The results are as follows : 1 . The results are as follows : 1 . The results are as follows : 1 . The results are as follows : 1 . The results are as follows : 1 . The results are as follows : 1 . The results are as follows : 1 . The results are as follows : 1 . The results are as follows : 1 . The results are as follows : 1 . The results are as follows : 1 . The results are as follows : 1 . The results are as follows : 1 . The results are as follows : 1 . The results are as follows : 1 . The results are as follows : 1 . The results are as follows : 1 . The results are as follows : 1 . The results are as follows : 1 . The results are as follows : 1 . The results are as follows : 1 . The results are as follows : 1 . The results are as follows : 1 . The results are as follows : 1 . The results are as follows : 1 . The results are as follows : 1 . The results are as follows : 1 . The results are as follows : 1 . The results are as follows : 1 . The LD50 of Salmonella typhimurium is 5 脳 102 , 1.8 脳 102 , 2.2 脳 103 , 5.1 脳 103 , 1.3 脳 104 , 6.1 脳 105 and 1.7 respectively . In order to study the mechanism of Salmonella typhimurium infection in mice infected with Salmonella typhimurium , the results showed that the mice infected with Salmonella typhimurium were isolated from healthy female mice at 5 脳 105cfu / dose . IL - 1尾 , IL - 1尾 , IL - 4 and IL - 6 mRNA were significantly inhibited in the spleen and liver , and the relative expression of IL - 1尾 , IL - 4 and IL - 6 increased significantly after infection .

【學(xué)位授予單位】：西南民族大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S858.23

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本文編號(hào)：1459693