基因免疫制備新城疫病毒磷蛋白的單克隆抗體
本文關(guān)鍵詞：基因工程技術(shù)在畜牧獸醫(yī)上的應(yīng)用及展望，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。
《揚(yáng)州大學(xué)》 2005年
基因免疫制備新城疫病毒磷蛋白的單克隆抗體
馬卉
【摘要】：制備新城疫病毒(Newcastle Disease Virus,NDV)的單克隆抗體(以下簡(jiǎn)稱單抗),如果用全病毒做免疫抗原和篩選抗原,得到的NDV的單抗多是針對(duì)該病毒的優(yōu)勢(shì)抗原表位;而磷蛋白(P蛋白)是NDV的內(nèi)部結(jié)構(gòu)蛋白,且其蛋白含量占整個(gè)病毒蛋白含量的比例很小,為病毒的非優(yōu)勢(shì)抗原表位,如果用全病毒做免疫抗原和篩選抗原,那么能夠得到分泌針對(duì)P蛋白的單抗的細(xì)胞株的可能性很小。 本實(shí)驗(yàn)的目的是制備針對(duì)P蛋白特異的單抗,供研究P基因的結(jié)構(gòu)和功能使用。我們采用P蛋白基因的真核重組表達(dá)質(zhì)粒作DNA免疫的方法免疫小鼠,而以P基因的原核表達(dá)產(chǎn)生的融合蛋白經(jīng)純化后作為篩選抗原來(lái)制備針對(duì)P蛋白的單抗。首先,我們構(gòu)建了NDVP基因的真核重組表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1(-)-P;經(jīng)酶切和PCR鑒定,確定P基因是以正確的方向插入pcDNA3.1(-)后,用脂質(zhì)體法將其轉(zhuǎn)染入COS-1細(xì)胞,于轉(zhuǎn)染后72小時(shí)采用間接免疫熒光的方法確定該重組質(zhì)粒在體外真核細(xì)胞中可以表達(dá)目的蛋白;然后大量提取質(zhì)粒,將其作為DNA免疫的材料,免疫6周齡的BALB/C小鼠,每只小鼠腿部肌肉注射裸質(zhì)粒100gg,隔2周免疫一次,共免疫4次,最后一次加強(qiáng)免疫后7天,取免疫小鼠的脾細(xì)胞和處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的骨髓瘤細(xì)胞SP2/0-Ag-14進(jìn)行融合。同時(shí),用原核表達(dá)載體pGEX-6p-1構(gòu)建P基因的的原核表達(dá)質(zhì)粒:經(jīng)酶切和PCR鑒定后,轉(zhuǎn)化宿主菌BL21,37℃經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá);將誘導(dǎo)產(chǎn)生的融合蛋白(GST-P)經(jīng)SDS-PAGE和Western-Blot鑒定后作為篩選包被抗原。通過(guò)間接ELISA對(duì)融合的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行篩選,將獲得的陽(yáng)性細(xì)胞株用有限稀釋法進(jìn)行多次亞克隆后,獲得一株分泌針對(duì)P蛋白的特異性單抗的細(xì)胞株,命名為2G8,細(xì)胞上清效價(jià)為1:256,腹水效價(jià)為1:2×10~4,亞類鑒定為IgM。用鵝源新城疫病毒ZJ-1株感染雞胚成纖維細(xì)胞做間接免疫熒光試驗(yàn)鑒定2G8的特異性,結(jié)果顯示了特異性的綠色熒光;Western-Blot結(jié)果也顯示了單抗的良好特異性。
【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號(hào)】：S852.65
【目錄】：
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【引證文獻(xiàn)】
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5 于洋;仇旭升;徐丹;詹媛;陳鴻軍;于圣青;丁鏟;;ClassⅠ和ClassⅡ新城疫病毒微型基因組的構(gòu)建及比較[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)禽病學(xué)分會(huì)第十五次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年
6 徐玲霞;劉梅;程旭;周生;韋玉勇;戴亞斌;;鴨源新城疫病毒強(qiáng)毒株P(guān)基因及V蛋白的遺傳分析[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)禽病學(xué)分會(huì)第十五次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年
7 胡靜濤;楊文濤;肖沖;王澤;丁壯;王春鳳;;GFP標(biāo)記的重組新城疫病毒HN基因乳酸菌表達(dá)載體的構(gòu)建[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)分會(huì)第三次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2012年
8 魯會(huì)軍;金擴(kuò)世;韓松;金寧一;;豬源新城疫病毒JL01株分離鑒定及F基因遺傳進(jìn)化分析[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)食品衛(wèi)生學(xué)分會(huì)第十一次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年
9 張蕊;蒲娟;蘇敬良;趙繼勛;王曉婷;張守平;李曉嬌;張國(guó)中;;新城疫病毒國(guó)內(nèi)分離株的序列測(cè)定與分析[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)禽病學(xué)分會(huì)第十五次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年
10 王志玉;于修平;;糖化作用對(duì)新城疫病毒HN糖蛋白功能的影響[A];山東免疫學(xué)會(huì)、山東微生物學(xué)會(huì)醫(yī)學(xué)微生物學(xué)專業(yè)委員會(huì)、山東省醫(yī)學(xué)會(huì)微生物學(xué)和免疫學(xué)專業(yè)委員會(huì)、山東省醫(yī)藥生物技術(shù)學(xué)會(huì)2001年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2001年
中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條
1 惠嶺;[N];河北農(nóng)民報(bào);2006年
2 呂紀(jì)增;[N];中國(guó)畜牧獸醫(yī)報(bào);2006年
3 張藝兵 黃叢平;[N];中國(guó)國(guó)門(mén)時(shí)報(bào);2004年
4 河北省辛集市畜禽科技服務(wù)中心 肖亞彬 任靈霞 梁劍峰;[N];江蘇農(nóng)業(yè)科技報(bào);2006年
5 鄭安明;[N];中國(guó)國(guó)門(mén)時(shí)報(bào);2006年
6 中國(guó)科學(xué)技術(shù)信息研究所;[N];農(nóng)資導(dǎo)報(bào);2006年
7 清苑職教中心 張俊杰;[N];河北農(nóng)民報(bào);2006年
8 記者 彭溢;[N];黑龍江日?qǐng)?bào);2008年
9 邢臺(tái)市獸醫(yī)院 邢蘭君;[N];河北農(nóng)民報(bào);2007年
10 老貴;[N];云南科技報(bào);2008年
中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條
1 黨源;新城疫病毒單感染及豬流感病毒與豬鏈球菌共感染差異蛋白組學(xué)分析[D];吉林大學(xué);2013年
2 胡海霞;表達(dá)C亞型禽偏肺病毒糖蛋白和融合蛋白的重組新城疫病毒二價(jià)苗的構(gòu)建及免疫效力評(píng)價(jià)[D];吉林大學(xué);2011年
3 劉培欣;新城疫病毒單克隆抗體制備及部分NP蛋白抗原表位鑒定分析[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年
4 陳勝利;不同宿主來(lái)源新城疫病毒全基因組特征及其V蛋白對(duì)DF-1細(xì)胞IFN-β生成的影響[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2013年
5 丁壯;新城疫病毒HN蛋白基因的克隆、序列分析、表達(dá)及其免疫原性研究[D];中國(guó)人民解放軍軍需大學(xué);2001年
6 胡增壘;基因Ⅶd亞型新城疫病毒嚴(yán)重侵害免疫系統(tǒng)的分子基礎(chǔ)和宿主機(jī)制[D];揚(yáng)州大學(xué);2013年
7 耿捷;基因芯片檢測(cè)新城疫病毒和PCR結(jié)合內(nèi)切酶分析鑒別新城疫強(qiáng)弱毒株的研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2004年
8 趙偉;新城疫病毒VG/GA毒株反向遺傳系統(tǒng)的建立及最佳外源基因表達(dá)位置的確定[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2013年
9 邵朝綱;水稻齒葉矮縮病毒的分子生物學(xué)研究及新城疫病毒檢測(cè)新技術(shù)[D];中國(guó)科學(xué)院研究生院（上海生命科學(xué)研究院）;2004年
10 蔡麗婭;臨床新城疫病毒分離鑒定及F蛋白單克隆抗體的研制與應(yīng)用[D];揚(yáng)州大學(xué);2009年
中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條
1 曲魯江;新城疫病毒單克隆抗體的建立及其遺傳變異分析研究[D];新疆農(nóng)業(yè)大學(xué);2001年
2 鞏艷艷;抗體免疫選擇壓作用下新城疫病毒HN基因和F基因的變異[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年
3 孫委委;兩株新城疫病毒分離株全基因組序列的測(cè)定及在CEF和雞胚傳代的含量變化分析[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2010年
4 胡北俠;新城疫病毒融合蛋白單克隆抗體的研制[D];揚(yáng)州大學(xué);2001年
5 梅雙雙;新城疫病毒野毒株的分離鑒定及其融合蛋白部分序列同源性分析[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2002年
6 王海燕;新城疫病毒F_48E_9株接種雞胚的病理學(xué)觀察及其P蛋白基因的克隆與表達(dá)[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2001年
7 米志強(qiáng);新城疫病毒昌黎株F基因的序列分析、表達(dá)及重組病毒免疫原性的研究[D];中國(guó)人民解放軍軍需大學(xué);2001年
8 葛濤;新城疫病毒HN基因抑瘤效應(yīng)機(jī)制的研究[D];中國(guó)人民解放軍軍需大學(xué);2002年
9 鄧明俊;新城疫病毒F基因真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及動(dòng)物免疫試驗(yàn)[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2003年
10 于淼;高分子微球檢測(cè)新城疫病毒的研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年
本文關(guān)鍵詞：基因工程技術(shù)在畜牧獸醫(yī)上的應(yīng)用及展望，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。
本文編號(hào)：130869
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