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棉酚分解菌的分離鑒定及其特性研究

發(fā)布時(shí)間:2017-10-29 21:23

  本文關(guān)鍵詞:棉酚分解菌的分離鑒定及其特性研究


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【摘要】:棉花是新疆的主要經(jīng)濟(jì)作物,資料得知,新疆地區(qū)的種植面積達(dá)到3151萬畝(2015年),農(nóng)作物秸稈的產(chǎn)量已超出7億噸(2015年),其中棉花秸稈產(chǎn)量達(dá)650萬噸(2012年)。棉花秸稈是一種產(chǎn)量巨大,蛋白質(zhì)和其他營養(yǎng)物質(zhì)含量較高的可再生植物蛋白飼料資源。但由于棉花全株包含著對動(dòng)物生長繁殖有潛在危害的有毒物質(zhì)─游離棉酚,從而限制了棉花秸稈做原料生產(chǎn)青貯飼料或棉籽油加工過程中的沉淀物─棉籽油泥作為飼料添加劑方面的利用價(jià)值,造成飼料資源的浪費(fèi)問題。目前,在國內(nèi)外降解有毒棉酚的方法有物理法,化學(xué)法和生物發(fā)酵法。雖然物理化學(xué)脫毒法對棉籽粕的解毒起到了一定作用,但處理當(dāng)中也存在于成本高,營養(yǎng)物質(zhì)易破壞等一些缺點(diǎn)。生物發(fā)酵法來降解棉酚是當(dāng)前最安全,脫毒效果最好,生產(chǎn)成本低的脫毒方法。不僅可使棉花秸稈,棉籽油和棉籽油泥脫毒,同時(shí)可提高它們在飼料上的利用等方面有巨大的應(yīng)用價(jià)值。1.本研究從棉花秸稈中共分離出14種菌株,通過以醋酸棉酚為唯一碳源培養(yǎng)基平板劃線來分離篩選出6株具有分解棉酚能力的菌株,編號分別為A1、A2、A4、B1、B2、B9。為了進(jìn)一步篩選出具有較高的分解棉酚能力的菌株,對其進(jìn)行復(fù)篩。試驗(yàn)結(jié)果表明,菌株B1和B9在棉酚濃度不同的以醋酸棉酚為唯一碳源的固體平板上生長較快且好。從NA平板上菌落形態(tài)觀察結(jié)果顯示:B1菌落正反面顏色一致、圓形、邊緣不整齊、乳白色、表面有褶皺、表面濕潤、中心稍隆起、透明;B1菌體細(xì)胞長約1.27~2.30μm,桿狀、著色均勻、能夠產(chǎn)生橢圓形芽孢、革蘭氏陽性。B9菌落圓形、淡黃色、邊緣不整齊、不透明、中間凸起如脊?fàn)?B9菌體細(xì)胞長約1.26~2.69μm,著色均勻、長桿狀、革蘭氏陽性。根據(jù)一些形態(tài)特征初步鑒定為芽胞桿菌。利用Biolog微生物自動(dòng)鑒定系統(tǒng)來對其進(jìn)行鑒定,結(jié)果表明,菌株B1和B9都屬于芽胞桿菌屬,種名分別為死谷芽孢桿菌(Bacillus vallismortis)和漠海威芽孢桿菌(Bacillus mojavensis)。2.利用高效液相色譜(HPLC)方法來測定棉花秸稈、棉籽、棉籽餅、食用棉籽油、未加工的棉籽油和棉籽油泥中的總棉酚和游離棉酚含量。探討吐魯番本地樣品中各個(gè)棉花副產(chǎn)品中棉酚含量,為后續(xù)研究提供參考數(shù)據(jù)。檢驗(yàn)結(jié)果顯示,棉花秸稈中總棉酚和游離棉酚含量分別為0.02%和小于0.8μg/ml,棉籽中總棉酚含量為1.66%和游離棉酚含量為5949.8 mg/kg,棉餅中總棉酚含量為0.68%和游離棉酚含量為159mg/kg,未加工棉籽油中總棉酚含量為2.50%和游離棉酚含量為8033.5 mg/kg,食用棉籽油中總棉酚含量未檢出,游離棉酚含量≤0.25mg/kg,棉籽油泥中總棉酚含量為5.23%,游離棉酚含量為30796.5mg/kg。對棉籽油和棉籽油泥的脫毒效果試驗(yàn)得知,菌株B1和B9在同樣的接種量和培養(yǎng)溫度下對棉籽油的脫毒效果有一定的脫毒作用,對棉籽油的脫毒率分別為21.1%和22.2%。但對棉籽油泥的脫毒不太理想,需要繼續(xù)研究。3.將為探討棉酚分解菌B1和B9是否可以作為飼料添加劑,棉酚分解菌(B1、B9)與高效飼用乳酸菌和纖維素分解菌在2%的蔗糖溶液中混合培養(yǎng),并對單獨(dú)菌和混合菌生長特性進(jìn)行研究,探討這三類菌株之間有無相互抑制作用。試驗(yàn)得知,將這三類菌株在2%的蔗糖溶液中混合培養(yǎng)時(shí),混合菌達(dá)到穩(wěn)定期的時(shí)間比單獨(dú)菌達(dá)到穩(wěn)定期的時(shí)間顯著縮短,這就表明這三類菌株之間無抑制作用,彼此促進(jìn)生長,為開發(fā)新型的飼料混合添加劑提供理論基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】:以醋酸棉酚唯一碳源培養(yǎng)基 總棉酚 游離棉酚 棉酚分解菌 棉花秸稈 混合菌培養(yǎng) 單獨(dú)菌培養(yǎng)
【學(xué)位授予單位】:新疆大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2016
【分類號】:S816;Q939.9
【目錄】:
  • 摘要6-8
  • Abstract8-10
  • 主要縮寫詞表(Abbreviation)10-11
  • 第一章 緒論11-26
  • 1 引言11-26
  • 1.1 課題的研究背景11-12
  • 1.2 棉酚的結(jié)構(gòu)與化學(xué)性質(zhì)12-14
  • 1.3 棉酚的檢測方法14-15
  • 1.4 棉酚對動(dòng)物的危害15-18
  • 1.4.1 棉酚對反芻動(dòng)物的影響15-16
  • 1.4.2 棉酚對非反芻的影響16-17
  • 1.4.3 棉酚對人類的影響17-18
  • 1.5 棉酚的脫毒方法18-21
  • 1.5.1 物理法18-19
  • 1.5.2 化學(xué)法19-20
  • 1.5.3 生物發(fā)酵法20-21
  • 1.6 棉酚分解菌在飼料中的應(yīng)用21-22
  • 1.7 國內(nèi)外對棉酚分解菌的研究狀況22-23
  • 1.8 本論文研究的內(nèi)容及其意義23-24
  • 1.8.1 研究內(nèi)容23
  • 1.8.2 研究目的及意義23-24
  • 1.9 創(chuàng)新點(diǎn)24-25
  • 1.10 技術(shù)路線25-26
  • 第二章 棉花秸稈中棉酚分解菌的分離篩選和鑒定26-41
  • 1 實(shí)驗(yàn)材料26-29
  • 1.1 樣品來源26
  • 1.2 培養(yǎng)基26-27
  • 1.3 主要儀器與試劑27-29
  • 1.3.1 主要儀器27-28
  • 1.3.2 試劑28-29
  • 2 實(shí)驗(yàn)方法29-31
  • 2.1 菌株的初篩29
  • 2.2 菌株復(fù)篩29
  • 2.3 形態(tài)觀察29
  • 2.4 分子鑒定29-31
  • 2.4.1 BUG+M+T培養(yǎng)基的配制30-31
  • 2.4.2 菌株的純化和制備31
  • 2.4.3 菌株的鑒定方法31
  • 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-39
  • 3.1 菌株的初篩31
  • 3.2 菌株的復(fù)篩31-33
  • 3.3 菌株形態(tài)特征33-34
  • 3.4 分子鑒定結(jié)果34-39
  • 4 討論39-40
  • 5 結(jié)論40-41
  • 第三章 棉酚分解菌對棉籽油和棉籽泥的脫毒效果研究41-50
  • 1 實(shí)驗(yàn)材料41
  • 1.1 樣品來源41
  • 1.2 培養(yǎng)基41
  • 1.3 主要儀器41
  • 2 試驗(yàn)方法41-43
  • 2.1 試驗(yàn)樣品中總棉酚和游離棉酚含量的測定41-42
  • 2.2 結(jié)果計(jì)算42
  • 2.3 所用菌株的活化42
  • 2.4 菌株對棉籽油和棉籽油泥的脫毒效果42-43
  • 2.5 數(shù)據(jù)分析43
  • 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果43-47
  • 3.1 樣品中棉酚含量43-44
  • 3.2 棉酚標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作44-46
  • 3.3 棉酚分解菌對未加工棉籽油棉酚含量的影響46-47
  • 4 討論47-49
  • 5 結(jié)論49-50
  • 第四章 棉酚分解菌與高效乳酸菌和纖維素分解菌的混合培養(yǎng)特性研究50-57
  • 1 實(shí)驗(yàn)材料50-52
  • 1.1 樣品來源50-51
  • 1.2 培養(yǎng)基51-52
  • 1.3 主要儀器與試劑52
  • 2 試驗(yàn)方法52-53
  • 2.1 實(shí)驗(yàn)所用菌株的活化52
  • 2.2 菌株的單獨(dú)培養(yǎng)和混合培養(yǎng)及生長曲線的測定52-53
  • 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果53-55
  • 3.1 生長曲線的測定53-55
  • 4 討論55-56
  • 5 結(jié)論56-57
  • 第五章 結(jié)論與討論57-61
  • 1 結(jié)論57-58
  • 2 討論58-61
  • 展望61-62
  • 參考文獻(xiàn)62-71
  • 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文情況71-73
  • 作者簡介73-74
  • 附錄 174-77
  • 附錄 277-80
  • 致謝80-81

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6 孟e

本文編號:1114726


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