本文關(guān)鍵詞：外源谷胱甘肽促進(jìn)牛體外受精胚胎發(fā)育的機(jī)制

  更多相關(guān)文章： 牛 谷胱甘肽 體外受精胚胎 抗氧化 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序

【摘要】：在胚胎的體外培養(yǎng)過(guò)程中會(huì)有氧自由基(reactive oxygen species,ROS)的產(chǎn)生,正常情況下胞內(nèi)產(chǎn)生和清除ROS的量會(huì)維持平衡狀態(tài),然而這種狀態(tài)一旦遭到破壞就會(huì)使胞內(nèi)積累過(guò)多的ROS,過(guò)量的ROS會(huì)損傷細(xì)胞,影響胚胎的發(fā)育能力�？寡趸瘎┕入赘孰�(glutathione,GSH)能清除ROS,由ROS帶來(lái)的氧化應(yīng)激不能損傷到胚胎,最終對(duì)胚胎的體外發(fā)育和胚胎質(zhì)量都能有所提高。然而,外源GSH如何進(jìn)入體外培養(yǎng)的胚胎內(nèi),并有效清除ROS的機(jī)制并不清楚,因此本文采用胚胎工程、細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)和轉(zhuǎn)錄組學(xué)方法揭示外源GSH的轉(zhuǎn)運(yùn)及其對(duì)胞內(nèi)ROS的作用機(jī)制,及GSH處理對(duì)胚胎轉(zhuǎn)錄組水平的影響,為胚胎體外生產(chǎn)效率的提高提供理論基礎(chǔ)。牛體外受精胚胎培養(yǎng)液中添加3毫摩爾每升(mmol/L,mM)GSH后繼續(xù)培養(yǎng)到7天,分別統(tǒng)計(jì)各階段的胚胎發(fā)育率及囊胚總細(xì)胞數(shù);同時(shí),測(cè)定受精后8h、18h、24h和32h胚胎內(nèi)的ROS和GSH含量。采用酶聯(lián)免疫測(cè)定受精后8h、18h、24h和32h胚胎中GSH運(yùn)輸和再合成相關(guān)酶(GGT、GGT、5-OPase、GCLC、GCLM和GSS)的活性,及其在基因的mRNA表達(dá)水平。結(jié)果,GSH添加后,卵裂率及囊胚率明顯提高;細(xì)胞內(nèi)ROS含量降低,GSH升高。此外,添加GSH后發(fā)現(xiàn)在受精32h時(shí),GGT的mRNA表達(dá)量上升,GCLC和GSS的mRNA表達(dá)水平下降;在受精后18h時(shí),GGCT的mRNA表達(dá)量下降,5-OPase和GCLM的表達(dá)量上升。與GSH轉(zhuǎn)運(yùn)和再合成相關(guān)的4種酶的活性也發(fā)生了相應(yīng)的改變。其中,在受精后18h,γ-GCS的活性顯著增高(P0.05),GGCT活性則顯著降低(P0.05);在受精后32h,GGT的活性顯著升高(P0.05),GSS的活性顯著降低(P0.05)。說(shuō)明添加GSH能顯著提高體外胚胎發(fā)育能力。采用Illumina平臺(tái)對(duì)8-16細(xì)胞期和桑椹期的牛體外受精胚胎,進(jìn)行測(cè)序;篩選出差異基因進(jìn)行功能注釋和代謝途徑分析;采用定量PCR對(duì)十個(gè)基因的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè),以驗(yàn)證測(cè)序結(jié)果的準(zhǔn)確性;在獲得的新轉(zhuǎn)錄本中挑選3組進(jìn)行RNA和蛋白結(jié)構(gòu)的預(yù)測(cè)。在對(duì)OOSP1,THAP9等10個(gè)基因的定量檢測(cè)、測(cè)序結(jié)果的質(zhì)量評(píng)價(jià)(堿基錯(cuò)誤率、Q20、Q30、GC含量)、reads與�；蚪M的比對(duì)及其在基因組的分布統(tǒng)計(jì)分析,均說(shuō)明該測(cè)序結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。與已知的轉(zhuǎn)錄本相比,4個(gè)新轉(zhuǎn)錄本中均發(fā)現(xiàn)不同長(zhǎng)度的新外顯子;預(yù)測(cè)的蛋白結(jié)構(gòu)中除包含各自的保守結(jié)構(gòu)域(絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶的催化結(jié)構(gòu)域、MAD同源結(jié)構(gòu)域)外,還發(fā)現(xiàn)2個(gè)新的蛋白結(jié)構(gòu)域(低復(fù)雜區(qū)、dwarfins蛋白家族B結(jié)構(gòu)域)。在培養(yǎng)液中添加GSH能導(dǎo)致胚胎轉(zhuǎn)錄譜的變化,顯著提高胚胎的體外發(fā)育能力。
【關(guān)鍵詞】：牛 谷胱甘肽 體外受精胚胎 抗氧化 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序
【學(xué)位授予單位】：河北工程大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：S823
【目錄】：

• 縮略詞（Abbreviation）5-7
• 摘要7-9
• Abstract9-14
• 第一章 文獻(xiàn)綜述14-23
• 1.1 早期胚胎發(fā)育14-15
• 1.2 谷胱甘肽在胚胎發(fā)育中的作用15-16
• 1.3 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的研究現(xiàn)狀16
• 1.4 基因功能驗(yàn)證及新轉(zhuǎn)錄本功能預(yù)測(cè)16-21
• 1.4.1 生物信息學(xué)分析17-18
• 1.4.2 分子生物學(xué)技術(shù)18-20
• 1.4.3 蛋白水平分析20
• 1.4.4 表型分析20-21
• 1.5 本研究的目的意義21-23
• 第二章 谷胱甘肽對(duì)分裂前胚胎發(fā)育的影響23-36
• 2.1 試驗(yàn)材料23-24
• 2.1.1 試驗(yàn)材料23
• 2.1.2 主要儀器和設(shè)備23-24
• 2.1.3 主要試劑和耗材24
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法24-29
• 2.2.1 主要溶液的配制24-25
• 2.2.2 卵母細(xì)胞的采集和體外成熟培養(yǎng)25
• 2.2.3 體外受精25
• 2.2.4 體外培養(yǎng)25
• 2.2.5 囊胚總細(xì)胞數(shù)計(jì)算25-26
• 2.2.6 卵母細(xì)胞和合子內(nèi)GSH、ROS含量的檢測(cè)26
• 2.2.7 qRT-PCR檢測(cè)基因表達(dá)情況26-28
• 2.2.8 與GSH轉(zhuǎn)運(yùn)合成相關(guān)酶的活性測(cè)定28-29
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析29-33
• 2.3.1 谷胱甘肽對(duì)胚胎發(fā)育的影響29-30
• 2.3.2 對(duì)內(nèi)源性GSH、ROS的影響30-31
• 2.3.3 對(duì)谷胱甘肽轉(zhuǎn)運(yùn)合成相關(guān)基因的影響31-32
• 2.3.4 對(duì)谷胱甘肽轉(zhuǎn)運(yùn)合成相關(guān)酶的影響32-33
• 2.4 討論33-36
• 第三章 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序質(zhì)量評(píng)估36-42
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料36
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料36
• 3.1.2 主要儀器和設(shè)備36
• 3.1.3 主要試劑和耗材36
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法36-37
• 3.2.1 建庫(kù)測(cè)序36-37
• 3.2.2 測(cè)序質(zhì)量的控制37
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析37-41
• 3.3.1 測(cè)序數(shù)據(jù)的質(zhì)量情況匯總37-39
• 3.3.2 READS與參考基因組比對(duì)情況39-40
• 3.3.3 READS在參考基因組不同區(qū)域的分布情況40-41
• 3.4 討論41-42
• 第四章 新轉(zhuǎn)錄本的預(yù)測(cè)及定量PCR驗(yàn)證42-49
• 4.1 實(shí)驗(yàn)材料42
• 4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料42
• 4.1.2 主要儀器和設(shè)備42
• 4.1.3 主要試劑和耗材42
• 4.2 實(shí)驗(yàn)方法42-44
• 4.2.1 新轉(zhuǎn)錄本的ORF預(yù)測(cè)和功能預(yù)測(cè)42-43
• 4.2.2 cDNA的樣品制備和定量檢測(cè)43
• 4.2.3 引物設(shè)計(jì)及定量驗(yàn)證43-44
• 4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析44-48
• 4.3.1 新轉(zhuǎn)錄本ORF預(yù)測(cè)44-45
• 4.3.2 功能結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)45-47
• 4.3.3 定量PCR檢測(cè)結(jié)果與轉(zhuǎn)錄組比較47-48
• 4.4 討論48-49
• 第五章 全文總結(jié)49-50
• 參考文獻(xiàn)50-55
• 致謝55-56
• 作者簡(jiǎn)介56-57
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文57-58

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 范必勤,W.R.杜克洛;鼠猴體外受精研究[J];江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào);1989年01期

2 魏平華;張?zhí)煊?;豬體外受精研究綜述[J];畜牧獸醫(yī)科技;1989年02期

3 衛(wèi)中;;牛羊體外受精研究取得重大進(jìn)展[J];青海畜牧獸醫(yī)雜志;1989年04期

4 鹽谷康生;郭春潤(rùn);;牛的體外受精[J];國(guó)外畜牧科技;1990年01期

5 孫國(guó)鳳;;在靜岡縣著手牛體外受精卵移植事業(yè)[J];生物技術(shù)通報(bào);1993年10期

6 孫秀娟;;小鼠體外受精的影響因素[J];中國(guó)奶牛;2011年04期

7 范必勤,熊慧卿,劉鐵錚,徐曉波,邵春榮,B.G.勃拉吉特,W.R.杜克洛;家兔體外受精研究[J];江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào);1987年01期

8 安聞;;黃牛體外受精發(fā)育成功[J];東北農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào);1987年01期

9 鍾生泉;唐維六;;多化性桑蠶品種的體外受精研究初報(bào)[J];廣東農(nóng)業(yè)科學(xué);1987年03期

10 張一峰;哺乳動(dòng)物體外受精研究進(jìn)展[J];國(guó)外畜牧學(xué)(草食家畜);1988年03期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 許張曄;葉碧綠;;體外受精后出生的2歲幼兒生長(zhǎng)發(fā)育的研究[A];首屆滬浙婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)論壇暨2006年浙江省婦產(chǎn)科學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2006年

2 甘賢優(yōu);張波;周紅;馮貴雪;舒金輝;劉茵;高璇璇;;體外受精治療中取精困難患者的干預(yù)對(duì)策和效果評(píng)估[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第六次全國(guó)生殖醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議專(zhuān)刊[C];2012年

3 王倩倩;朱依敏;吳明遠(yuǎn);;體外受精母親與子代健康隨訪分析[A];2009中國(guó)杭州生殖健康學(xué)術(shù)論壇暨浙江省計(jì)劃生育學(xué)與生殖醫(yī)學(xué)分會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

4 鄧冰冰;王文軍;李瑞岐;黃麗麗;張寧鋒;區(qū)頌邦;歐陽(yáng)能勇;;體外受精患者卵巢反應(yīng)不良的后續(xù)治療方案的比較[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十次全國(guó)婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)會(huì)議婦科內(nèi)分泌會(huì)場(chǎng)（婦科內(nèi)分泌學(xué)組、絕經(jīng)學(xué)組、計(jì)劃生育學(xué)組）論文匯編[C];2012年

5 賈秀芬;周燕華;劉慧雯;金明順;;三種抗氧化劑對(duì)小鼠體外受精胚胎發(fā)育的影響[A];中國(guó)解剖學(xué)會(huì)第十一屆全國(guó)組織學(xué)與胚胎學(xué)青年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2009年

6 吳紅;李厚達(dá);;小鼠體外受精和精子冷凍的研究[A];中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)會(huì)第六屆學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2004年

7 馮秀清;陳雅雋;鐘淑琦;閆曉飛;董建將;雷蕾;;體外受精和孤雌活化過(guò)程中小鼠胚胎細(xì)胞骨架的動(dòng)態(tài)變化[A];2007年中國(guó)解剖學(xué)會(huì)第十屆全國(guó)組織學(xué)與胚胎學(xué)青年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要匯編[C];2007年

8 江楠;劉霞;蔡文偉;常永富;華科;王玉潔;徐營(yíng);;小鼠超短時(shí)體外受精研究[A];2012浙江省計(jì)劃生育與生殖醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2012年

9 王麗潔;邢華;孫強(qiáng);;小鼠體外受精與胚胎移植影響因素的研究[A];動(dòng)物生理生化學(xué)分會(huì)第八次學(xué)術(shù)會(huì)議暨全國(guó)反芻動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)生理生化第三次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要匯編[C];2004年

10 周燦權(quán);;體外受精與胚胎移植技術(shù)臨床進(jìn)展[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第五屆全國(guó)計(jì)劃生育學(xué)術(shù)會(huì)議資料匯編[C];2004年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 馮衛(wèi)東;英發(fā)明生育輔助“導(dǎo)航系統(tǒng)”[N];科技日?qǐng)?bào);2010年

2 麥迪信;無(wú)針裝置體外受精更便捷[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2002年

3 記者 曉姝 通訊員 史紹俊;國(guó)內(nèi)外首例“試管犏�！闭Q生[N];青海日?qǐng)?bào);2012年

4 劉霞;中藥在提高受孕幾率上優(yōu)于西藥[N];科技日?qǐng)?bào);2011年

5 尚喜峰 王共全;我省首次成功為體外受精減胎[N];山西日?qǐng)?bào);2000年

6 記者 錢(qián)錚;日允許使用第三方生殖細(xì)胞體外受精[N];新華每日電訊;2008年

7 陳立希;試管受精新法：母親不再受激素之苦[N];新華每日電訊;2007年

8 記者 俞慧友 通訊員 何艷;我“體外受精胚胎遺傳學(xué)診斷”達(dá)世界先進(jìn)水平[N];科技日?qǐng)?bào);2013年

9 李修;家畜性別早知道[N];農(nóng)民日?qǐng)?bào);2002年

10 張麗輝 劉廉君;生物技術(shù)助反芻家畜“早婚多育”[N];科技日?qǐng)?bào);2006年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 謝蘭;用于精子篩選及體外受精的微流控芯片的構(gòu)建及應(yīng)用[D];清華大學(xué);2010年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 蘇敏;ROCK蛋白在豬體外受精早期胚胎發(fā)育中的作用[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2015年

2 徐江姐;論我國(guó)體外受精胚胎在婚姻關(guān)系中的法律規(guī)制[D];南昌大學(xué);2015年

3 魏婕;體外受精胚胎法律地位及其歸屬[D];華東政法大學(xué);2015年

4 聶玉林;精子因素對(duì)體外受精結(jié)局的影響及處理策略[D];南華大學(xué);2015年

5 呂鵬;牦牛HSPA12B基因的克隆及其在體外受精胚胎中的定位表達(dá)[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

6 于學(xué)穎;外源谷胱甘肽促進(jìn)牛體外受精胚胎發(fā)育的機(jī)制[D];河北工程大學(xué);2016年

7 許珊珊;接受體外受精—胚胎移植治療的婦女的心理健康狀況及其對(duì)受孕結(jié)果的影響[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2013年

8 王倩倩;體外受精母親與子代健康狀況分析[D];浙江大學(xué);2008年

9 潘曉明;不明原因不孕患者體外受精方式的分析[D];浙江大學(xué);2010年

10 賈佩;豬卵巢卵母細(xì)胞體外受精的研究[D];青海大學(xué);2015年

，

本文編號(hào)：1114890