本文關鍵詞：鴨補體系統(tǒng)的發(fā)育性變化及RA感染的影響

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【摘要】：鴨疫里默氏菌(Riemerella anatipestifer,RA)引起的鴨病稱為鴨傳染性漿膜炎,該病呈敗血癥形式,以纖維素性心包炎、肝周炎、腦膜炎、氣囊炎和神經癥狀以及部分病例出現干酪樣輸卵管炎、結膜炎、關節(jié)炎為特征,是養(yǎng)鴨業(yè)最為嚴重的傳染病之一,至今幾乎存在于所有養(yǎng)鴨地區(qū)。該細菌的感染,以發(fā)病率和死亡率高、生長性能下降、肉品質量下降、預防和治療費用增加等造成嚴重的經濟損失。由于RA耐藥性嚴重,菌株的血清型眾多且缺乏交叉免疫保護,現有免疫接種和抗菌藥物治療措施在生產中的應用受到一定的限制。補體(complement,C)系統(tǒng)是人和動物固有免疫系統(tǒng)重要的組分之一,不但是機體防御病原體的第一道防線,參與清除“危險信號”,而且在調控炎癥反應和免疫應答的過程中也發(fā)揮極其重要的作用。補體活性的高低,是動物的補體系統(tǒng)抵抗入侵病原微生物能力大小的標志。檢測補體的單個成分及補體的活性測定對于機體免疫系統(tǒng)的功能評價,疾病的診斷與治療,流行病學調查等均有重要作用。本試驗選取四川麻鴨為研究對象,通過建立鴨疫里默氏菌感染模型來研究RA感染前后鴨補體活性的變化、C3d基因和CR2基因的m RNA表達變化及C3d和s CR2蛋白含量的變化,旨在揭示鴨疫里默氏桿菌(RA)感染對鴨補體系統(tǒng)的影響,為進一步研究補體在鴨抗RA感染免疫中的作用奠定基礎。本研究的主要結果如下:1.麻鴨RA感染模型的建立實驗條件下飼喂的10日齡四川麻鴨腿部皮下注射RA菌液0.2m L/只(1×109cfu/m L),接種后168h內發(fā)病率80%、死亡率70%,其中接種后24h出現明顯的臨床癥狀、死亡高峰期在36h~60h。病死鴨解剖表現出全身漿膜及各組織器官的被膜纖維素滲出附著,呈現典型的纖維素性心包炎、肝周炎;心臟、肝臟、脾臟充血腫大。2.麻鴨血清補體活性的變化利用溶血素致敏雞紅細胞及固定血清稀釋度(1:5)測定麻鴨血清總補體溶血活性。利用1%兔紅細胞及固定血清稀釋度(1:5)測定血清補體旁路途徑溶血活性。麻鴨血清總補體溶血活性1~15d逐漸升高,15~21d趨于穩(wěn)定并接近成年麻鴨;旁路途徑溶血活性1~15d逐漸升高,15~21d趨于穩(wěn)定并接近成年麻鴨。10日齡麻鴨人工感染RA,血清總補體溶血活性在感染后12~24h升高,且高于對照組;36~48h逐漸降低,48~168h逐漸升高,但都低于對照組。血清旁路途徑溶血活性在感染后12~48h逐漸降低,48~168h逐漸升高,但都低于對照組。3.麻鴨C3d、CR2 m RNA表達的變化根據Genebank上發(fā)表的鴨C3d基因序列(登錄號:EU847624.1)、鴨CR2的EST序列(登錄號:DR765735.1)設計引物,分別以肝臟和脾臟提取總RNA為模板建立RT-PCR,克隆測序得到四川麻鴨C3d和CR2基因片段分別為991bp和347bp。在NCBI上比對發(fā)現四川麻鴨C3d基因與綠頭鴨C3d基因相似性達99%,四川麻鴨CR2基因與卷羽鵜鶘CR2基因相似性達90%。依據已獲得的C3d、CR2基因序列設計熒光定量PCR引物,以鴨β-actin基因作內參基因,1日齡作對照,采用2-△△Ct法進行C3d、CR2 m RNA的表達分析。麻鴨C3d m RNA在1~12d表達升高,12~21d表達趨于穩(wěn)定;CR2 m RNA的表達不規(guī)律,在1.00~2.87倍之間,3、6、9、12、15、18和21d的表達分別是1d的1.73倍、1.45倍、2.55倍、1.68倍、1.39倍、1.82倍和2.87倍。10日齡麻鴨人工感染RA后,C3d m RNA的表達12~48h逐漸降低,48~168h逐漸升高,且都低于對照組;CR2 m RNA的表達在感染后12~48h逐漸降低,48~168h逐漸升高,且都低于對照組。4.麻鴨C3d、s CR2蛋白含量的變化根據鴨C3d ELISA試劑盒和鴨可溶性白細胞分化抗原21(CR2/s CD21)ELISA試劑盒操作說明分別測定麻鴨C3d和s CR2的蛋白含量。麻鴨血清中C3d蛋白含量在1~9d平穩(wěn),9~15d升高,15~21d趨于穩(wěn)定;麻鴨s CR2蛋白含量在1~21d處于一個較平穩(wěn)的水平。10日齡麻鴨人工感染RA后,血清C3d蛋白含量在感染后12~168h比對照組高;s CR2蛋白含量在感染后12~72h高于對照組,而在感染后168h低于對照組。
【關鍵詞】：鴨 補體 鴨疫里默氏菌 C3d CR2
【學位授予單位】：西南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S834
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-11
• 第1章 文獻綜述11-25
• 1.1 補體系統(tǒng)概述11-15
• 1.1.1 補體系統(tǒng)成分的分類11-12
• 1.1.2 補體系統(tǒng)的激活12-14
• 1.1.3 補體激活的生物學效應14-15
• 1.2 補體C3d及其受體CR2的分子特征和功能15-18
• 1.2.1 分子特征16-18
• 1.2.2 C3d、CR2結合的功能18
• 1.3 鴨疫里默氏菌致病機制18-21
• 1.3.1 侵襲力19-20
• 1.3.2 毒素20-21
• 1.4 病原感染對補體系統(tǒng)的影響21-25
• 第2章 引言25-27
• 第3章 鴨補系統(tǒng)的發(fā)育性變化及RA感染的影響27-59
• 3.1 材料27-28
• 3.1.1 菌種27
• 3.1.2 試驗動物27
• 3.1.3 主要試劑及耗材27
• 3.1.4 主要儀器27-28
• 3.2 試驗方法28-39
• 3.2.1 雛鴨感染模型的建立28-29
• 3.2.3 血清補體活性的測定29-31
• 3.2.4 鴨C3d、CR2基因片段的克隆31-36
• 3.2.5 熒光定量PCR36-38
• 3.2.6 C3d和sCR2蛋白含量測定38-39
• 3.3 結果39-54
• 3.3.1 鴨疫里默氏菌感染雛鴨39-41
• 3.3.2 麻鴨血清總補體溶血活性41-43
• 3.3.3 麻鴨血清旁路途徑溶血活性43-44
• 3.3.4 麻鴨C3d、CR2基因部分核苷酸序列分析44-45
• 3.3.5 熒光定量PCR引物特異性45-46
• 3.3.6 熒光定量PCR的標準曲線46-48
• 3.3.7 麻鴨C3d mRNA的表達48-49
• 3.3.8 麻鴨CR2 mRNA的表達49-50
• 3.3.9 血清中C3d蛋白含量50-52
• 3.3.10 sCR2的蛋白含量52-54
• 3.4 討論54-59
• 第4章 結論59-61
• 參考文獻61-67
• 附錄Ⅰ：英文縮略詞表67-69
• 附錄Ⅱ：主要溶液及試劑的配制69-71
• 致謝71-73
• 攻讀碩士期間論文發(fā)表情況73

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1 白登良;李明全;李文樹;杜文光;任大為;何玉利;;建川雜交鴨肉用性能測定[J];中國家禽;1987年03期

2 張子元;姜小雨;張良才;;櫻桃谷鴨與四川麻鴨雜交試驗[J];四川畜牧獸醫(yī);1989年04期

3 邱祥聘,曾凡同,謝后清,劉福容,郭代榮,張俊康,楊登義,張子元;四川麻鴨野營群牧飼養(yǎng)的食性分析[J];中國畜牧雜志;1980年04期

4 曾凡同;王林全;蔣小松;劉福蓉;邱祥聘;盧永春;趙興富;;四川麻鴨經濟雜交組合比較試驗[J];四川農學院學報;1984年02期

5 陳元昌;;四川麻鴨雜交增重顯著[J];四川農業(yè)科技;1986年01期

6 白登良;李明全;李文樹;杜文光;任大為;何玉釗;;建川雜交鴨與四川麻鴨肉用性能對比試驗[J];養(yǎng)禽與禽病防治;1987年06期

7 廖德惠;張敏;張化賢;謝鏡懷;何明清;郭萬柱;肖國海;;四川麻鴨鴨瘟診斷簡報[J];四川農業(yè)科技;1981年02期

8 夏淑文;陳元昌;;蛋鴨籠養(yǎng)的效益[J];中國家禽;1989年02期

9 黃國清;提高農戶飼養(yǎng)肉鴨經濟效益的措施[J];中國家禽;1990年02期

10 李安興,聶奎,曾子建,周繼勇;四川麻鴨隱孢子蟲病的調查[J];中國獸醫(yī)科技;1991年09期

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1 陳斌;鴨α干擾素原（真）核表達及其生物學活性研究[D];四川農業(yè)大學;2008年

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1 王秀禎;鴨補體系統(tǒng)的發(fā)育性變化及RA感染的影響[D];西南大學;2016年

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本文編號：1079257