發(fā)布時間：2017-10-13 11:36

  本文關(guān)鍵詞：產(chǎn)γ-氨基丁酸益生菌的篩選及對小鼠微生態(tài)效應(yīng)的影響研究

  更多相關(guān)文章： γ-氨基丁酸 益生菌 篩選 生物活性 微生態(tài)

【摘要】：本研究為篩選具有生物拮抗活性和耐酸耐膽鹽能力的高產(chǎn)γ-氨基丁酸(GABA)的益生菌菌株,并探討其微生態(tài)效應(yīng)。從待分離樣品中篩選出可疑菌株,經(jīng)紙層析和HPLC-MS進(jìn)行定性和定量分析,篩選出一株高產(chǎn)GABA菌株；通過小鼠飼喂試驗研究該高產(chǎn)GABA菌株對小鼠生長性能、血清抗氧化能力、免疫器官指數(shù)、脾淋巴細(xì)胞增殖、盲腸菌群以及空腸和十二指腸黏膜的影響。試驗結(jié)果如下：1.通過細(xì)菌形態(tài)、生理生化特性并結(jié)合細(xì)菌16S rDNA序列分析對高產(chǎn)菌株進(jìn)行鑒定,同時研究高產(chǎn)菌株對3種動物性病原菌的生物拮抗作用及其耐酸耐膽鹽試驗。結(jié)果,從泡菜中篩選出的菌株GA8為高產(chǎn)γ-氨基丁酸菌株,在含有1%L-谷氨酸鈉的GYP培養(yǎng)基中37℃培養(yǎng)48 h,產(chǎn)GABA量達(dá)3.50 g-L-’,經(jīng)鑒定該菌株為植物乳桿菌；該菌株全菌液和上清液對雞源大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和雞白痢沙門氏菌有一定的抑制作用,其菌體懸液無抑菌能力；該菌初始活菌數(shù)為108 CFU.mL-1時,在pH=2.0的酸性環(huán)境中處理4 h后活菌數(shù)能達(dá)到106CFU.mL-1以上；0.3%膽鹽濃度處理4 h,活菌數(shù)達(dá)到103 CFU·mL-1左右。表明所篩選出的產(chǎn)γ-氨基丁酸菌株GA8具有一定的抑菌性能和耐酸能力,0.1%膽鹽濃度下有較強(qiáng)的存活率。2.60只昆明系雌性小鼠隨機(jī)分成5組,試驗1、2、3組小鼠飲用水中分別添加含有1×106 CFU mL-1,2×106 CFU mL-1,4×106 CFU mL-1的產(chǎn)GABA植物乳桿菌GA8,對照組在飲用水和日糧中不添加任何制劑,GABA組在日糧中加入15 ppmGABA,小鼠飼喂30 d后,檢測其生長性能、血清抗氧化能力、免疫器官指數(shù)、脾淋巴細(xì)胞增殖、盲腸菌群結(jié)構(gòu)以及空腸和十二指腸黏膜結(jié)構(gòu)。結(jié)果：(1)飼喂產(chǎn)GABA植物乳桿菌GA8后,試驗1、2、3組、GABA組的末重分別比對照組提高了2.10%、0.86%、5.55%、4.48%,平均日增重分別提高了10.71%、7.14%、17.86%、10.71%,其中僅試驗3組與對照組差異顯著(P0.05)；試驗1、2、3組、GABA組的料重比分別比對照組降低了6.93%、5.66%、11.10%、10.68%(P0.05)。(2)與對照組相比,試驗1、2、3組的總抗氧化能力(T-AOC)分別提高了6.04%、30.97%、31.11%,總超氧化物歧化分別提高了4.94%、6.13%、5.23%,丙二醛(MDA)分別降低了11.32%、9.16%、7.63%,但差異均不顯著(P0.05)。(3)試驗1、2、3組小鼠盲腸大腸桿菌顯著或極顯著低于對照組和GABA組(P0.05或P0.01)；試驗1、2、3組、GABA組的乳桿菌比對照組分別增加了1.16%、0.91%、1.68%、0.52%,試驗3組與對照組差異顯著(P0.05)；試驗1、2組的腸球菌顯著低于對照組(P0.05),試驗2組顯著低于GABA組(P0.05)；采用PCR-DGGE技術(shù)分析,試驗1、2、3組和GABA組腸道菌群的多樣性指數(shù)、均勻度和豐富度均高于對照組。(4)試驗1、2、3組和GABA組的各免疫器官指數(shù)表現(xiàn)出了一定的優(yōu)勢,胸腺指數(shù)分別提高了19.25%、6.28%、16.74%、1.26%,試驗1組與對照組、GABA組差異均顯著(P0.05),其余各組無明顯差異；試驗1、2、3組和GABA組的脾臟指數(shù)分別提高了10.71%、12.01%、10.39%、9.09%,各組間無明顯差異(P0.05)。(5)飼喂產(chǎn)GABA植物乳桿菌后小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率增高,試驗1、2、3組與對照組相比差異極顯著(P0.01)；GABA組與對照組差異顯著(P0.05)；試驗1組與試驗2組、GABA組差異顯著(P0.05);試驗3組與GABA組差異極顯著(P0.01)。(6)十二指腸絨毛長度明顯增加,試驗1、2、3組、GABA組都與對照組差異極顯著(P0.01),其中試驗1組與試驗3組差異顯著(P0.05),試驗3組與試驗2組和GABA組差異極顯著(P0.01)；十二指腸隱窩深度降低,但差異不明顯(P0.05)；試驗1、2、3組和GABA組的空腸絨毛長度明顯增加,其中試驗1組與對照組、試驗2組和GABA組差異極顯著(P0.01),試驗2組與對照組差異顯著(P0.05)；空腸隱窩深度明顯降低,試驗3組與對照組差異極顯著(P0.01),試驗2組和GABA組與對照組差異顯著(P0.05)。
【關(guān)鍵詞】：γ-氨基丁酸 益生菌 篩選 生物活性 微生態(tài)
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S816
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-9
• 縮略詞表9-12
• 第一章 文獻(xiàn)綜述12-21
• 1 益生菌12-16
• 1.1 定義12
• 1.2 分類12
• 1.3 生理功能12-14
• 1.4 益生菌的作用機(jī)制14-15
• 1.5 益生菌的應(yīng)用15-16
• 2 γ-氨基丁酸16-20
• 2.1 GABA的分子結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)16-17
• 2.2 GABA的代謝途徑17
• 2.3 GABA的安全性評價17-18
• 2.4 GABA的生理功能18-19
• 2.5 GABA的應(yīng)用19-20
• 2.6 產(chǎn)GABA菌株的應(yīng)用20
• 3 本研究的目的和意義20-21
• 第二章 產(chǎn)γ-氨基丁酸益生菌菌株的篩選21-29
• 1 材料21-22
• 1.1 待分離樣品21
• 1.2 培養(yǎng)基21
• 1.3 主要儀器21-22
• 1.4 主要試劑22
• 2 方法22-24
• 2.1 菌株的分離與純化22
• 2.2 產(chǎn)GABA菌株的初步篩選22-23
• 2.3 發(fā)酵液中GABA的精確定量分析23
• 2.4 產(chǎn)γ-氨基丁酸菌株的初步鑒定23
• 2.5 菌株的16 S rDNA序列分析23-24
• 3 結(jié)果24-28
• 3.1 產(chǎn)GABA菌株的初步篩選24-25
• 3.2 HPLC-MS法精確定量25
• 3.3 菌株的初步鑒定25-27
• 3.4 菌株的16S rDNA序列分析27-28
• 4 討論28-29
• 第三章 產(chǎn)γ-氨基丁酸植物乳桿菌GA8的生物拮抗及耐酸耐膽鹽試驗29-34
• 1 材料29
• 1.1 菌株29
• 1.2 培養(yǎng)基29
• 2 方法29-30
• 2.1 高產(chǎn)GABA菌株對3株病原菌的生物拮抗試驗29-30
• 2.2 菌株的耐酸試驗30
• 2.3 菌株的耐膽鹽試驗30
• 3 結(jié)果30-32
• 3.1 菌株GA8對3株病原菌的生物拮抗作用30-31
• 3.2 耐酸試驗結(jié)果31
• 3.3 菌株GA8耐豬膽鹽試驗31-32
• 4 討論32-34
• 第四章 產(chǎn)GABA植物乳酸菌GA8對小鼠的微生態(tài)效應(yīng)的研究34-49
• 1 材料34-35
• 1.1 菌株34
• 1.2 試驗動物34
• 1.3 主要儀器34
• 1.4 主要試劑和溶液配制34
• 1.5 動物分組及基礎(chǔ)日糧34-35
• 2 方法35-39
• 2.1 對小鼠生長性能的影響35
• 2.2 小鼠抗氧化指標(biāo)的測定35-36
• 2.3 小鼠免疫器官指數(shù)的檢測36
• 2.4 小鼠腸道菌群檢測36
• 2.5 小鼠脾細(xì)胞的增殖試驗36
• 2.6 PCR-DGGE分析小鼠腸道菌群多樣性36-38
• 2.7 腸道切片的制作及腸絨毛的測定38-39
• 2.9 數(shù)據(jù)處理與分析39
• 3 結(jié)果39-45
• 3.1 對生長性能的影響39-40
• 3.2 對小鼠抗氧化能力的影響40
• 3.3 對小鼠腸道菌群的影響40-41
• 3.4 PCR-DGGE技術(shù)分析產(chǎn)GABA植物乳桿菌對小鼠腸道菌群的影響41-43
• 3.5 小鼠免疫器官指數(shù)檢測結(jié)果43-44
• 3.6 產(chǎn)GABA植物乳桿菌對小鼠脾細(xì)胞增殖的影響44
• 3.7 產(chǎn)GABA植物乳桿菌對小鼠小腸黏膜發(fā)育的影響44-45
• 4 討論45-49
• 第五章 結(jié)論49-50
• 參考文獻(xiàn)50-58
• 致謝58-59
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表文章情況59

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前8條

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本文編號：1024666