本文關(guān)鍵詞：硒對(duì)綿羊睪丸間質(zhì)細(xì)胞體外增殖及睪酮分泌的影響

  更多相關(guān)文章： 硒 增殖 凋亡 睪酮 ERK通路 睪丸間質(zhì)細(xì)胞

【摘要】：[目的]硒是動(dòng)物生命活動(dòng)過(guò)程中所必需的微量元素,對(duì)維持正常的細(xì)胞功能和生理過(guò)程具有重要的作用。近年來(lái),大量研究表明硒對(duì)雄性動(dòng)物的繁殖性能有重要影響,且參與調(diào)節(jié)精子發(fā)生過(guò)程中生精細(xì)胞的增殖和凋亡。目前關(guān)于硒對(duì)綿羊睪丸間質(zhì)細(xì)胞的作用鮮有報(bào)道。本試驗(yàn)在綿羊睪丸間質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)液中添加不同濃度的硒,研究硒對(duì)綿羊睪丸間質(zhì)細(xì)胞體外增殖和睪酮分泌的影響,并進(jìn)一步探究硒調(diào)節(jié)間質(zhì)細(xì)胞睪酮合成的分子機(jī)制,以期為闡明硒對(duì)雄性動(dòng)物精子發(fā)生的調(diào)控作用提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。[方法]將綿羊睪丸間質(zhì)細(xì)胞在不同硒濃度的培養(yǎng)液中培養(yǎng)48 h后,使用MTT鑒定睪丸間質(zhì)細(xì)胞的增殖情況；使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋亡細(xì)胞數(shù)目；采用比色法測(cè)定睪丸間質(zhì)細(xì)胞總SOD和GSH-Px活力及ROS含量；采用ELISA方法檢測(cè)睪丸間質(zhì)細(xì)胞睪酮分泌情況；采用熒光定量方法檢測(cè)細(xì)胞周期與凋亡及睪酮合成相關(guān)基因的表達(dá)情況；采用western blot方法檢測(cè)細(xì)胞周期及睪酮合成相關(guān)蛋白和ERK1/2蛋白的表達(dá)情況。[結(jié)果]隨著培養(yǎng)液中硒含量的增加,睪丸間質(zhì)細(xì)胞的增殖率逐漸降低,但2μmol/L組與4μmol/L組差異不顯著(P＜0.05)。各處理組中凋亡細(xì)胞數(shù)差異顯著(P0.05),且隨著硒濃度的升高而增加。隨著硒含量的增加,CASPASE 3. CASPASE 8.P21、P53的mRNA表達(dá)量逐漸升高；P21和P53的蛋白表達(dá)量逐漸升高；CDKl的mRNA和蛋白表達(dá)量逐漸降低；但是P27的mRNA和蛋白表達(dá)水平在各處理組中均差異不顯著。對(duì)照組的增殖率顯著低于2 μmol/L組(Pl0.05),但對(duì)照組與2 μmol/L組的凋亡數(shù)差異不顯著。GSH-Px在2 μmol/L組的活性顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)。ROS在8 μmol/L組的含量顯著高于其它組(P＜0.05)。睪酮合成量呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì),且2μmol/L處理組合成量顯著高于對(duì)照組和8 μmol/L處理組(P0.05),睪酮合成相關(guān)基因StAR和3β-HSD在2 μmol/L組的mRNA及蛋白表達(dá)量顯著高于其它組(P0.05)。在對(duì)照組和2μmol/L組中,綿羊睪丸間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)ERKl/2蛋白表達(dá)水平差異不顯著,但2μmol/L處理可顯著提高P-ERK1/2蛋白表達(dá)水平(P0.05)。添加抑制劑PD0325901處理組中睪酮合成量顯著低于未添加組(P0.05)。同時(shí)添加抑制劑后,2 μmol/L組間質(zhì)細(xì)胞睪酮合成量和3β-HSD、StAR表達(dá)量與對(duì)照組差異不顯著。[結(jié)論]硒能調(diào)控抗氧化酶活性和細(xì)胞周期及凋亡相關(guān)基因的表達(dá),參與調(diào)節(jié)睪丸間質(zhì)細(xì)胞的增殖與凋亡。硒可通過(guò)ERK信號(hào)通路調(diào)節(jié)睪酮合成相關(guān)基因(StAR、3β-HSD)的表達(dá),從而影響綿羊睪丸間質(zhì)細(xì)胞中睪酮的合成。
【關(guān)鍵詞】：硒 增殖 凋亡 睪酮 ERK通路 睪丸間質(zhì)細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：S826
【目錄】：

• 摘要8-9
• 前言9-10
• 第一章 文獻(xiàn)綜述10-18
• 1 硒與雄性動(dòng)物生殖10-12
• 1.1 硒與精子發(fā)生10-12
• 1.2 硒與間質(zhì)細(xì)胞12
• 2 睪丸間質(zhì)細(xì)胞與精子發(fā)生12-14
• 2.1 睪酮與精子發(fā)生12-13
• 2.2 睪酮的生物合成13-14
• 3 睪酮分泌的調(diào)控14-17
• 3.1 下丘腦、垂體分泌激素對(duì)睪丸間質(zhì)細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用14-15
• 3.2 微量元素對(duì)睪丸間質(zhì)細(xì)胞的影響15
• 3.3 MAPK-ERK信號(hào)通路15-17
• 4 小結(jié)17-18
• 第二章 硒對(duì)綿羊睪丸間質(zhì)細(xì)胞體外增殖及凋亡的影響18-39
• 1 材料與方法18-27
• 1.1 試驗(yàn)材料18-20
• 1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與樣品采集18
• 1.1.2 主要儀器設(shè)備18-19
• 1.1.3 主要試劑19
• 1.1.4 試劑的配制19-20
• 1.2 試驗(yàn)方法20-27
• 1.2.1 綿羊睪丸間質(zhì)細(xì)胞的收集20
• 1.2.2 活細(xì)胞計(jì)數(shù)20-21
• 1.2.3 差異貼壁法純化21
• 1.2.4 睪丸間質(zhì)細(xì)胞接種21
• 1.2.5 綿羊睪丸間質(zhì)細(xì)胞的鑒定21
• 1.2.6 細(xì)胞培養(yǎng)21
• 1.2.7 綿羊睪丸間質(zhì)細(xì)胞增殖測(cè)定21-22
• 1.2.8 綿羊睪丸間質(zhì)細(xì)胞凋亡檢測(cè)22
• 1.2.9 超氧化物歧化酶(SOD)測(cè)定22
• 1.2.10 谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)測(cè)定22-23
• 1.2.11 活性氧(ROS)測(cè)定23-24
• 1.2.12 Real-time PCR24-26
• 1.2.13 Western blot26-27
• 1.2.14 數(shù)據(jù)分析27
• 2 結(jié)果與分析27-36
• 2.1 睪丸間質(zhì)細(xì)胞形態(tài)觀察27-28
• 2.2 綿羊睪丸間質(zhì)細(xì)胞3β-HSD染色鑒定28-29
• 2.3 硒對(duì)綿羊睪丸間質(zhì)細(xì)胞增殖的影響29
• 2.4 硒對(duì)綿羊睪丸間質(zhì)細(xì)胞凋亡的影響29-30
• 2.5 硒對(duì)綿羊睪丸間質(zhì)細(xì)胞總SOD活性的影響30-31
• 2.6 硒對(duì)綿羊睪丸間質(zhì)細(xì)胞GSH-Px活性的影響31-32
• 2.7 硒對(duì)綿羊睪丸間質(zhì)細(xì)胞ROS含量的影響32
• 2.8 硒對(duì)細(xì)胞周期和凋亡相關(guān)基因表達(dá)的影響32-35
• 2.9 硒對(duì)P21、P27、P53和CDK1蛋白表達(dá)的影響35-36
• 3 討論36-38
• 4 結(jié)論38-39
• 第三章 硒對(duì)綿羊睪丸間質(zhì)細(xì)胞睪酮合成及相關(guān)信號(hào)通路的影響39-50
• 1 材料與方法39-42
• 1.1 試驗(yàn)材料39-40
• 1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物39
• 1.1.2 主要試劑39-40
• 1.1.3 主要儀器設(shè)備40
• 1.2 試驗(yàn)方法40-42
• 1.2.1 樣品采集40
• 1.2.2 睪丸間質(zhì)細(xì)胞分離與純化40
• 1.2.3 細(xì)胞培養(yǎng)40-41
• 1.2.4 睪酮測(cè)定41
• 1.2.5 Real-time PCR41-42
• 1.2.6 Western blot42
• 1.2.7 數(shù)據(jù)分析42
• 2 結(jié)果與分析42-48
• 2.1 硒對(duì)綿羊睪丸間質(zhì)細(xì)胞睪酮合成的影響42-43
• 2.2 硒對(duì)3β-HSD和StAR表達(dá)的影響43-44
• 2.3 硒對(duì)3β-HSD和StAR蛋白表達(dá)的影響44-45
• 2.4 硒對(duì)綿羊睪丸間質(zhì)細(xì)胞ERK1/2和p-ERK1/2蛋白表達(dá)的影響45
• 2.5 ERK通路對(duì)綿羊睪丸間質(zhì)細(xì)胞睪酮合成及相關(guān)蛋白表達(dá)的影響45-47
• 2.6 ERK通路在硒調(diào)控睪酮合成及相關(guān)蛋白表達(dá)中的作用47-48
• 3 討論48-49
• 4 結(jié)論49-50
• 全文結(jié)論50-51
• 參考文獻(xiàn)51-58
• 附錄：碩士期間發(fā)表論文及獲獎(jiǎng)情況58-60
• Abstract60-62
• 致謝62

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本文編號(hào)：1023550