為研究肝癌患者組織樣本中HBV DNA核心啟動(dòng)子區(qū)(BCP區(qū))和前C區(qū)(Pre C區(qū))的基因突變多樣性及其突變規(guī)律。收集第四軍醫(yī)大學(xué)附屬西京醫(yī)院2015年收治的192例HBV陽(yáng)性的肝癌患者組織樣本,PCR擴(kuò)增HBV BCP/Pre C區(qū)DNA片段并進(jìn)行測(cè)序分析,從測(cè)序失敗的樣本中隨機(jī)抽取21例,采用構(gòu)建單克隆文庫(kù)后測(cè)序的方法進(jìn)行分析。結(jié)果顯示37.89%(72/190)的HBV陽(yáng)性肝癌患者體內(nèi)HBV病毒因呈現(xiàn)多種突變株混合感染的特點(diǎn)而導(dǎo)致PCR產(chǎn)物直接測(cè)序失敗,經(jīng)單克隆測(cè)序揭示,每一例失敗樣本的HBV DNA準(zhǔn)種池中至少有2¹1種突變株共同存在;突變株中缺失突變和插入突變的發(fā)生率高達(dá)80.95%;其它突變形式按照頻率從高到低分別為A1762T/G1764A雙突變90.48%,G1756C/T1803A/Δ(1 757¹ 765)/Δ(1 824¹ 832)四聯(lián)突變80.95%,T1753C/A1762T/G1764A三聯(lián)突變57.14%,A1762T/G1764A/G1896A三聯(lián)突變42.86%,G1756C/Δ(1 ...

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【文章目錄】：
材料與方法
    1組織樣本與病例信息
    2 HBV DNA提取
    3引物設(shè)計(jì)
    4 PCR擴(kuò)增及測(cè)序
    5克隆載體構(gòu)建及測(cè)序
    6測(cè)序結(jié)果分析
結(jié)果
    1 BCP/Pre C區(qū)PCR產(chǎn)物擴(kuò)增及直接測(cè)序
    3 BCP/Pre C區(qū)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物克隆測(cè)序
    4 BCP/Pre C區(qū)突變分析
討論



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