獲得性免疫缺陷綜合癥（AIDS）,即艾滋病,由人類免疫缺陷病毒（HIV）感染人體引起,導(dǎo)致機(jī)體免疫系統(tǒng)功能障礙,進(jìn)而引發(fā)各種并發(fā)癥的疾病。自1981年HIV被發(fā)現(xiàn)至今已經(jīng)將近四十多年的歷史,但目前依然沒有有效的疫苗或者藥物能夠徹底預(yù)防和治愈艾滋,而且全球HIV感染者病例每年仍在增長。截止2016年底,全球約有3670萬人感染HIV,同時(shí)在2016年全球約有100萬人死于艾滋相關(guān)的疾病。因此,研制HIV的疫苗或藥物成為迫在眉睫的艱巨任務(wù)。隨著人們對HIV病毒深入認(rèn)識,對于HIV疫苗的研究,人們從最初單純傾向于依賴機(jī)體細(xì)胞免疫反應(yīng)或者單純依賴體液免疫來產(chǎn)生廣譜中和抗體,這兩個(gè)方向來進(jìn)行HIV疫苗的研究,到現(xiàn)在人們在之前失敗的經(jīng)驗(yàn)中,認(rèn)識到必需同時(shí)結(jié)合細(xì)胞免疫和體液免疫才能夠有希望研制出安全有效的HIV疫苗。近些年的研究也表明,HIV病毒在人體內(nèi)的清除過程,除了依賴細(xì)胞免疫,同時(shí)更重要的是機(jī)體能夠產(chǎn)生廣譜中和抗體。而且人們也認(rèn)識到,HIV-1的膜蛋白gp120是廣譜中和抗體的主要中和表位。本研究中,將7種不同型別的HIV-1gp120蛋白基因序列,包括NL4-3-gp120、89.6-gp1... 

【文章頁數(shù)】：93 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
Abbreviations
第一章 前言
    1. AIDS流行情況
        1.1 AIDS全球流行情況
        1.2 AIDS中國流行情況
    2. HIV生物學(xué)特征
        2.1 HIV分類
        2.2 HIV結(jié)構(gòu)和基因組
        2.3 HIV生活周期
    3. HIV-1廣譜中和表位
        3.1 CD4結(jié)合位點(diǎn)
        3.2 V1/V2
        3.3 V3
        3.4 gp120/gp41交界面
        3.5 MPER
    4. HIV-1疫苗研究發(fā)展歷史與現(xiàn)狀
        4.1 HIV疫苗在免疫學(xué)上的可行性
        4.2 HIV疫苗所面臨的挑戰(zhàn)
        4.3 HIV疫苗研究發(fā)展進(jìn)展
    5. 本研究的思路及目的、意義
第二章 材料與方法
    1. 材料
        1.1 儀器和設(shè)備
        1.2 質(zhì)粒、菌株、細(xì)胞株、蛋白、抗體、實(shí)驗(yàn)動物
        1.3 常用試劑與耗材
        1.4 常用實(shí)驗(yàn)溶液配置
    2. 方法
        2.1 分子克隆實(shí)驗(yàn)方法
        2.2 抗原表達(dá)
        2.3 蛋白的鑒定
        2.4 蛋白的純化
        2.5 動物實(shí)驗(yàn)
        2.6 Tzm-b1細(xì)胞中和實(shí)驗(yàn)
        2.7 中和單抗篩選及制備
        2.8 中和單抗鑒定
第三章 結(jié)果與分析
    1. 膜蛋白gp120表達(dá)與鑒定
        1.1 不同型別的gp120膜蛋白表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建
        1.2 不同型別的gp120膜蛋白表達(dá)純化
        1.3 不同型別的gp120膜蛋白性質(zhì)鑒定
        1.4 本節(jié)小結(jié)
    2. 小鼠免疫、免疫血清監(jiān)測與中和單抗制備及其性質(zhì)鑒定
        2.1 膜蛋白NL4-3-gp120免疫方案
        2.2 不同免疫階段小鼠免疫血清與膜蛋白NL4-3-gp120結(jié)合活性檢測
        2.3 不同免疫階段小鼠免疫血清與膜蛋白NL4-3 HIV-1病毒中和滴度檢測
        2.4 單克隆抗體制備
        2.5 單克隆抗體與不同型別gp120反應(yīng)性的ELISA檢測
        2.6 單克隆抗體中和能力檢測
        2.7 本節(jié)小結(jié)
    3. 中和單抗10G6、4A6、3C1、1E1關(guān)鍵氨基酸分析
        3.1 中和單抗對NL4-3-gp120以及V3融合蛋白的Western Blot檢測
        3.2 中和單抗對不同截短V3合成肽的ELISA檢測
        3.3 本節(jié)小結(jié)
    4. 中和單抗10G6、4A6、3C1、1E1性質(zhì)差異性分析
        4.1 中和單抗對NL4-3型別HIV病毒的免疫熒光檢測
        4.2 中和單抗10G6中和能力受N-聚糖影響分析
        4.3 中和單抗中和能力受CD4影響比較
        4.4 本節(jié)小結(jié)
第四章 討論
    1. 免疫原的選擇
    2. 免疫策略的設(shè)計(jì)
    3. 中和抗體的篩選方法
小結(jié)與展望
    1. 小結(jié)
    2. 展望
參考文獻(xiàn)
在校期間科研成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]通過流式分選技術(shù)篩選HIV-1特異性單個(gè)B細(xì)胞[J]. 李丹,鞠斌,王碩,李亞鋒,梁華,邵一鳴.  中國熱帶醫(yī)學(xué). 2016(11)
[2]Merck Ad5艾滋病疫苗的研究進(jìn)展[J]. 劉強(qiáng),王佑春.  中國生物制品學(xué)雜志. 2011(01)
[3]大鼠雜交瘤技術(shù)及抗HIV、HBsAg大鼠單克隆抗體的制備[J]. 方家椿,M.Bodeus,G.Burtonboy.  生物工程學(xué)報(bào). 1991(01)



本文編號：3717018