本文選題：隱孢子蟲 + 蔬菜�。� 參考：《河南農(nóng)業(yè)大學(xué)》2013年碩士論文

【摘要】：隱孢子蟲(Crycolosporidium)是一種專一的、寄生于胞內(nèi)的寄生原蟲，寄生于人和動物的胃腸道。能夠引起嚴(yán)重的腹瀉。食源性隱孢子蟲病有明顯的季節(jié)性，春季、夏季為易發(fā)季節(jié)。其傳播途徑非常廣泛，可以以水源、食物、空氣為介質(zhì)進行傳播，還能通過直接接觸等途徑傳播，但是通過空氣傳播的報道非常少，通過以水源為介質(zhì)傳播的報道非常多，其在灌溉用水中被發(fā)現(xiàn)，是公認(rèn)的世界范圍內(nèi)的水源性傳播的病原體。食源性暴發(fā)的報道也非常多，1976年第一次有記錄的人類感染隱孢子蟲病暴發(fā)。此后很多國家相繼報道該病的暴發(fā)。目前全球6大洲至少80個國家，，300多個地區(qū)報道了隱孢子蟲病。近十幾年來已經(jīng)報道了多起食源性隱孢子蟲病的暴發(fā)。隱孢子蟲對人類健康造成了威脅，并且造成了不必要的經(jīng)濟損失。 檢測蔬菜表面的隱孢子蟲卵囊，阻止其傳播可以減免其造成的危害。Cook、Palmer和Joan等先后建立了水果、蔬菜表面檢測隱孢子蟲的方法。這些方法是基于4個基本階段：從蔬菜中提取出卵囊；濃集并分離卵囊；使分離出的卵囊可視化；卵囊能在顯微鏡下識別。 為了了解鄭州開封兩地患者腸道寄生蟲感染情況，2012年7月4日至2012年8月31日期間，在鄭州河南省人民醫(yī)院，開封解放軍第155醫(yī)院和淮河醫(yī)院采集的共2698份樣品。采用盧戈氏碘染色法和飽和蔗糖漂浮法對所有樣品進行了檢查。共發(fā)現(xiàn)了5種腸道寄生蟲，分別是環(huán)孢子蟲、賈第蟲、阿米巴原蟲、線蟲和鉤蟲。寄生蟲陽性糞便樣品29例，腸道總感染率為1.07%（29/2698）。其中環(huán)孢子蟲和賈第蟲感染率并列最高，均為0.4%（11/2698），其次為阿米巴原蟲腸道感染，感染率為0.19%(5/2698)，線蟲和鉤蟲，感染率都為0.04%(1/2698)。此次調(diào)查沒有發(fā)現(xiàn)混合感染，也沒有發(fā)現(xiàn)隱孢子蟲。 為了建立一種能檢測蔬菜表面隱孢子蟲的方法，用不同數(shù)量梯度的隱孢子蟲卵囊對蔬菜進行接種，分別設(shè)置為5×101個、5×102個、5×103個、5×104個；再對蔬菜進行洗脫，采用不同的洗滌劑，分別為Alconox洗潔精、雕牌洗潔精、立白洗潔精、白貓洗潔精和去離子水；對卵囊的收集，采用反復(fù)離心收集沉淀法；被接種的蔬菜的用量也被加以對比，最后基于隱孢子蟲18S rRNA基因位點對洗脫后的卵囊進行PCR擴增，建立了一個系統(tǒng)的檢測方法。結(jié)果表明用50g西葫蘆、15g生菜時，卵囊最小洗脫量均為5×101個；洗脫時間10min和20min結(jié)果無明顯差異；接種12h和接種24h結(jié)果無明顯差異；不同洗滌劑（Alconox洗潔精、雕牌洗潔精、立白洗潔精、白貓洗潔精、去離子水）洗脫結(jié)果無明顯差異。成功建立一種能夠檢測農(nóng)產(chǎn)品表面污染隱孢子蟲卵囊的檢測技術(shù)，為進一步開展病原溯源研究提供了技術(shù)支持。
[Abstract]:Cryptosporidium (Crycolosporidium) is a specific parasitic protozoa, parasitic on the gastrointestinal tract of humans and animals. Can cause severe diarrhea. Food-borne cryptosporidiosis has obvious seasonality, spring and summer are susceptible to occurrence. It can be spread through water, food and air as a medium, and through direct contact. However, there are very few reports of air transmission, and a lot of reports spread through water source as the medium. It is found in irrigation water and is recognized as a worldwide water-borne pathogen. Food-borne outbreaks have also been reported, with the first recorded human outbreak of Cryptosporidiosis in 1976. Since then, many countries have reported outbreaks of the disease. Cryptosporidiosis has been reported in more than 300 regions in at least 80 countries on 6 continents. Outbreaks of food-borne Cryptosporidiosis have been reported in recent decades. Cryptosporidium poses a threat to human health and causes unnecessary economic losses. The method of detecting Cryptosporidium oocysts on vegetable surface and preventing them from spreading can reduce the damage caused by Cryptosporidium parvum. Cooku Palmer and Joan have established a method for detecting Cryptosporidium on vegetable surface. These methods are based on four basic stages: extraction of egg sac from vegetables; concentration and separation of egg sac; visualization of separated egg sac; egg sac can be recognized under microscope. From July 4, 2012 to August 31, 2012, 2698 samples were collected from the 155th Hospital of Kaifeng PLA and Huaihe Hospital in Henan Provincial people's Hospital of Zhengzhou. All samples were examined by Lugo's iodine staining and saturated sucrose floatation. Five kinds of intestinal parasites were found, namely cyclosporium, giardia, amoeba protozoa, nematode and hookworm. The total intestinal infection rate of 29 cases of parasite positive fecal samples was 1.077% 2698%. The infection rates of Cyclosporidium and Giardia were the highest (0.411 / 2698), followed by amoebic protozoa (0.19 / 2698), nematode and hookworm (0.04 / 2698). No mixed infection was found in the investigation, nor was Cryptosporidium found. In order to establish a method to detect Cryptosporidium spore on vegetable surface, the vegetable was inoculated with different quantity gradient Cryptosporidium oocysts, which were 5 脳 10 1, 5 脳 10 2, 5 脳 10 3, 5 脳 10 4, and then eluted with different detergents. They are Alconox detergent, Diaodai detergent, Libai detergent, White Cat detergent and deionized Water; the egg sac is collected by repeated centrifugation and precipitation; and the amount of vegetables inoculated is also compared. Finally, based on the 18s rRNA locus of Cryptosporidium, a systematic detection method was established by PCR amplification of the eluted oocysts. The results showed that the minimum amount of egg sac elution was 5 脳 101 when 50 g squash was used in 15 g lettuce, there was no significant difference between 10min and 20min in elution time, there was no significant difference between inoculation at 12 h and 24 h after inoculation. There was no significant difference in the elution results between Li Bai detergent, white cat detergent and deionized water. A technique for detecting Cryptosporidium oocysts in agricultural products was successfully established, which provided technical support for the further study of pathogen traceability.
【學(xué)位授予單位】：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：S436.3;R531.5

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本文編號：1977565