發(fā)布時(shí)間：2017-10-05 12:39

  本文關(guān)鍵詞：條件性Smad4基因敲除鼠模型的建立和鑒定及初步表型

  更多相關(guān)文章： Smad 條件性基因敲除 Le-Cre 報(bào)告基因 眼表型

【摘要】：目的:利用Cre/LoxP系統(tǒng)建立眼組織特異性Smad4基因敲除小鼠并進(jìn)行初步表型分析。方法:通過PAX6啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的Cre轉(zhuǎn)基因小鼠(Le-Cre)作為介導(dǎo)敲除的工具鼠,將其與Smad4條件基因小鼠(Smad4fl/fl)結(jié)合獲得Le-Cre特異性Smad4基因敲除小鼠或變異小鼠(Le-Cre;Smad4fl/fl)。為了證實(shí)條件性基因敲除的特異性及有效性,通過PCR技術(shù)對小鼠或鼠胚進(jìn)行了相關(guān)基因分析,特定組織綠色熒光蛋白(GFP)的表達(dá)及Smad4蛋白的檢測,同時(shí)利用ROSA26報(bào)導(dǎo)基因小鼠藉LacZ染色顯示Le-Cre在眼組織的表達(dá);并對Smad4變異小鼠的表型進(jìn)行了觀察。結(jié)果:早在E10.0左右,鼠胚晶狀體位置及眼周外胚層發(fā)現(xiàn)強(qiáng)熒光的GFP表達(dá),表明Le-Cre明確出現(xiàn)在特定的靶組織。通過小鼠基因型分析,確定了小鼠或鼠胚是否攜帶Cre重組酶基因、Smad4條件性等位基因和/或Rosa報(bào)導(dǎo)基因,對小鼠晶體DNA的基因分析也證實(shí)Smad4基因在某些特異性眼組織內(nèi)得到剔除。通過在Cre轉(zhuǎn)基因小鼠導(dǎo)入報(bào)導(dǎo)基因,并籍LacZ染色對Cre重組酶的表達(dá)進(jìn)行檢測,顯示了Cre重組酶的時(shí)空表達(dá)及其表達(dá)的組織特異性。Smad4免疫組化染色顯示,在正常發(fā)育胚鼠眼可見廣泛的Smad4表達(dá),早期主要存在于胞漿,隨著胚眼發(fā)育向核內(nèi)轉(zhuǎn)移;而在Smad4變異鼠胚眼,結(jié)果表明Smad4在Cre重組酶所表達(dá)的組織內(nèi)缺乏表達(dá)。觀察發(fā)現(xiàn)Smad4變異鼠可以順利存活,但表現(xiàn)出眼球縮小、眼窩凹陷、眼瞼畸形開放、閉合不能及眼周毛發(fā)脫失的外觀。結(jié)論:通過基因和蛋白水平的檢測證實(shí)了Le-Cre;Smad4基因敲除鼠的建立及Smad4在變異小鼠中表達(dá)的缺乏。Smad4在眼組織的敲除導(dǎo)致了眼及附屬器的明顯異常,為深入了解眼球發(fā)育及Smad4對其影響的機(jī)制提供了一個(gè)可信的動(dòng)物模型。
【作者單位】： 長沙愛爾眼科醫(yī)院;
【關(guān)鍵詞】： Smad 條件性基因敲除 Le-Cre 報(bào)告基因 眼表型
【分類號(hào)】：R-332
【正文快照】： 0引言 Smad4是Smads家族成員之一?,是轉(zhuǎn)導(dǎo)TGF-p倍號(hào) 的重要胞漿內(nèi)信號(hào)級(jí)聯(lián)分子,它與活化的受體激活型Smad4分子形成復(fù)合物,移位至細(xì)胞核,與其它轉(zhuǎn)錄因子協(xié)同作用,調(diào)節(jié)TGF-p丨、V:答JiW的轉(zhuǎn)錄Ml。Smad4基因 被完全敲除后導(dǎo)致動(dòng)物在胚胎期即死亡121,因此無法對其展開進(jìn)一步的研

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本文編號(hào)：976860