本文關(guān)鍵詞：體外誘導(dǎo)人iPS細(xì)胞向腎臟細(xì)胞定向分化的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：目的探討人誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞(iPS)體外定向分化為腎臟細(xì)胞的方法,為應(yīng)用干細(xì)胞進(jìn)行腎臟再生治療奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法以正常人iPS細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,運(yùn)用生腎因子活化素A(Activin-A)、骨形成蛋白7(BMP7)、人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(hVEGF)、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(b-FGF)、鋰鹽、維甲酸(RA)等細(xì)胞因子聯(lián)合腎臟上皮細(xì)胞培養(yǎng)液對(duì)iPS進(jìn)行定向誘導(dǎo)腎臟細(xì)胞分化,分別于誘導(dǎo)后第14、21和28日,細(xì)胞免疫熒光染色及Real-Time PCR檢測(cè)腎臟發(fā)育相關(guān)蛋白Brachyury(Bry)、Paired box gene 2(Pax2)、水通道蛋白1(AQP1)和E-鈣粘素(E-cad)蛋白及mRNA的表達(dá)水平,RT-PCR檢測(cè)分化各階段多能性基因Nanog和OCT4的表達(dá)水平。結(jié)果誘導(dǎo)培養(yǎng)液分別誘導(dǎo)14、21和28 d后,細(xì)胞免疫熒光染色觀察發(fā)現(xiàn);分化后的細(xì)胞分別表達(dá)Bry、Pax2、AQP1和E-cad蛋白,而在未分化的iPS細(xì)胞中未見(jiàn)表達(dá)。Real-Time PCR結(jié)果顯示:誘導(dǎo)后細(xì)胞中Bry、Pax2、AQP1、E-cad mRNA的表達(dá)分別較未分化的iPS細(xì)胞上調(diào)了4、30、37和25倍(P0.05),分化各階段多能性基因OCT4和Nanog的表達(dá)水平逐漸下調(diào)(P0.05)。結(jié)論細(xì)胞因子聯(lián)合腎臟上皮細(xì)胞培養(yǎng)液可有效誘導(dǎo)人iPS細(xì)胞定向分化為腎臟細(xì)胞。
【作者單位】： 上海交通大學(xué)附屬第六人民醫(yī)院四肢顯微外科研究所;中山大學(xué)附屬第六醫(yī)院檢驗(yàn)科;
【關(guān)鍵詞】： 細(xì)胞因子 分化 誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞 腎臟細(xì)胞
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81170640,30960385)~~
【分類號(hào)】：R329
【正文快照】： 慢性腎臟疾病是臨床常見(jiàn)的多發(fā)病之一。據(jù)最新流行病學(xué)調(diào)查[1]顯示,目前我國(guó)慢性腎臟疾病患者高達(dá)1.2億,患病率高達(dá)10.8%,且呈現(xiàn)逐年不斷增長(zhǎng)的趨勢(shì)。腎臟移植術(shù)是臨床最有效的治療手段,但該技術(shù)存在供體短缺、同種異體排斥反應(yīng)和終身服用免疫抑制劑等問(wèn)題。因此,尋找到具有強(qiáng)

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