本文關(guān)鍵詞：HIF-1α轉(zhuǎn)染方法的優(yōu)化及其對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞存活及分化功能的影響

  更多相關(guān)文章： 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 低氧誘導(dǎo)因子- 脂質(zhì)體 轉(zhuǎn)染

【摘要】：目的探索應(yīng)用脂質(zhì)體作為載體將低氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)轉(zhuǎn)染至間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)的轉(zhuǎn)染方法。方法應(yīng)用脂質(zhì)體作為載體將HIF-1α轉(zhuǎn)染至P3代MSCs,熒光觀察綠色熒光蛋白(GFP)表達(dá),評(píng)估轉(zhuǎn)染效率。比較在不同情況下細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率。將轉(zhuǎn)染的MSCs、空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的MSCs和未轉(zhuǎn)染的MSCs置于缺氧環(huán)境下(CoCl2模擬缺氧),比較3種細(xì)胞HIF-1αmRNA、HIF-1α蛋白的表達(dá)。鑒定轉(zhuǎn)染的MSCs向成骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞的分化能力,及在缺氧環(huán)境中的存活率。結(jié)果應(yīng)用脂質(zhì)體法可以成功將pcDNA3.0-HIF-1α-eGFP轉(zhuǎn)染至MSCs。當(dāng)細(xì)胞匯合度在80%以上,DNA與質(zhì)粒的比為(μg/μL)1∶1.25,且轉(zhuǎn)染時(shí)間為4 h時(shí)轉(zhuǎn)染效率最高,為21%。轉(zhuǎn)染HIF-1α的MSCs在缺氧環(huán)境中可被成功向脂肪細(xì)胞和成骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化,HIF-1α轉(zhuǎn)染可以提高缺氧時(shí)MSCs存活率(P0.05)。在缺氧條件下pcDNA3.0-HIF-1α-eGFP瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的MSCs較空質(zhì)粒(pcDNA3.0-eGFP)轉(zhuǎn)染的MSCs和未轉(zhuǎn)染的MSCs能高表達(dá)HIF-1αmRNA及HIF-1α蛋白(P0.05)。結(jié)論應(yīng)用脂質(zhì)體作為載體可以將HIF-1α轉(zhuǎn)染至MSCs,HIF-1α轉(zhuǎn)染的MSCs在缺氧時(shí)高表達(dá)HIF-1αmRNA及蛋白。
【作者單位】： 沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院附屬奉天醫(yī)院手外科;
【關(guān)鍵詞】： 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 低氧誘導(dǎo)因子- 脂質(zhì)體 轉(zhuǎn)染
【分類號(hào)】：R329.2
【正文快照】： 低氧誘導(dǎo)因子-1(hypoxia inducible factor-1,HIF-1)是一種關(guān)鍵的平衡氧穩(wěn)態(tài)和調(diào)節(jié)低氧反應(yīng)的轉(zhuǎn)錄因子,廣泛存在于低氧條件下的哺乳動(dòng)物和人體內(nèi),可以調(diào)控多種靶基因的轉(zhuǎn)錄,在許多低氧性疾病的病理生理過(guò)程中都發(fā)揮著重要作用。由于它是在低氧條件下誘導(dǎo)而產(chǎn)生,因此被命名為低

【共引文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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