本文關(guān)鍵詞：閾值法檢測人用狂犬病疫苗Vero細胞DNA殘留量方法的建立及初步驗證

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【摘要】：目的建立一種閾值法(threshold method)檢測人用狂犬病疫苗Vero細胞DNA殘留量的方法。方法取人用狂犬病疫苗進行DNA抽提后,與內(nèi)控品經(jīng)高溫變性、冰浴后,37℃水浴1 h,加入生物素標(biāo)記的單鏈DNA結(jié)合蛋白(single stranded binding protein,SSB)和尿素酶標(biāo)記的抗單鏈DNA(single stranded DNA,ssDNA)的單抗,與變性的宿主細胞DNA結(jié)合形成復(fù)合物,經(jīng)過濾、洗滌后,將復(fù)合物吸附于硝酸纖維素膜上,置Threshold儀器樣品檢測池中,檢測DNA含量。對建立的閾值法測定人用狂犬病疫苗Vero細胞DNA殘留量的方法進行線性范圍、準(zhǔn)確性及精密度驗證。結(jié)果該方法的最低檢測限為3 pg/500μl,線性范圍為3~200 pg/500μl,DNA內(nèi)控品濃度的對數(shù)與相應(yīng)的檢測信號值的對數(shù)呈良好的線性關(guān)系(R2=0.98);該方法檢測不同企業(yè)疫苗樣品的回收率為99%~124%,變異系數(shù)為8.5%,加入內(nèi)控品后再抽提,不同企業(yè)疫苗樣品的回收率為48%~128%,變異系數(shù)為32.9%;同1批疫苗重復(fù)10次的檢測結(jié)果的CV值為7.8%,同1批疫苗不同時間檢測結(jié)果的CV值為11.8%。結(jié)論閾值法可檢測人用狂犬病疫苗Vero細胞宿主DNA殘留量,該方法操作簡便,靈敏度好,準(zhǔn)確性及精密度高,對人用狂犬病疫苗生產(chǎn)和質(zhì)量控制具有較好的指導(dǎo)意義。
【作者單位】： 中國食品藥品檢定研究院衛(wèi)生部生物技術(shù)產(chǎn)品檢定方法及其標(biāo)準(zhǔn)化重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： 閾值法 狂犬病疫苗 DNA 含量測定
【基金】：“十二五”863計劃課題“疫苗效果和質(zhì)量評價新技術(shù)研究”(2012AA02A402)
【分類號】：R373.9
【正文快照】： 以Vero細胞為基質(zhì)生產(chǎn)的人用狂犬病疫苗,因Vero細胞為連續(xù)傳代細胞系,理論上其細胞DNA具有潛在的致瘤性。目前文獻報道其140代左右無致瘤性[1-2],國內(nèi)疫苗生產(chǎn)企業(yè)Vero細胞代次限定在150代之內(nèi),但對于以其為基質(zhì)生產(chǎn)的疫苗中宿主細胞DNA殘留量,各國藥品監(jiān)管機構(gòu)均進行了嚴(yán)格限

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 盧瑛;劉照關(guān);徐宏;古宏晨;;一種快速提取基因組DNA的方法[J];中國生物工程雜志;2008年03期

2 曹守春;董關(guān)木;李加;唐建蓉;吳小紅;劉景華;石磊泰;;Vero細胞LTR基因的克隆及其DNA定量PCR檢測方法的建立[J];中國生物制品學(xué)雜志;2011年05期

3 王蘭;李永紅;饒春明;;實時定量PCR檢測重組技術(shù)產(chǎn)品中宿主基因組DNA殘留[J];藥物分析雜志;2009年10期

4 王蘭;王軍志;;關(guān)于生物制品殘余DNA質(zhì)量控制問題[J];中國新藥雜志;2011年08期

5 胡廣宏;寇桂英;包紅;余黎;周旭;;SYBR-Green實時定量PCR用于Vero宿主細胞DNA殘留量的檢測[J];中國新藥雜志;2012年10期

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 曹果清;莫清珊;陳鳳仙;;酚/氯仿抽提法提取綿羊凝血塊中基因組DNA[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2009年34期

2 曹果清;莫清珊;陳鳳仙;;酚/氯仿抽提法提取綿羊凝血塊中基因組DNA(摘要)(英文)[J];Agricultural Science & Technology;2009年05期

3 趙娟;王倩;李冬妹;曾妍;何玲;曹薇薇;黃瑾;;從全血中提取基因組DNA方法的對比研究[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展;2009年23期

4 張俊河;王芳;房娟;曹冰睿;李云;郭彥梅;向梅;王天云;;一種通用的基因組DNA提取方法[J];生物技術(shù);2010年05期

5 曹守春;董關(guān)木;李加;唐建蓉;吳小紅;劉景華;石磊泰;;Vero細胞LTR基因的克隆及其DNA定量PCR檢測方法的建立[J];中國生物制品學(xué)雜志;2011年05期

6 陶磊;饒春明;王蘭;韓春梅;李響;高凱;王軍志;;人源化抗表皮生長因子受體單克隆抗體質(zhì)控方法的建立[J];中國生物制品學(xué)雜志;2013年01期

7 牛冬云;連煒;何靜;鄔智剛;柯瀟;;康柏西普制品中CHO細胞DNA殘留量的檢測[J];中國生物制品學(xué)雜志;2013年07期

8 曹晨華;劉曉志;段月嬌;劉素霞;趙偉;常亮;紀(jì)麗曼;高健;;實時定量PCR法檢測生物技術(shù)藥物中宿主基因組DNA殘留[J];生物技術(shù)進展;2014年02期

9 王蘭;李萌;郭瑋;于傳飛;高凱;;磁珠分離結(jié)合定量PCR法檢測單克隆抗體產(chǎn)品中CHO細胞DNA殘留量[J];中國生物制品學(xué)雜志;2014年04期

10 代艷麗;周立志;;一種改進的方法提取白頭鶴糞便DNA[J];野生動物;2011年04期

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 張景閣;金磁微粒純化細菌基因組DNA方法的研究[D];西北大學(xué);2011年

2 代艷麗;越冬白頭鶴種群遺傳多樣性的初步研究[D];安徽大學(xué);2011年

3 吳浩飛;狂犬病疫苗殘余DNA去除方法研究[D];湖北大學(xué);2012年

4 殷思貝;醫(yī)用殼多糖表面包覆技術(shù)處理納米氧化鐵磁珠的技術(shù)研發(fā)[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2013年

【二級參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 張立國,張琚;實時定量PCR技術(shù)的介紹[J];生物技術(shù);2003年02期

2 李亮助;劉勇;王貽杰;程海;孫茂盛;邵一鳴;;Real-time PCR檢測核酸疫苗中宿主基因組殘留DNA[J];中國生物制品學(xué)雜志;2007年06期

3 苗玉發(fā);王欣;沈連忠;李波;;治療性HIV腺病毒載體疫苗的生物分布[J];毒理學(xué)雜志;2007年04期

4 饒春明;趙陽;李永紅;王軍志;;應(yīng)用熒光法測定重組細胞因子中殘余DNA含量[J];藥物分析雜志;2005年12期

5 李加;唐建蓉;劉景華;曲小肅;董關(guān)木;;斑點雜交法測定Vero細胞DNA殘留量的探針選擇[J];藥物分析雜志;2008年11期

6 王蘭;高凱;畢華;李永紅;饒春明;;熒光法和DNA雜交法檢測重組技術(shù)產(chǎn)品中殘余DNA的比較[J];藥物分析雜志;2009年07期

7 王蘭;李永紅;饒春明;;實時定量PCR檢測重組技術(shù)產(chǎn)品中宿主基因組DNA殘留[J];藥物分析雜志;2009年10期

8 陳宇光;非洲綠猴腎細胞株AGMr(HindⅢ)-1高度重復(fù)順序的克隆及初步應(yīng)用[J];中國病毒學(xué);1997年02期

9 趙書平,張俊潔,尤建,楊玉紅,郭峰;一種碘化鉀提取外周血基因組DNA的方法[J];中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志;1999年06期

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 龔訓(xùn)良;;吸附狂犬病疫苗：一種新的人用狂犬病疫苗[J];國際生物制品學(xué)雜志;1989年03期

2 李福安,竇志勇,魯宏;β-丙內(nèi)酯在人用狂犬病疫苗制備中的應(yīng)用[J];中國生物制品學(xué)雜志;1999年01期

3 江燕;羅永煌;;抗狂犬病病毒單克隆抗體的研究進展[J];畜牧市場;2010年04期

4 宣松林,李根明,虞現(xiàn)河,王自立,席三強,張艷榮,阮峰,劉燕,趙新華,常玉琴,程夷;人血狂犬病免疫球蛋白的研制[J];中國生物制品學(xué)雜志;1994年01期

5 竇志勇;秦賢;于偉;;應(yīng)用BS中空纖維超濾膜濾過的小牛血清制備人用狂犬病疫苗[J];中國生物制品學(xué)雜志;1992年04期

6 肖鼎昌;;一種新的恒河猴二倍體狂犬病疫苗:Ⅱ.模擬狂犬病暴露后預(yù)防性治療的臨床研究結(jié)果[J];國際生物制品學(xué)雜志;1984年03期

7 ;人用狂犬病疫苗效力檢定方法的改進[J];微生物學(xué)免疫學(xué)進展;1974年01期

8 李國宴，謝小梅，席亮，，封多佳;人用狂犬病疫苗濃縮前后內(nèi)毒素含量變化的研究[J];微生物學(xué)免疫學(xué)進展;1996年02期

9 顧悅翔;梁本;褚菊仁;李廣善;付琳;朱關(guān)福;;Vero細胞微載體懸浮培養(yǎng)制備人用狂犬病疫苗的研究[J];中國生物制品學(xué)雜志;1992年03期

10 王忠海,蘇文全,孫英,劉洪旭;應(yīng)用鱟試劑法檢測人用純化狂犬病疫苗的內(nèi)毒素[J];中國生物制品學(xué)雜志;2002年04期

本文編號：900812