本文關(guān)鍵詞：CFP10-ESAT-6-MPB64在桿狀病毒系統(tǒng)中的表達(dá)純化及免疫原性鑒定

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【摘要】：目的:在桿狀病毒昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)(baculovirus expression vector system,BEVS)中表達(dá)結(jié)核分枝桿菌蛋白CFP10-ESAT-6-MPB64,并鑒定其免疫原性。方法:目的基因CFP10-ESAT-6-MPB64連接到pFastBac轉(zhuǎn)移載體并轉(zhuǎn)化DH10Bac感受態(tài),通過Tn7轉(zhuǎn)座片段將目的基因轉(zhuǎn)座到Bacmid中,得到Bacmid-CFP10-ESAT-6-MPB64穿梭載體,脂質(zhì)體包被后轉(zhuǎn)染Spodoptera frugiperda(Sf9)細(xì)胞收獲病毒,病毒轉(zhuǎn)染細(xì)胞后收集上清通過Co親和層析純化得到目的蛋白。純化的蛋白免疫Balb/c小鼠并檢測血清中特異性抗體滴度及PPD抗體,ELISA檢測CFP10-ESAT-6-MPB64蛋白刺激脾臟細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ的濃度,MTT法檢測目的蛋白對免疫后小鼠脾臟細(xì)胞的增殖作用。結(jié)果:CFP10-ESAT-6-MPB64在昆蟲細(xì)胞中成功表達(dá),純化后蛋白純度達(dá)90%以上,蛋白產(chǎn)量為42mg/L,純化蛋白能有效刺激Balb/c小鼠產(chǎn)生抗體,提高小鼠脾臟細(xì)胞培養(yǎng)基中IFN-γ的含量,目的蛋白在1~50μg/ml之間對脾臟細(xì)胞有明顯的促增殖作用。
【作者單位】： 溫州醫(yī)科大學(xué)浙江省生物技術(shù)與制藥工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)生物反應(yīng)器與藥物開發(fā)教育部工程研究中心;濟(jì)南康和醫(yī)藥科技有限公司;巨野縣人民醫(yī)院;
【關(guān)鍵詞】： BEVS Sf細(xì)胞 結(jié)核分枝桿菌
【基金】：國家“863”計劃(SQ2011AA100606) 浙江省自然科學(xué)基金(LY13H300006) 2012年省級重點(diǎn)科技創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目(2012R10042-10) 2012年吉林省高層次創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)引進(jìn)人才項(xiàng)目資助項(xiàng)目
【分類號】：R392.11
【正文快照】： 結(jié)核病(tuberculosis,TB)是由結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)引起的通過空氣傳播的人獸共患傳染病。據(jù)世界衛(wèi)生組織報道,在2011年,約有870萬名新增結(jié)核病例(13%感染了艾滋病病毒)和140萬人死于結(jié)核病[1]。結(jié)核病已成為我國乃至世界危害最嚴(yán)重的疾病之一。越來

【共引文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號：900822