本文關(guān)鍵詞：小鼠成纖維樣滑膜細(xì)胞原代培養(yǎng)的影響因素研究

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【摘要】：目的基因敲除小鼠已廣泛用于關(guān)節(jié)疾病的研究中。文中探討小鼠關(guān)節(jié)處理方式、消化酶種類及膠原酶消化時(shí)間3種因素對(duì)獲取原代成纖維樣滑膜細(xì)胞(fibroblast-like synoviocytes,FLSs)數(shù)量的影響。方法將12只雄性SPF級(jí)小鼠,采用打開關(guān)節(jié)(6只)與不打開關(guān)節(jié)(6只)的方法處理雙后肢,使用Ⅳ、Ⅱ型膠原酶消化分離原代細(xì)胞,差速消化法逐代純化FLSs。倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài),流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞種類、活力與純度。結(jié)果不打開關(guān)節(jié)處理獲得的FLSs數(shù)量[(24933±503)個(gè)]顯著高于打開關(guān)節(jié)處理獲得的數(shù)量[(19133±115)個(gè)],差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);連續(xù)收集消化單支后肢1~7h細(xì)胞懸液,FLSs數(shù)分別為(700±300)、(600±100)、(15200±900)、(5100±800)、(2700±300)、(900±200)、(300±100)個(gè),以3 h的FLSs數(shù)量最多。Ⅳ型膠原酶消化所得FLSs細(xì)胞總數(shù)[(24900±500)個(gè)]明顯高于Ⅱ型膠原酶[(18100±400)個(gè)],差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論消化培養(yǎng)小鼠原代FLSs,建議不打開關(guān)節(jié),使用Ⅳ型膠原酶消化,取2~6h消化的細(xì)胞懸液進(jìn)行后續(xù)培養(yǎng)。
【作者單位】： 遵義醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)教研室;成都醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院骨科;成都醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： 成纖維樣滑膜細(xì)胞 體外培養(yǎng) 細(xì)胞鑒定 小鼠
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81273530,81202363,81302786) 四川省高校科研創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)課題(13TD0028)
【分類號(hào)】：R329.2
【正文快照】： 0引言成纖維樣滑膜細(xì)胞(fibroblast-like synoviocytes,FLSs)是組成滑膜層的最大細(xì)胞群體,在維持關(guān)節(jié)正常生理功能和內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)方面發(fā)揮重要作用[1]。異常增生活化的FLSs在關(guān)節(jié)病變中起關(guān)鍵性作用,其已廣泛應(yīng)用于關(guān)節(jié)疾病發(fā)病機(jī)制的研究中[2]。目前已建立了較為成熟的體外人[3，

本文編號(hào)：900574